噬菌体展示技术构建重组人TNF-α单链抗体库

目的应用噬菌体展示技术构建抗重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)的单链抗体库。方法利用噬菌体表面展示技术、绕过杂交瘤技术,提取经免疫BALB/c小鼠淋巴细胞总RNA,用相应引物扩增小鼠免疫球蛋白VH基因和VL基因,构建VH、VL抗体库。由L inker-prim erm ix经重叠延伸反应将重链可变区基因与轻链可变区基因拼接成单链抗体。再用RS prim erm ix以单链抗体为模板进行第二次聚合酶链反应,从而获得全套抗rhTNF-α的单链抗体基因。以SfiⅠ/NotⅠ,位点定向插入pCANTAB-5E噬菌粒载体,转化大肠杆菌TG1后,经M13KO7辅助噬菌体拯救,构建成全套抗rhTNF-α单链抗体表面展示文库。结果成功构建了rhTNF-α全套单链抗体噬菌体表面展示文库。经M13KO7超感染后,噬斑计数滴度为2.1×1011pfu。结论rhTNF-α全套单链抗体噬菌体表面展示文库的构建,为研究rhTNF-α抗体结合位点,了解其结构与功能的关系以及研究用于临床免疫治疗的新型抗体打下了基础。     

真核基因的反式调控蛋白及其结构与功能

本文综述了真核细胞反式调控蛋白的主要类型、结构与功能研究的最新进展。研究表明:各种反式调控蛋白要发挥其转录活性调节功能,必须具有两种活性结构域,即与DNA特异序列结合的DNA结合结构域和发挥其功能的转录活化结构域。前者目前已鉴定出四种-锌指结构、亮氨酸拉链结构、平衡结构域及碱性a-螺旋结构。转录活化结构域目前已发现酸性a-螺旋、富含谷氨酰胺及富含脯氨酸结构三种类型。其活性是受到多种机制的调节的,如磷酸化、糖基化以及蛋白质-蛋白质相互作用等。作者期望本文对促进国内此领域工作的开展有所裨益。     

人胰岛素突变体基因的融合表达

目的　以 pTXB1作为融合表达载体 ,构建人胰岛素突变体 (M insulin)的基因表达克隆 ,表达及纯化。 方法　基因合成胰岛素突变体的cDNA序列 ,酶切后装入融合表达质粒 pTXB1,基因测序正确后转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,诱导表达 ,初步纯化。结果　融合蛋白的分子量约为 330 0 0 ,表达量占菌体总蛋白的 5 0 %以上。融合蛋白主要以包涵体的形式存在 ,洗涤包涵体后融合蛋白的纯度达到 85 %以上。Western blot表明表达蛋白具有胰岛素抗原活性。活性测定显示 ,每升诱导培养后的菌液表达产物中 ,具有的放射免疫活性为 0 .5U。结论　成功地构建了人胰岛素突变体的融合表达体系 ,为进一步的研究奠定了基础。     

AIDS继发的Kaposi肉瘤相关性人类疱疹病毒独特DNA序列的发现和研究进展

ＡＩＤＳ继发的Ｋａｐｏｓｉ肉瘤相关性人类疱疹病毒独特ＤＮＡ序列的发现和研究进展胡立胜胡晓年封绍奎１综述，沐桂藩２审校中国协和医科大学（１００００５）Ｋａｐｏｓｉ（ＫＳ）是ＡＩＤＳ病人最常见的继发肿瘤，继发概率约为１５～２０％，或继发的终生危险度接近５...     

猴头提取物对小鼠肠蠕动和排便影响实验研究

本文以昆明种小鼠为研究对象,通过测定猴头提取物对正常水鼠小肠蠕动和排便指标,观察得到:猴头提取物对正常小鼠的肠蠕动有促进作用,实验组与对照组差异有显著性;猴头提取物对小鼠的体重无明显影响。实验组与对照组体重差异无显著性;猴头提取物对小鼠排便时间、排便频率和排便量影响的测定结果表明,猴头提取物可缩短便秘小鼠的首次排便时间,增加便秘小鼠的排便次数和排便重量。说明猴头提取物对小鼠的肠道运动功能有正向的调节作用。     

