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绿色荧光蛋白、菲立磁体外双标记神经干细胞及其活性的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的探索用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)重组逆转录病毒和菲立磁(超顺磁性氧化铁,,Superparamagnetic Iron Oxide,SPIO)体外双标记神经干细胞的可行性及其对细胞活力的影响。方法用病毒介导的GFP基因转导大鼠胚胎神经干细胞。用SPIO和Lipofectamine体外磁化标记经GFP标记的胚胎神经干细胞。用荧光显微镜观察双标记神经干细胞,并行普鲁士蓝染色,了解转染成功率。MTT(四甲基偶氮唑蓝)法检测标记神经干细胞的细胞增殖活力。结果双标记神经干细胞分化的细胞荧光显微镜下观察见发出绿色荧光,普鲁士蓝染色呈阳性。而未标记神经干细胞荧光显微镜下观察未见发出绿色荧光,普鲁士蓝染色呈阴性。MTT法检测发现GFP和SPIO双标记神经干细胞的增殖活力与未标记神经干细胞相比无改变。结论绿色荧光蛋白重组逆转录病毒和菲立磁可以有效地标记体外分离培养的大鼠胚胎神经干细胞。双标记神经干细胞的增殖、分化活力与未标记神经干细胞相比无改变。 相似文献
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大鼠创伤性脑损伤后神经干细胞的增殖及移植后的修复作用 总被引:3,自引:1,他引:3
目的:基于神经于细胞的自我更新和多向分化的特点,探讨创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后神经于细胞(neural stem cells.NSCs)的增殖及其移植对脑损伤的修复作用。方法:实验于2004年在复旦大学附属华山医院神经外科动物实验室完成.采用Feeney氏法制备大鼠创伤性脑损伤模型,随机分为对照组、损伤组、PBS治疗组、NSCs移植治疗组,免疫组化检测大鼠损伤后海马NSCs的数量;用绿色荧光蛋白(GFP)标记的NSCs立体定向移植。神经损害严重程度评分和旋转爬杆试验对移植后大鼠的神经系统行为和运动功能进行评估,免疫组化染色观察NSCs的分化情况。结果:TBI后7d海马齿状回nestin阳性细胞明显增多,为(8.1&;#177;2.5)个,与正常动物组(2.5&;#177;1.3)个比较差异有非常显著性意义(F=40.91,P&;lt;0.01)。移植后部分GFP阳性细胞表达神经元特异性标记物β-tubilin Ⅲ,移植组大鼠神经系统行为学评分明显改善。结论:TBI后移植NSCs可以有效地促进损伤后大鼠神经行为功能的恢复,NSCs能够分化为神经元从而发挥对损伤后的大脑的修复作用。 相似文献
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目的:基于神经干细胞的自我更新和多向分化的特点,探讨创伤性脑损伤(traumaticbraininjury,TBI)后神经干细胞(neuralstemcells,NSCs)的增殖及其移植对脑损伤的修复作用。方法:实验于2004年在复旦大学附属华山医院神经外科动物实验室完成。采用Feeney氏法制备大鼠创伤性脑损伤模型,随机分为对照组、损伤组、PBS治疗组、NSCs移植治疗组,免疫组化检测大鼠损伤后海马NSCs的数量;用绿色荧光蛋白(GFP)标记的NSCs立体定向移植。神经损害严重程度评分和旋转爬杆试验对移植后大鼠的神经系统行为和运动功能进行评估,免疫组化染色观察NSCs的分化情况。结果:TBI后7d海马齿状回nestin阳性细胞明显增多,为(8.1±2.5)个,与正常动物组(2.5±1.3)个比较差异有非常显著性意义(F=40.91,P<0.01)。移植后部分GFP阳性细胞表达神经元特异性标记物β-tubilinIII,移植组大鼠神经系统行为学评分明显改善。结论:TBI后移植NSCs可以有效地促进损伤后大鼠神经行为功能的恢复,NSCs能够分化为神经元从而发挥对损伤后的大脑的修复作用。 相似文献
