小鼠白细胞介素5真核表达质粒pVAX-1mIL-5的构建及其体外表达

目的构建能表达小鼠白细胞介素5(mIL-5)的质粒并鉴定其蛋白的体外瞬时表达。方法以含有mIL-5cDNA序列的质粒为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增获得小鼠IL-5基因片段后,定向插入真核表达载体pVAX1中,获得重组表达质粒pVAX1mIL-5。通过双酶切、PCR及插入片段序列测定对质粒进行鉴定。采用间接免疫荧光技术检测pVAX1mIL-5在HeLa细胞的瞬时表达。结果酶切、PCR及测序鉴定证实,插入片段正确,间接免疫荧光检测表明其可以在HeLa细胞中瞬时表达。结论构建的真核表达质粒pVAX1mIL-5可以在HeLa细胞中瞬时表达小鼠IL-5的蛋白,为下一步利用IL-5作为DNA疫苗黏膜免疫佐剂研究奠定了基础。     

不同人群血清中抗透明带抗体的检测

为了探讨抗透明带抗体的临床意义 ,本研究用纯化的猪卵透明带ZP3抗原制备抗卵透明带抗体酶联免疫检测试剂盒 ,采用ELISA方法检测不同人群血中抗透明带抗体 ,并用阳性血清与人卵巢组织切片进行免疫组化分析。结果显示不同年龄组妇女抗透明带抗体阳性率差异不显著 (P >0 0 5 ) ,不孕组阳性率 15 % ,与其他组相比有显著性差异 (P <0 0 5 )。ELISA检测到的透明带抗体阳性血清不与人卵巢组织切片中的透明带产生肉眼可见的沉淀反应。除了早孕组和老龄妇女 ,任何年龄阶段的女性均可出现抗透明带自身抗体 ,鉴于这些抗体不引起周期紊乱现象 ,却可能阻止受精 ,这为透明带作为避孕疫苗候选抗原的安全提供理论依据     

一种新的喹啉酮衍生物对心脏等生理效应的研究

从中国南海软珊瑚Sinularia polyaotyta分离出一种新的喹啉酮衍生物(Quinolone derivative,I),分子量191.0587,分子式C_(10)H_9NO_3,由各类光谱及X光衍射分析等证实其结构为7-hydroxy-8-meth-oxy-4(IH)-quinolone,是一种新的物质。     

Fas相关因子1的研究进展

Fas相关因子1(Fas-associated factor 1,FAF1)是一种细胞内蛋白质,在不同细胞中可存在于细胞核、核仁及核周细胞质中。FAF1是一种进化上保守的蛋白质,约74 kD,由650个氨基酸组成,含有多个功能结构域,包括Fas作用结构域(Fas-interacting domain,FID)、死亡效应结构域作用结构域     

人巨细胞病毒重组基因表达质粒的构建

目的 用基因工程技术克隆人巨细胞病毒（Human cycomegalovirus,HCMV)中抗原性较强的蛋白片段-gp52C末端和pp150C末端的DNA序列，插入pPIC9K质粒，构建适于酵母表达系统的重组表达质粒，方法 根据人巨细胞病毒糖蛋白gp52和磷酸蛋白pp150C末端的cDNA序列，设计出2对引物，利用PCR的方法，以病毒培养液上清为模板，进行二轮PCR扩增，把两个目的基因串联在一起，将所得的DNA片段经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后用T4连接酶与pPIC9K质粒进行连接，然后导入大肠杆菌DH5α筛选出阳性转化子，并用PCR和双酶切鉴定阳性重组子，结果 从人巨细胞病毒培养液上清中扩增出目的基因，PCR反应和双酶切鉴定结果与预期相符。结论 重组表达质粒成功地克隆了目的基因片段。     

Galectin-3在雌性小鼠生殖系统中的表达及脂多糖的影响

目的：研究galectin-3在雌性小鼠生殖系统的表达情况,利用小鼠生殖道感染模型研究galectin-3在女性生殖道感染过程中的可能作用。 方法: 采用RT-PCR的方法初步鉴定小鼠生殖系统各组织中的galectin-3 mRNA的表达水平,通过阴道黏膜注射LPS不完全弗氏佐剂乳液建立小鼠的生殖道感染模型,免疫组化对galectin-3蛋白在雌性小鼠生殖系统的表达进行定位分析。结果: 在正常小鼠的子宫、阴道、输卵管及卵巢中都能够检测到galectin-3 mRNA的表达。Galectin-3蛋白主要表达在生殖道黏膜的上皮细胞表面和子宫腺。经LPS刺激后,galectin-3蛋白在阴道、子宫颈及子宫体的表达水平提高(P＜0.05),尤其是刺激后24 h子宫颈中galectin-3的表达量增加最多(P＜0.01)。结论：LPS刺激能增加小鼠生殖道中galectin-3的表达,galectin-3在生殖道抗感染中可能发挥重要的作用。     

调节卵子发育成熟的信号转导通路

<正>卵子是哺乳动物体内最大的一种细胞,承载着繁衍后代的使命,而卵子的发育成熟是其完成生殖过程的先决条件。对卵泡的生长、发育和卵子成熟调控机制的研究一直是发育生物学的研究热点之一。     

蛋白质快速定量法及其在rhZP3纯化中的应用

目的建立层析过程中洗脱峰蛋白质含量的快速定量法.方法利用蛋白质的紫外吸收原理和层析软件的积分功能,即A280和峰面积计算层析过程中洗脱峰蛋白质含量.结果洗脱峰大小与蛋白质含量呈线性关系,洗脱峰蛋白质含量可用方程X＝Y/A进行估算,X为待测蛋白含量(mg),Y为洗脱峰面积(mAU×ml),A为1 g/L待测蛋白在层析系统的紫外吸收值(mAU).将其应用于重组人卵透明带ZP3蛋白(rhZP3)的纯化,用该方程估算的纯化蛋白含量与用Lowry法测定结果相似.结论该法简便、快速、重复性好,具有一定实用价值.     

骨髓间充质干细胞对免疫损伤卵巢的修复作用

摘要：目的探讨骨髓间充质干细胞移植对免疫损伤卵巢的修复作用。方法6~8周龄的野生型健康ICR雌性小鼠随机分
为3组,每组各12只。A组不作任何处理,B、C组利用猪卵巢蛋白主动免疫建立免疫损伤卵巢模型。而后C组腹腔移植来
自GFP转基因小鼠的骨髓MSCs细胞,A、B组各注射等体积的PBS。MSCs移植后按既定时间处死小鼠,利用PCR检测
卵巢中GFP基因以判断MSCs是否到达卵巢;通过对卵巢组织切片HE染色以及细胞凋亡分析来检测MSCs是否对免疫
损伤卵巢有修复作用及其机制。结果PCR结果表明MSCs经腹腔移植可直接到达免疫损伤卵巢;MSCs移植可促进免疫
损伤卵巢组织的修复;相应地,移植组颗粒细胞的凋亡比非移植组明显减少。结论腹腔移植MSCs可促进免疫损伤卵巢
的修复,其机制可能与减少颗粒细胞凋亡有关。     

国内几种尘螨变应原提取液的质量分析

目的评价国内几种尘螨变应原提取液的质量,了解国内尘螨变应原的质量现状。方法采用SDS-PAGE、W estern blotting和ELISA法对各尘螨变应原样品进行主要致敏蛋白的成分、含量进行分析比较。结果各尘螨变应原样品在主要致敏蛋白的成分、含量方面均有明显差异,且各样品均未能达到WHO的变应原标准。结论国内尘螨变应原的质量参差不齐,变应原的标准化问题亟待解决。