膝关节骨性关节炎病变区软骨细胞来源的细胞外囊泡促进膝关节骨性关节炎进行性发展的机制

目的探究膝关节骨性关节炎(OA)患者来源病变区域软骨细胞(OA-L-CH)分泌的细胞外囊泡(OA-L-CH-EVs)对非病变区域软骨细胞的OA发展的影响机制。方法软骨细胞来源于郑州大学第一附属医院10例因OA需行膝关节置换术的患者, 提取病变区域(OA-L-CH)和非病变区区域(OA-NL-CH)软骨细胞进行传代培养, 运用差速离心法+超速离心法提取EVsOA-L-CH, 用蛋白质印迹法(Western blot)检测p65和p38在OA-NL-CH和OA-L-CH中的表达水平。将OA-NL-CH与EVsOA-L-CH共培养作为实验组, 对照组(OA-NL-CH)加入等量的磷酸盐缓冲液(PBS), 分别用细胞计数试剂盒(CCK-8)和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶法(Caspase)-3/7检测EVsOA-L-CH对正常软骨细胞的增殖、凋亡的影响。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测软骨合成基因和炎性因子基因表达, 采用免疫荧光检测(IF)检测实验组的p-p65和p-p38 MAPK磷酸化水平。采用单因素方差分析和t检验进行统计学分析。结果电子显微镜下可观察到提取物为粒径范围...