Stealth siRNA对HBV复制和表达的抑制

目的设计siRNA并检测其对HBV的抑制作用。方法针对HBV基因组设计siRNA基因序列,化学修饰合成3种Stealth siRNA,转染带有HBV的2．2．15细胞,ELISA法检测其对HBV复制和表达的影响。结果3种Stealth siRNA对HBV的复制和表达在不同时间有不同程度的抑制作用。72h后就可检测出抑制,其中siRNA508效果最显著。结论合成的Stealth siRNA可以抑制HBV的复制和表达,有望成为控制HBV感染的一种手段。     

引起HBVe系统双阳模式的另一种机制

目的:探讨HBV e系统双阳模式产生的一般性原因。方法:常规乙肝标志物免疫学检测筛选出61份e系统双阳模式血清样本,对每一份样本进行HBeAg RIA定量、前S1抗原检测以及HBV DNA荧光定量。结果:61份双阳模式血清的HBeAg RIA定量在1.5×105~2.1×105ng/ml区间内;前S1抗原检测54份阳性,阳性率88.5%;HBV DNA荧光定量全部阳性,平均拷贝数在107以上。结论:e系统双阳模式中的HBeAb为假阳性,双阳模式实为病毒高载量的表现,而不是血清转换。     

非典型肺炎血清SARS冠状病毒抗体的检测及其意义

【目的】探讨非典型肺炎患者血清SARS冠状病毒抗体IgM、IgG检测意义。【方法】应用ELISA法对16例SARS患者、147例发热隔离患者、23例体格检查健康者进行血清SARS抗体IgM、IgG检测。【结果】12例SARS患者入院时8例检出SARS抗体IgM阳性,出院时9例检出SARS抗体IgG阳性;其中7例SARS患者康复出院半年后复查均检测出高滴度SARS抗体IgG,同时有2例仍检出SARS抗体IgM。2例重症患者血清动态结果观察到,从入院到出院的标本均同时检测到高滴度的SARS IgM、IgG;2例轻症SARS患者各只检测到一次SARS抗体IgM弱阳性;发热隔离区患者有6例从入院至出院均检测到SARS抗体IgG,其中两例滴度较高。健康体检者无一例SARS抗体阳性。【结论】ELISA检测SARS冠状病毒抗体IgM、IgG可作为一种辅助鉴定非典型肺炎患者的临床检测和确诊手段。     

OPSpecs图评价免疫项目的室内质控

目的运用OPSpecs图设计保证临床质量要求的室内质控规则。方法结合IgG项目的精密度、准确度和测定方法的总允许误差,选择不同的适用质控规则,绘制OPSpecs图,评价质控效能。结果根据OPSpecs图可简单、直接地设计出经济、适用盼质控规则。结论用OPSpecs图设计质控规则简便、快捷、实用,但要全面运用到临床免疫项目中,仍需一定的时间。     

shRNA表达载体的构建及对HBV复制和表达的抑制

目的:构建shRNA的表达载体,检测针对乙型肝炎病毒(HBV)的shRNA的稳定表达质粒对HBV复制和表达的影响。方法:扩增U6启动子构建shRNA表达载体pU6。针对HBV基因组序列设计并化学合成双链核苷酸克隆到pU6载体得到质粒pU6B/HBVi,脂质体介导转染带有HBV基因组的2.2.15细胞,定量PCR和ELISA法检测pU6B/HBVi对HBV复制和表达的影响。结果:成功构建了shRNA的真核表达载体;针对HBV的pU6B/HBVi质粒对HBV的复制和表达有明显的抑制作用。结论:稳定表达shRNA的pU6B/HBVi质粒可以抑制HBV在2.2.15细胞中的复制和表达。     