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目的探讨人脑胶质瘤树突状细胞(DC)疫苗的临床疗效。方法采集患者胶质母细胞瘤手术标本,用热休克诱导肿瘤细胞凋亡,制备符合临床应用的人脑胶质瘤DC疫苗。25例脑胶质瘤患者分为C组(12例)和DC组(13例):C组采用传统的手术及术后放化疗治疗;DC组加用DC疫苗。比较两组肿瘤局部控制率(LCR)、生存时间和生活质量的Karnofsky评级,记录并发症。结果随访2年。治疗结束后9个月时,DC组肿瘤LCR明显高于C组(69.2%vs.25.0%)(P<0.05)。DC组治疗结束后6个月及9个月的Karnofsky评级优于C组。DC组1、2年生存率明显高于C组(69.2%、7.7%vs.41.7%、0)(P<0.05)。DC组的肿瘤复发时间为(11.92±25.31)个月,明显晚于C组的(7.75±4.16)个月(P<0.05)。疫苗接种期间,患者均未出现恶心、呕吐、头痛症状,未观察到关节炎、支气管炎等自身免疫性疾病的发生。结论脑胶质瘤DC疫苗联合术后放化疗,为脑胶质母细胞瘤提供一种更有效的治疗方法。 相似文献
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背景:目前判断神经干细胞移植后向脑损伤部位的迁移需要处死受体动物行脑切片检查,且不能进行多点、动态的观察。
目的:探讨用MRI活体示踪移植磁化标记成人神经干细胞在创伤性脑损伤模型大鼠脑内迁移和分布的可行性。
方法:建立大鼠脑部左侧半球创伤性脑损伤模型,超顺磁性氧化铁体外标记成人神经干细胞。模型建立后2周将标记成人神经干细胞立体定向移植入大鼠脑部右侧半球。在移植后1 d、3 d、1周和2周分别行大鼠头部MRI。2周后处死大鼠取脑,用普鲁士蓝染色法进行染色,观察标记神经干细胞的迁移。
结果与结论:超顺磁性氧化铁体外标记成人神经干细胞的成功率约为85%。移植后行头颅MRI可见位于右侧半球的移植部位FSE T2WI和GRE T2序列呈环形低信号。随时间推移,创伤性脑损伤后移植标记干细胞组大鼠头颅MRI可见脑内有一低信号线,指向对侧脑挫伤部位,而创伤性脑损伤后移植未标记干细胞组,正常大鼠移植标记干细胞组无信号线。MRI显像结果与脑切片普鲁士蓝染色观察到的结果是相符合的。 结果提示用MRI活体示踪移植磁化标记成人神经干细胞在创伤性脑损伤模型大鼠脑内迁移和分布可行、有效。 相似文献
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目的探讨人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)源性神经元样细胞移植对局灶性脑缺血后神经功能缺失的治疗作用。方法应用胶氧尿苷(Brdu)标记全反式维甲酸联合细胞因子诱导的hBMSCs源性神经元样细胞,通过立体定向分别将磷酸盐缓冲液(BS)、hBMSCs及hBMSCs源性神经元样细胞植入局灶性脑缺血模型大鼠纹状体内。观察移植后各组大鼠神经功能恢复情况。结果hBMSCs和hBMSCs源性神经元样组术后神经损伤严重缺损评分(NSS)、平衡木试验(BBT)、一次性被动回避平台试验(SDPAT)、水迷宫试验(WMT)较PBS组显著好转(P〈0.01);hBMSCs组术后1、3周NSS、BBT较hBMSCs源性神经元样组明显好转(P〈0.05),术后6、8周两组比较差异无统计学意义(P〉0.05);hBMSCs源性神经元样组SDPAT、WMT较hBMSCs组改善明显(P〈0.05)。结论hBMSCs和hBMSCs源性神经元样细胞脑内移植均能有效改善局灶性脑缺血大鼠的神经功能症状,hBMSCs移植作用快,而hBMSCs源性神经元样细胞移植在学习、记忆功能方面改善更好,可能是治疗局灶性脑缺血的一种方法。 相似文献
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目的:检测弥漫性脑肿胀不同处理组病人各个时间段AT-III、D-二聚体、TM、TPA、PAI-1、vegf、gmp-140、ET-1的变化,探讨毛冬青甲素超早期应用的治疗价值。方法:分组采用ELISA法检测T-PA、PAI-1、D-二聚体、vegf、gmp-140、ET-1,竞争性放射免疫法测定TM,免疫浊度法测定AT-III,同时检测各组伤后12h及5d的DIC指标。结果:所有病人以上指标各时间段均有不同程度变化,特定时间段大剂量毛冬青甲素干预组与另两组病人间多数有明显差异。对照组及小剂量干预组病人的DIC指标大多呈阳性反应,而大剂量干预组则多数阴性。结果:决定弥漫性脑肿胀预后的主要因素是脑肿胀是否最终导致脑微循环障碍,大剂量毛冬青甲素超早期应用对改善血液凝血机制、改变毛细血管通透性、缓解脑水肿的超早期形成从而改变病人预后有一定疗效,小剂量则无效。 相似文献