利用表型筛选法测定整合子对耐药性基因盒的整合频率

目的 建立一种利用表型筛选的方法来测定整合子对耐药性基因盒的整合频率. 方法 将整合子和aadA2耐药性基因盒克隆到同一质粒pACYCl84的不同位点,该重组质粒和高表达整合酶的重组质粒分别转化大肠杆菌BL21(DE3),挑选阳性克隆过夜培养后,取适量菌液涂布含有链霉素的LB琼脂平板,同时取适量菌液涂布不含链霉素的LB琼脂平板,过夜培养后计数菌落个数,用以计算整合频率.同时以链霉素平板上的阳性克隆为模板,进行PCR扩增.对扩增产物切胶回收纯化,然后进行测序,以确定aadA2耐药性基因盒整合位点. 结果 在大肠杆菌BL21(DE3)宿主中,整合子对aadA2耐药性基因盒的整合频率为1.1×103,主要的整合位点为attI. 结论 该系统可以用于整合子对基因盒捕获频率的测定.     

提高写作水平的有效途径

提高学生写作水平是语文教学的主要目标。语文教学应把“教”与“学”有机地结合起来,从两方面实现这一目标。1 实行“三导”,以教促写 一是写前指导。 对于尚未掌握写作技巧的学生来说,其写作观是一种“任务观”。对此,教师应在写作前传授给学生一些基本技巧,以增强兴趣,启发思维。如要学生写散文,可结合《荷塘月色》的教学,总结出 4条提示： (1)所写的景、事必须有一条线索 (情或物 )贯穿,以做到形散神聚; (2)所写的景、事必须为表情达意服务,即景、事等要成为作者情感的依托对象; (3)语言要有诗情画意,新颖为佳; (4)要注意…     

OXA型β-内酰胺酶

OXA型β-内酰胺酶大多数出现在革兰氏阴性菌(主要为肠杆菌科菌和铜绿假单胞菌)中，通常介导耐氨基组和脲基组青霉素，强水解氯唑西林、苯唑西林和甲氧西林。克拉维酸仅能微弱抑制其活性，但它却被NaCl强烈抑制。OXA型酶相当于Ambler D类酶，和A、C类酶一样为活性一位点丝氨酸。OXA型酶的氨基酸序列与A、C类酶的一致性约为16％。至今已报道了33种OXA型酶，命名为OXA-1-31及Amps和LCR-l。大多数酶作了DNA序列分析，有的作了生化分析，对OXA-10和OXA-13还作了三维结构分析。根据氨基酸序列同源性可将OXA型酶分为6个群，群与群之间相关性很弱(约20％-30％)。OXA型酶耐药谱通常很窄，但现已发现OXA-2或OXA-10突变衍生酶的耐药谱已扩散到第三代头孢菌素和／或亚胺培南。编码OXA型酶的基因常位于质粒和／或整合子中，具有很强的扩散能力。     

二甲双胍降低2型糖尿病患者尿单核细胞趋化蛋白-1的排泄

目的 观察二甲双胍对2型糖尿病(DM)患者尿单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)排泄的影响,探讨二甲双胍对2型糖尿病的保护作用.方法 对50例初诊的2型糖尿病患者给予二甲双胍治疗12周,观察12周前后相关代谢指标及尿MCP-1排泄的变化,同期选择30例体检健康人群作对照分析.结果 (1)2型糖尿病患者空腹血糖,餐后2 h...     

Vitek 2 Compact AST-N334、AST-N335、AST-P639中国定制药敏卡性能评估

目的 评估Vitek 2 Compact AST-N334、AST-N335和AST-P639中国定制药敏卡的性能.方法 随机收集权威机构质控菌株73株和2018年1—6月华山医院住院患者首次临床分离株112株.以权威机构提供的质控菌株为检测对象,采用3种中国定制药敏卡及微量肉汤稀释法(BMM)进行平行试验,以室间质量...     

从肺炎克雷伯菌临床菌株中检出质粒介导的AmpC DHA-1型β-内酰胺酶基因

目的研究肺炎克雷伯菌的耐药机制,检测肺炎克雷伯菌中AmpC酶的基因.方法用纸片扩散法药敏试验和三相水解试验,从23株耐药的肺炎克雷伯菌临床菌株中初筛产AmpC酶的菌株;用PCR扩增耐药基因,将试验产物测序,并在Genbank中进行比对;用转化试验确证耐药基因是否通过质粒传播.结果发现3株肺炎克雷伯菌产诱导型质粒介导的DHA-1型AmpC β-内酰胺酶.结论国内首次发现肺炎克雷伯菌出现质粒介导的DHA-1型AmpC β-内酰胺酶.     

