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[摘要] 目的: 通过CRISPR-Cas9 基因编辑技术及质粒电转染技术制备T 细胞免疫球蛋白黏液素3(TIM3)基因敲除的人外周血T淋巴细胞,探讨敲除TIM3 基因后能否增强T细胞免疫功能及其抗肿瘤作用。方法: 通过电转染法将hTIM3 sgRNA/Cas9 双质粒共转染EBV阳性胃癌患者外周血T淋巴细胞,电转24 h 后流式细胞术检测转染效率并利用荧光显微镜观察;体外培养过程中观察基因敲除后T细胞增殖活性,流式细胞术验证TIM3 基因敲除效率以及细胞表型的变化。用肿瘤抗原肽活化T细胞检测TIM3 基因敲除后T 细胞分泌细胞因子水平及体外杀伤胃癌AGS-EBV 细胞的能力。结果:电转染法能够有效地将hTIM3 sgRNA/Cas9 双质粒敲除体系转入人外周血T淋巴细胞,其转染效率平均达(41.5±3.6)%,基因敲除效率波动在40.0%~50.0%(均P<0.01);经抗原活化后的基因敲除组T细胞的增殖活性和免疫表型未见明显变化,表面活化分子中仅见HLA-DR较对照组明显提高(P<0.05);TIM3 基因敲除T细胞分泌TNF-α、IFN-γ 的水平显著增高(P<0.01 或P<0.05),体外杀伤胃癌AGS-EBV 细胞的能力也明显增强(均P<0.05)。结论: 用CRISPR-Cas9 基因编辑及质粒电转染技术制备人外周血TIM3 基因敲除T淋巴细胞的方法简易可行,在体外的扩增活化中保持TIM3 基因水平下调并具有更高的免疫应答水平以及更强的抗肿瘤作用。这一新技术的研发为基因工程化细胞免疫治疗提供了新的思路。 相似文献
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肝纤维化是一种伴随慢性肝病的病理过程,具有较高的发病率和病死率。目前诊断肝纤维化的金标准是肝活检术,但肝活检术有其局限性,且目前尚无有效的无创诊断肝纤维化的手段。在肝纤维化的早期阶段,其可通过治疗“逆转”,因此,肝纤维化的诊断和精确分期在控制该疾病中非常重要。由于分子影像学技术具有无创、特异度高等优点,因此其发展具有巨大潜力。笔者对磁共振分子影像学技术和核医学分子影像学技术在肝纤维化诊断和分期方面的最新进展进行概述。 相似文献
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目的 探究特发性黄斑前膜(iERM)合并白内障患者房水中细胞因子的表达及其与白内障超声乳化手术预后指标的相关性。方法 选取2020年5月至2021年2月在南通大学附属医院眼科住院并行白内障超声乳化术的iERM患者(iERM组)25例(27眼)和老年性白内障患者(对照组)23例(25眼)为研究对象,分别收集两组患者的房水,运用Luminex液相芯片技术对房水中48种细胞因子水平进行测定。同时分析iERM组患者白内障超声乳化术术前和术后3个月相关指标,包括最佳矫正视力(BCVA)、黄斑中心凹厚度(CFT)、黄斑体积(MV)和黄斑平均厚度(MT)的变化与房水细胞因子之间的相关性。结果 iERM组患者房水样本中生长调节致癌基因-α(GRO-α)、白细胞介素 (IL)-2、IL-7和血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)的水平均显著高于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.001 5)。iERM组患者白内障超声乳化术术后视力明显改善,CFT、MV和MT均明显升高(均为P<0.05)。iERM组患者房水细胞因子CTACK浓度与BCVA(logMAR)变化(术后与术前的差值)呈正相关(r=0.445,P=0.043);细胞因子IL-4浓度与MT变化(术后与术前差值)呈负相关(r=-0.471,P=0.031)。结论 对于iERM患者,房水中GRO-α、IL-2、IL-7和PDGF-BB可能参与了iERM的形成机制,CTACK可能与患者术后视力恢复缓慢有关,而IL-4则可能与患者术后黄斑厚度增加密切相关。 相似文献
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目的 探讨DNA氧化损伤修复基因BLM、WRN、ERCC6以及OGG1的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)是否影响年龄相关性白内障(age-related cataract,ARC)的发生,并检测SNP是否会引起外周血淋巴细胞DNA损伤程度的改变.方法 从“江苏眼病研究”人群收集ARC患者789例及对照组531例.提取DNA分析BLM、OGG1、ERCC6及WRN基因18个SNP位点的基因型.同时应用彗星试验检测部分受试者外周血淋巴细胞的DNA损伤程度.结果 WRN-rs11574311与ARC、皮质型以及混合型ARC相关(P=0.003,OR=1.49;P=0.001,OR=1.68;P<0.000 1,OR=2.08),BLMrs1063147与核型ARC相关(P=0.03,OR=1.31),WRN-rs2725383与皮质型ARC相关(P =0.01,OR=1.49),WRN-rs4733220以及WRN-rs2725338与混合型ARC相关(P=0.04,OR =0.74;P =0.003,OR =0.60).经过Bonferroni校正后,WRN-rs11574311仍与皮质型以及混合型ARC相关,WRN-rs2725338仍然与混合型ARC相关.SNP位点不同基因型的外周血淋巴细胞DNA损伤程度的差异无统计学意义.结论 WRN基因在ARC的发生发展过程中起重要作用,而且在不同亚型ARC中所起的作用也有所不同,说明不同亚型ARC可能具有特异性的危险因素以及致病机制. 相似文献