乙肝病毒抗原在离体全血中衰减引起假阴性

目的 探讨离体全血中的细胞成分对乙肝抗原HBsAg和HBeAg的免疫学检测影响.方法 收集80人份HBV携带者血样.每人血样分为3份,一份在离体后迅速离心祛除细胞成分,另一份在离体后3 h离心祛除细胞成分,还有一份在离体后12 h离心祛除细胞成分.分别以夹心ELISA试验及RIA试验定性、定量检测3份血样中的HBsAg和HBeAg水平,井进行成对资料的t检验分析.结果 HBsAg和HBeAg在较高浓度时,同一来源的36份血样中抗原含量无明显差异;而HBsAg和HBeAg处于较低浓度时,3份血样中抗原含量差异明显,细胞成分祛除较晚的血样中抗原水平明显较低.结论 作为外源性病原体抗原,HBsAg和HBeAg因抗原代谢作用而在离体全血中持续衰减,这种衰减可能导致一些乙肝携带者的假阴性检测.     

辛伐他汀对大肠癌细胞系HCT116组织因子表达的影响

目的探索辛伐他汀对大肠癌细胞系HCT116组织因子(TF)表达的影响。方法用实时荧光定量PCR和流式细胞术检测给药前后大肠癌细胞系HCT116的TF m RNA和TF膜蛋白表达含量,并评价其表达水平差异。结果PCR结果显示,相对于空白组,10~(-7)mol/L和10~(-5)mol/L辛伐他汀浓度组TF m RNA的表达倍数表分别为0.693±0.052和0.280±0.021,差异有统计学意义(P0.05和P0.01)。流式细胞术的检测结果表明,与空白组(26.25±0.639)比较,10~(-7)mol/L和10~(-5)mol/L辛伐他汀浓度组TF膜蛋白表达的数学平均数分别为19.76±0.550和15.45±0.518,差异非常显著(P均0.01)。结论辛伐他汀可剂量依赖地下调HCT 116细胞的TF m RNA和TF膜蛋白的表达。     

瑞芬太尼和异丙酚对健康成人静脉血中性粒细胞CD11b表达的影响

目的探讨瑞芬太尼和异丙酚对健康成人静脉血中性粒细胞（PMNs）CD11b表达的影响。方法取成人静脉血，采用正交实验设计确立实验因素为瑞芬太尼和异丙酚；实验水平数为5水平，即瑞芬太尼空白对照、溶媒（甘氨酸）对照、5ng／ml、50ng／ml、500ng／ml和异丙酚空白对照、溶媒（脂肪乳）对照、5μg／ml、50μg／ml、500／μg／ml，用正交表L25（5^6），观察药物对静息状态和脂多糖（LPS）激活状态PMNs下CD11b表达的影响，对激活状态的PMNs根据用药时机的不同又分为预防性用药和治疗性用药。预防性用药加入药物后1h用终浓度为1μg／ml的LPS进行刺激；治疗性用药在LPS刺激后1h加药。各标本均放入37℃、95％的空气-5％的CO2培养箱中孵育3h，其间每隔1h混匀1次。用流式细胞仪测定PMNs CD11b表达。结果瑞芬太尼和异丙酚对静息状态PMNs CD11b的表达无影响。预防性用药对PMNs CD11b表达的比较：与空白对照比较，5、50、500ng／ml瑞芬太尼可上调激活状态PMNs CD11b表达（P〈0．05或0．01）；与甘氨酸对照比较，50、500ng／ml瑞芬太尼可上调激活状态PMNs CD11b表达（P〈0．05和0．01）；异丙酚对激活状态PMNs CD11b表达无影响。治疗性用药对PMNs CD11b表达的比较：与空白对照和甘氨酸对照比较，500ng／ml瑞芬太尼可上调激活状态PMNs CD11b表达（P〈0．01）；与空白对照比较，50ng／ml异丙酚可上调激活状态PMNs CD11b表达（P〈0．05）。结论瑞芬太尼和异丙酚对PMNs的CD11b表达的影响可能与PMNs所处的状态、用药剂量以及用药时机有关。