一株铜绿假单胞菌中检出两种新的整合子

目的研究铜绿假单胞菌多重耐药的临床分离株RJ217中发现的两个新整合子的结构，并分析其在多重耐药性中的作用。方法用改良三相试验分析RJ217产β-内酰胺酶的情况，用常规和长片段PCR法扩增耐药基因和整合子，并对PCR产物进行序列分析。结果发现铜绿假单胞菌RJ217携带两个新的整合子，其中一个携带veb-I型超广谱β-内酰胺酶(ESBL)基因，这两个整合子的结构分别为IS10-like-veb-I-aadB-oxa10／aadA1和aadB-oxa10／aadA1。结论整合子介导的耐药基因在RJ217的多重耐药性中发挥了重要的作用。     

利用表型筛选法测定整合子对耐药性基因盒的整合频率

目的 建立一种利用表型筛选的方法来测定整合子对耐药性基因盒的整合频率. 方法 将整合子和aadA2耐药性基因盒克隆到同一质粒pACYCl84的不同位点,该重组质粒和高表达整合酶的重组质粒分别转化大肠杆菌BL21(DE3),挑选阳性克隆过夜培养后,取适量菌液涂布含有链霉素的LB琼脂平板,同时取适量菌液涂布不含链霉素的LB琼脂平板,过夜培养后计数菌落个数,用以计算整合频率.同时以链霉素平板上的阳性克隆为模板,进行PCR扩增.对扩增产物切胶回收纯化,然后进行测序,以确定aadA2耐药性基因盒整合位点. 结果 在大肠杆菌BL21(DE3)宿主中,整合子对aadA2耐药性基因盒的整合频率为1.1×103,主要的整合位点为attI. 结论 该系统可以用于整合子对基因盒捕获频率的测定.     

提高写作水平的有效途径

提高学生写作水平是语文教学的主要目标。语文教学应把“教”与“学”有机地结合起来,从两方面实现这一目标。1 实行“三导”,以教促写 一是写前指导。 对于尚未掌握写作技巧的学生来说,其写作观是一种“任务观”。对此,教师应在写作前传授给学生一些基本技巧,以增强兴趣,启发思维。如要学生写散文,可结合《荷塘月色》的教学,总结出 4条提示： (1)所写的景、事必须有一条线索 (情或物 )贯穿,以做到形散神聚; (2)所写的景、事必须为表情达意服务,即景、事等要成为作者情感的依托对象; (3)语言要有诗情画意,新颖为佳; (4)要注意…     

OXA型β-内酰胺酶

OXA型β-内酰胺酶大多数出现在革兰氏阴性菌(主要为肠杆菌科菌和铜绿假单胞菌)中，通常介导耐氨基组和脲基组青霉素，强水解氯唑西林、苯唑西林和甲氧西林。克拉维酸仅能微弱抑制其活性，但它却被NaCl强烈抑制。OXA型酶相当于Ambler D类酶，和A、C类酶一样为活性一位点丝氨酸。OXA型酶的氨基酸序列与A、C类酶的一致性约为16％。至今已报道了33种OXA型酶，命名为OXA-1-31及Amps和LCR-l。大多数酶作了DNA序列分析，有的作了生化分析，对OXA-10和OXA-13还作了三维结构分析。根据氨基酸序列同源性可将OXA型酶分为6个群，群与群之间相关性很弱(约20％-30％)。OXA型酶耐药谱通常很窄，但现已发现OXA-2或OXA-10突变衍生酶的耐药谱已扩散到第三代头孢菌素和／或亚胺培南。编码OXA型酶的基因常位于质粒和／或整合子中，具有很强的扩散能力。     