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目的:分析腹腔镜联合胆道镜治疗胆管结石的适用范围、操作要求及应用价值。方法:回顾分析2014年10月至2016年12月收治的86例胆管结石患者的临床资料,其中胆囊结石合并胆总管结石76例,胆囊结石合并肝内外胆管结石10例。为患者行腹腔镜联合胆道镜治疗。结果:86例均成功完成腹腔镜手术,无一例中转开腹。81例行腹腔镜胆囊切除、胆总管探查、T管引流术,5例行腹腔镜胆囊切除术、胆总管探查一期缝合术。手术时间95~160 min,平均(130.5±12.5)min;术中出血量20~200 ml,平均(40.0±8.2)ml;术后住院4~12 d,平均(5.8±1.2)d。术后无出血、胆管狭窄等并发症发生。1例患者发生胆漏,经腹腔引流后顺利出院。结论:在严格的适应证、丰富的腹腔镜手术经验的前提下,应用腹腔镜联合胆道镜治疗胆管结石是安全、可靠的,具有良好的临床疗效。 相似文献
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一、临床资料1.对象:视网膜脱离患者94例124眼,均经临床检查证实,部分性视网膜脱离89眼、视网膜全脱离35眼。男75例,女19例;左眼88只,右眼36只,年龄最小13岁,最大74岁。2.仪器:采用美国Au4型多功能超声诊断仪,使用7.5~10MHz可调高频水囊探头诊断。3.方法:患者取仰卧位,轻轻闭合眼睑,外涂消毒耦合剂,多方向连续扫查,观察眼球整体情况,病变部位,形态与分布,回声强弱,数据测量及拍摄记录。在扫查过程中,可令患者眼球适当活动,以观察眼内微小病灶及其与眼球壁组织的关系。4.声像图表现(1)局限性视网膜脱离:在玻璃体内可见异常的增强光带回声,… 相似文献
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目的分析腹腔镜经腹腹膜前疝修补术(TAPP)与疝环充填式无张力修补术治疗腹股沟疝患者的疗效及经济学效益。 方法2017年1月至2021年2月宿州市第一人民医院普外科收治的腹股沟疝患者100例,采用随机数字表法分为对照组与试验组,各50例。对照组行疝环充填式无张力修补术,试验组行TAPP术,2组均随访至出院。分析2组围手术期指标、不同时间点疼痛程度及生活质量,术前、术后1 d炎症反应及氧化应激指标,住院期间并发症发生情况,经济学效益(住院时间、住院费用)。 结果组间比较试验组术中出血量更少,手术、术后下床活动、术后胃肠功能恢复以及术后恢复正常活动时间更短(P<0.05)。术后6 h、24 h、48 h,2组疼痛视觉模拟评分量表(VAS)得分呈降低趋势,但试验组更低(P<0.05);2组简易健康调查简表36(SF-36)得分呈升高趋势,但试验组更高(P<0.05)。术后1 d 2组血清肿瘤坏死因子-α、C反应蛋白、白介素-6、丙二醛水平较术前升高,但试验组更低(P<0.05);术后1 d 2组血清超氧化物歧化酶水平较术前降低,但试验组更高(P<0.05)。术后住院期间试验组并发症发生率较对照组更低(8.00% vs 34.00%,P<0.05)。试验组住院时间短于对照组,住院费用高于对照组(P<0.05)。 结论相较疝环充填式无张力修补术,TAPP术治疗腹股沟疝可降低患者手术创伤,促进术后康复,缓解疼痛并改善患者生活质量,分析与其降低机体炎症反应及氧化应激有关,但住院费用更高,临床可考虑患者病情及经济情况选择治疗方式。 相似文献
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目的探讨硼替佐米(Bortezomib)、吉西他滨(GEM)、硼替佐米与GEM联合应用对肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡和周期的影响。方法 CCK8法测定硼替佐米、GEM、硼替佐米与GEM联合应用在不同时间作用后HepG2细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测硼替佐米、GEM、硼替佐米与GEM联合应用作用HepG2细胞后细胞凋亡及周期分布。结果在一定浓度不同时间作用后,硼替佐米和GEM联合用药对HepG2的生长具有明显的抑制作用(P<0.05);同时两药联合可引起细胞凋亡(P<0.05),可导致细胞在S或G2/M期阻滞(P<0.05)。结论硼替佐米和GEM联合作用可促进HepG2细胞增殖并诱导凋亡同时可阻滞细胞周期的进程。 相似文献