上海地区3所医院MRSA的随机扩增多态DNA分型

目的分析上海3所医院分离的MRSA分布现状,以确定在这些医院内是否存在MRSA流行。方法用苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法、mecA基因扩增等方法检测MRSA,用随机扩增多态DNA(RAPD)法对所分离的112株MRSA进行同源性分析。结果RAPD法将检测菌株分为4个型别(A～D型),其中RAPDC型是上述2所医院的惟一流行菌株,B型和C型存在于另1所医院。结论在上述3所医院内存在相对单一的MRSA流行株。     

2010年中国CHINET肠球菌属细菌耐药性监测

目的了解2010年中国主要地区临床分离肠球菌属细菌对各类抗菌药物的耐药性。方法国内主要地区14所教学医院(12所综合性医院,2所儿童医院)按统一方案、采用统一的材料、方法(K-B法)和判断标准(CLSI 2010年版)进行肠球菌属细菌的耐药性监测。结果共分离到4 046株非重复肠球菌属细菌,最常见菌种为粪肠球菌1 829株(45.2%)、屎肠球菌1 817株(44.9%)、鹑鸡肠球菌78株(1.9%)、鸟肠球菌54株(1.3%)、铅黄肠球菌49株(1.2%)。肠球菌属对利奈唑胺、万古霉素、替考拉宁仍极敏感,耐药率<4%,万古霉素耐药粪肠球菌和屎肠球菌检出率分别为0.6%、3.6%。粪肠球菌对呋喃妥因、磷霉素和氨苄西林耐药率较低,分别为3.2%、5.7%和11.3%,对高浓度庆大霉素耐药率为44.0%;屎肠球菌耐药性明显高于粪肠球菌,对氨苄西林耐药率接近90%,对高浓度庆大霉素耐药率接近70%,对氯霉素耐药率仅为7.3%,儿童屎肠球菌分离株对磷霉素、呋喃妥因耐药率<10%。不同医院分离的肠球菌属细菌对抗菌药物的耐药率有一定差异。结论屎肠球菌的分离率有增加趋势,肠球菌属细菌对利奈唑胺、万古霉素、替考拉宁依然保持极高的敏感性。     

快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因的PCR方法学评价

摘要：目的：对PCR法直接检测标本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）耐药基因mecA的可靠性进行评估。 方法：用经细菌表型鉴定的70株临床标本分离株进行方法学评估,其中MRSA 22株,非MRSA 48株,检测其最低检测限、重复性、灵敏度和特异性。同时对269份临床标本,包括67份痰液、82份血液、68份尿液以及52份无菌体液进行PCR检测和细菌表型鉴定,分析结果符合率。 结果：PCR法的最低检测限为5×10⁴ CFU/mL;菌数5×10⁶和5×10⁴ CFU/mL标本的批内变异系数（CV）为0.81%、0.94%,批间CV为1.48%、2.03%;检测经表型鉴定的菌株,敏感性和特异性均达到100%。痰液标本PCR检测和细菌表型鉴定符合率为98%,血液、尿液和其他体液标本均为100%。 结论：PCR法检测mecA耐药基因,方便、快速且最低检测下限和重复性等性能指标均比较理想,与表型鉴定符合率较高,适于临床应用。     

一株铜绿假单胞菌中检出两种新的整合子

目的研究铜绿假单胞菌多重耐药的临床分离株RJ217中发现的两个新整合子的结构，并分析其在多重耐药性中的作用。方法用改良三相试验分析RJ217产β-内酰胺酶的情况，用常规和长片段PCR法扩增耐药基因和整合子，并对PCR产物进行序列分析。结果发现铜绿假单胞菌RJ217携带两个新的整合子，其中一个携带veb-I型超广谱β-内酰胺酶(ESBL)基因，这两个整合子的结构分别为IS10-like-veb-I-aadB-oxa10／aadA1和aadB-oxa10／aadA1。结论整合子介导的耐药基因在RJ217的多重耐药性中发挥了重要的作用。