Vitek 2 Compact AST-N334、AST-N335、AST-P639中国定制药敏卡性能评估

目的评估Vitek 2 Compact AST-N334、AST-N335和AST-P639中国定制药敏卡的性能。方法随机收集权威机构质控菌株73株和2018年1—6月华山医院住院患者首次临床分离株112株。以权威机构提供的质控菌株为检测对象,采用3种中国定制药敏卡及微量肉汤稀释法(BMM)进行平行试验,以室间质量评价结果为参考标准,评估中国定制药敏卡及BMM的可靠性。以临床分离株为检测对象,以BMM结果为参考标准,评估中国定制药敏卡对临床分离株耐药多样性检测的准确性。结果以质控菌株为检测对象,以权威机构提供的抗菌药物敏感性试验结果为标准,AST-N334、AST-N335、AST-P639的分类一致率(CA)分别为95.5%(126/132)、96.8%(179/185)、99.5%(182/183)。以临床分离株为检测对象,以BMM药物敏感性试验结果为参考标准,AST-N334标准一致率(EA)为88.4%(961/1087)、CA为94.6%(903/955)、非常重大错误(VME)占0.3%(3/955)、重大错误(ME)占1.9%(18/955)、微小错误(MIE)占3.2%(31/955);AST-N335 EA为89.9%(1388/1544)、CA为95.1%(1414/1487)、VME占0.3%(5/1487)、ME占0.8%(12/1487)、MIE占3.8%(56/1487);AST-P639 EA为95.4%(541/567)、CA为98.7%(389/394)、ME占0.5%(2/394)、MIE占0.8%(3/394)。结论Vitek 2 Compact AST-N334、AST-N335、AST-P639中国定制药敏卡准确性高,具有临床应用可信度,但也存在一定的错误率及局限性,实验室检测人员应予以关注。     

SHV-12型超广谱β-内酰胺酶特性的研究

目的研究SHV-12型超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的特性。方法将b laSHV-12基因连接至pET28 a载体上,并用重组质粒转化大肠埃希菌BL21进行克隆表达,挑选b laSHV-12阳性表达的菌落,提取其酶蛋白进行等电点测定和酶动力学分析。结果SHV-12型ESBL等电点为8.2。同时,在所测的几种抗生素中,该酶对头孢他啶和头孢噻肟的Km相同且最小;对头孢噻吩,有着最大的Vm ax/Km;而对阿莫西林,表现出最大的Km和最低的Vm ax。结论SHV-12型ESBL对头孢他啶和头孢噻肟具有高的亲和力,而对头孢噻吩有最大的催化效能。     

泛耐药肺炎克雷伯菌株的医院内流行特性的研究

目的 了解华山医院泛耐药肺炎克雷伯菌株及其流行的特点.方法 收集2006年8月-2009年12月对CLSI推荐常规检测药物均耐药的肺炎克雷们菌临床分离株,共57株.所有菌株都进行药物敏感试验、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)初筛及表型确证试验、改良Hodge试验、等电聚焦电泳,聚合酶链反应及其产物测序、接合试验、肠杆菌基因间重复共有序列PCR(ERIC-PCR)和多位点序列分型(MLST).结果 所有菌株都携带blaKPC-2、blaCTX-M-14、blaSHV12和blaTEM-1及qnrB和aac(6')-I b-cr基因.57株细菌中ST423型5株,MIST ST11型52株.ST423型散发,而ST11型呈医院内流行.57株细菌都对替加环素耐药,对多黏菌素、米诺环素和多西环素部分敏感.结论 本次泛耐药肺炎克雷们流行主要为ST11型菌株;不同的肺炎克雷伯菌株,播散能力不同;检出泛耐药肺炎克雷伯菌时应增加检测药物的种类.     

上海地区3所医院MRSA的随机扩增多态DNA分型

目的分析上海3所医院分离的MRSA分布现状,以确定在这些医院内是否存在MRSA流行。方法用苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法、mecA基因扩增等方法检测MRSA,用随机扩增多态DNA(RAPD)法对所分离的112株MRSA进行同源性分析。结果RAPD法将检测菌株分为4个型别(A～D型),其中RAPDC型是上述2所医院的惟一流行菌株,B型和C型存在于另1所医院。结论在上述3所医院内存在相对单一的MRSA流行株。     

上海出现PER-1型超广谱β内酰胺酶

目的 分析多重耐药鲍曼不动杆菌148号试验菌株耐β内酰胺抗生素的原因及耐药性的转移能力。方法 用等电聚焦电泳试验和三相水解试验分析148号试验菌株所产β内酰胺酶，并进行初步分类，再用聚合酶链反应(PCR)扩增和PCR产物测序方法确认β内酰胺酶基因。结果 148号试验菌株产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)，经分子生物学方法证实有blaPER—1基因，同时还有aacA4基因。结论 148号试验菌株耐β内酰胺抗生素的原因，可能是产生了可转移的PER—1型ESBLs，blaPER—1基因位于质粒上。