多通道分子信标聚合酶链反应在新生儿侵袭性念珠菌感染快速诊断中的应用

目的初步建立新生儿侵袭性真菌感染（IFI）常见念珠菌的多通道分子信标荧光聚合酶链反应（MQ-PCR）检测体系，实现新生儿IFI病原体的早期检出，并探讨患儿不同部位念珠菌检出率的差异。 方法收集2018年1月至2019年4月首都医科大学附属北京妇产医院收治的34例临床诊断为脓毒败血症并疑似IFI新生儿的血液、深部痰液和咽拭子标本；常规行血培养及微生物鉴定，并应用MQ-PCR体系对3类标本进行念珠菌检测，比较两种方法念珠菌阳性检出率和检测时长。 结果本研究MQ-PCR体系检测白色念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌和热带念珠菌的检出下限均为50 FU/ml，线性检测范围为5 × 10¹～1 × 10⁵ CFU/ml，且MQ-PCR体系所检出细菌与其他14种常见致病性细菌或DNA序列同源性较高的真菌无交叉反应。9例（9/34、26.5%）患儿经血培养念珠菌阳性确定为IFI；此9例IFI患儿同一血液样本、自身不同部位（深部痰液、咽拭子）样本行MQ-PCR均检出念珠菌阳性，且检出菌种与血培养完全一致。比较血标本两种方法念珠菌阳性检出率：血培养法为26.5%（9/34），MQ-PCR为32.4%（11/34），差异无统计学意义（χ² = 0.5、P = 0.5）。血培养法念珠菌阳性检出率（26.5%）和相应的自身不同部位标本MQ-PCR法念珠菌阳性检出率差异均无统计学意义（P均> 0.05），其中咽拭子、深部痰液和血标本中念珠菌阳性检出率分别为41.2%（14/34）、32.4%（11/34）和32.4%（11/34）。MQ-PCR检测血液、深部痰液和咽拭子标本时长分别为3.5（3.2，3.9）h、3.1（2.9，3.2）h和2.7（2.5，2.9）h，较血培养时长[94.0（78，105.8）h]显著缩短，差异均有统计学意义（Z =－2.7、P = 0.008，Z =－2.5、P = 0.013，Z =－2.7、P = 0.008）。 结论对IFI新生儿多部位标本应用MQ-PCR检测念珠菌，较血培养具备高符合率及快速检出的优点，利于新生儿念珠菌定植及血流感染的早期诊断及动态监测。     

快速、准确的B族链球菌检测——即时荧光探针核酸扩增技术的应用

目的 研究和建立即时荧光探针核酸扩增技术,即荧光PCR检测方法,探讨B族链球菌检测的临床应用和性能.方法 首先采用标准化荧光PCR技术和操作流程,进行分析性灵敏性和特异性的鉴定,再收集临床送检样品做进一步认证.结果 分析性灵敏性达到1×102 copies/ml,分析性特异性达到特定靶序列设计要求,标准B族链球菌检测呈阳性,其他生殖道和直肠部位的易感菌株12株均阴性.并具备高重复性;以B族链球菌培养方法做对比,收集1 223例临床样本,实验结果显示:荧光PCR阳性检出率为17.58％,传统培养方法为10.87％.对PCR(+)培养(-)的72例,再扩增并测序,均检出B族链球菌的特有基因序列.结论 荧光PCR检测技术,检测B族链球菌具有较高的灵敏性和特异性,特别有助于孕妇临产前快速检测的应用.