卡维地洛改善心梗大鼠心肌氧化应激状态

目的探讨核转录因子κB(NFκB)活化和超氧阴离子(O-2)、羟自由基(·OH)与心梗后大鼠左室重构及心衰的关系,及药物卡维地洛(Carvedilol)的作用机制。方法将大鼠分为假手术组、心肌梗死(AMI)组和卡维地洛治疗组,在梗后3d进行治疗。治疗组给予卡维地洛1mg·kg-1·d-1灌胃,每日2次;假手术组及心肌梗死组给予等量生理盐水灌胃。治疗4wk后观察各组超声心动图、NFκB活性及氧自由基O-2、·OH的变化。结果心肌梗死4wk后,超声心动图结果显示心梗组大鼠心功能降低,LVEDD、LVESD均增大,EF降低;心肌NFκB活性增高,O-2、·OH水平升高。经卡维地洛干预后,大鼠心功能改善,NFκB活性及O-2、·OH水平降低。结论心肌梗死后,NFκB活性升高,O-2、·OH生成增多,而卡维地洛可以抑制NFκB及O-2、·OH,改善预后。     

非病毒载体在肝癌基因治疗中的应用

增强载体的靶向性可以提高肿瘤基因治疗的效率，减少毒副作用。肝细胞表面含有半乳糖受体，能特异性与去唾液酸糖蛋白、半乳糖、乳糖等结合，因此这些糖类可作为肝细胞特异性识别分子携带外源治疗基因进入肝细胞。表皮细胞生长因子(EGF)、乙肝病毒表面抗原等也可起到类似作用。非病毒载体结合肝细胞特异性识别分子后，能够有效保护外源治疗基因进入靶细胞，添加的修饰成分进一步增强了转染效率。     

噬菌体展示技术构建重组人TNF-α单链抗体库

目的 应用噬菌体展示技术构建抗重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)的单链抗体库.方法 利用噬菌体表面展示技术、绕过杂交瘤技术,提取经免疫BALB/c小鼠淋巴细胞总RNA,用相应引物扩增小鼠免疫球蛋白VH基因和VL基因,构建VH、VL抗体库.由Linker-primer mix经重叠延伸反应将重链可变区基因与轻链可变区基因拼接成单链抗体.再用RS primer mix以单链抗体为模板进行第二次聚合酶链反应,从而获得全套抗rhTNF-α的单链抗体基因.以SfiⅠ/NotⅠ,位点定向插入pCANTAB-5E噬菌粒载体,转化大肠杆菌TG1后,经M13KO7辅助噬菌体拯救,构建成全套抗rhTNF-α单链抗体表面展示文库.结果 成功构建了rhTNF-α全套单链抗体噬菌体表面展示文库.经M13KO7超感染后,噬斑计数滴度为2.1×1011 pfu.结论 rhTNF-α全套单链抗体噬菌体表面展示文库的构建,为研究rhTNF-α抗体结合位点,了解其结构与功能的关系以及研究用于临床免疫治疗的新型抗体打下了基础.     

谓葆对胃炎及胃溃疡作用的研究

目的观察谓葆抗实验性胃炎、胃溃疡及止痛镇痛的作用。方法采用大鼠无水乙醇胃炎模型、消炎痛胃溃疡模型、幽门结扎溃疡模型以及慢性醋酸型溃疡模型,观察谓葆的抗胃炎及抗胃溃疡作用,并采用小鼠醋酸扭体试验方法对其止痛镇痛作用进行观察。结果谓葆低中高剂量(75mg/kg、150mg/kg和300mg/kg)均减少大鼠无水乙醇模型的胃黏膜损伤面积(与对照组相比P<0.05);降低大鼠消炎痛胃溃疡模型的损伤指数(P<0.05)及大鼠幽门结扎溃疡模型的溃疡指数(P<0.05);对大鼠慢性醋酸型溃疡模型也有良好的保护作用,给药组溃疡体积较对照组减少(P<0.05)。谓葆两个剂量(75mg/kg和150mg/kg)均降低醋酸扭体试验小鼠的扭体次数(P<0.05)。结论谓葆具有抗多种胃炎和胃溃疡作用,并有止痛镇痛作用。     

非病毒载体在肝癌基因治疗中的应用

增强载体的靶向性可以提高肿瘤基因治疗的效率,减少毒副作用.肝细胞表面含有半乳糖受体,能特异性与去唾液酸糖蛋白、半乳糖、乳糖等结合,因此这些糖类可作为肝细胞特异性识别分子携带外源治疗基因进入肝细胞.表皮细胞生长因子(EGF)、乙肝病毒表面抗原等也可起到类似作用.非病毒载体结合肝细胞特异性识别分子后,能够有效保护外源治疗基因进入靶细胞,添加的修饰成分进一步增强了转染效率.