不同静压力下脂多糖刺激牙周膜成纤维细胞对炎症相关因子表达的影响

目的:探讨牙周炎中牙龈卟啉单胞菌LPS(Porphyromonas gingivalis Lipopolysaccharide,Pg.LPS)和人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast,HPDLF)与正畸炎症相关的牙根吸收作用机制。方法:取4~6代体外培养的HPDLF,MTT法检测1~10μg/ml Pg.LPS对HPDLF增殖活性的影响,再选择最佳浓度作用于HPDLF,加载0~5g/cm^2静压力24h,实验组分为静压力组和Pg.LPS+静压力组,通过qRT-PCR和ELISA检测HPDLF白细胞介素17(interleukin 17,IL-17)及白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)的mRNA和蛋白表达水平。结果:①HPDLF增殖在1~4μg/ml Pg.LPS刺激时随浓度增加而增加,在5~7μg/ml随浓度增加而减少,8~10μg/ml细胞增殖明显受到抑制;②两组中IL-17、IL-6的表达量随静压力值增加而增强,相同力值下对照组的IL-17、IL-6表达量高于实验组,差异有统计学意义。结论:Pg.LPS浓度过高能抑制HPDLF增殖,而适当的浓度则促进其增殖;Pg.LPS和静压力均能刺激HPDLF产生炎症相关因子,参与正畸炎症相关牙根吸收发生发展的过程。     

白细胞介素17通过激活p38MAPK信号通路调控人牙周膜成纤维细胞RANKL和OPG的表达

目的使用p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路抑制剂确定白细胞介素17(IL-17)是否通过该通路参与调控人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)和护骨因子(OPG)的表达。方法组织块法分离培养HPDLF, 20 ng/mL IL-17分别刺激0、 20、 40、 60、 80 min,Western blot法检测HPDLF磷酸化的p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白水平。HPDLF随机分为空白对照组、二甲基亚砜(DMSO)组、 p38MAPK抑制剂SB203580组、 IL-17组、 IL-17联合DMSO组、 IL-17联合SB203580组。IL-17及联合处理组,分别添加10μmol/L SB203580、 20 ng/mL IL-17。实时定量PCR检测HPDLF的RANKL、 OPG mRNA水平, Western blot法检测RANKL蛋白水平、 ELISA检测OPG蛋白含量。结果 p-p38MAPK蛋白水平在IL-17刺激后的0～60 min内随时间增加,在60 min时达到最高,在80 min时下降。IL-17可上调HPDLF中RANKL mRNA及蛋白表达,下调OPG mRNA和蛋白表达。较单纯使用IL-17刺激,添加SB203580通路抑制剂后, RANKL mRNA和蛋白水平均降低, OPG的mRNA水平升高。结论 IL-17通过激活p38MAPK信号通路,上调HPDLF的RANKL表达,抑制OPG mRNA表达。