lncRNA MEG3对胃癌细胞侵袭、转移及miR-373-5p/BTG3轴的影响

目的 探讨lncRNA母系表达基因3(MEG3)靶向miR-373-5p/BTG3轴抑制胃癌细胞侵袭及转移的作用机制。方法 SGC-7901细胞分为空白组(无转染)、空载组(转染pcDNA)、MEG3组(转染pcDNA-MEG3)。采用qRT-PCR检测SGC-7901细胞中MEG3、miR-373-5p、BTG3 mRNA水平,采用Transwell小室检测各组细胞侵袭数目,划痕实验检测各组细胞划痕愈合率,免疫荧光检测BTG3蛋白水平,Pearson分析胃癌细胞中MEG3、miR-373-5p、BTG3表达相关性,荧光素酶证实lncRNA MEG3对miR-373-5p、BTG3水平调控作用。结果 空白组和空载组MEG3 mRNA、侵袭数目、划痕愈合率、BTG3蛋白水平、miR-373-5p、BTG3 mRNA水平比较差异均无统计学意义(P>0.05);与空载组相比,MEG3组MEG3 mRNA、BTG3蛋白及mRNA水平升高,侵袭数目、划痕愈合率及miR-373-5p mRNA表达降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。MEG3与miR-373-5p呈现负相关性(r...     

长链非编码RNA C5orf66-AS1通过靶向miR-637对胃癌细胞增殖、凋亡的影响

目的：探讨长链非编码RNA C5orf66-AS1通过靶向miR-637对胃癌(GC)细胞增殖、凋亡的影响,为GC临床治疗提供依据。方法：收集32例GC病人的癌组织及其癌旁组织并体外培养人胃腺癌细胞系MKN28、MKN451、BGC823、MGC803、AGS及正常胃上皮细胞系GES-1,qRT-PCR实验检测其C5orf66-AS1和miR-637表达。将对数生长期的AGS细胞利用脂质体转染试剂进行转染并分为对照组、GV144组、GV144-C5orf66-AS1组、miR-NC组、miR-637 mimics组、GV144-C5orf66-AS1+miR-NC组、GV144-C5orf66-AS1+miR-637 mimics组。CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术分析细胞凋亡情况;Western blotting实验测定细胞周期蛋白CyclinD1、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)及其同源蛋白Bax相对表达水平;RNA免疫共沉淀实验验证C5orf66-AS1和miR-637的作用关系。结果：与癌旁组织或正常胃上皮细胞系GES-1相比,C5orf66-AS1和miR-637在...     

lncRNA Dleu2通过调控miR-150-5p对胃癌细胞恶性行为、USF2表达的影响

目的 探究长链非编码(lnc)RNA淋巴细胞白血病缺失基因(Dleu2)通过调控miR-150-5p对胃癌细胞恶性行为、上游刺激因子(USF)2表达的影响。方法 取MKN1细胞将其分为胃癌细胞(SC)组,胃癌细胞+lncRNA Dleu2-NC(LN)组,胃癌细胞+lncRNA Dleu2抑制剂(LI)组、胃癌细胞+lncRNA Dleu2激动剂(LM)组、胃癌细胞+miR-150-5p-NC(MN)组、胃癌细胞+miR-150-5p抑制剂(MI)组、胃癌细胞+miR-150-5p激动剂(MM)组、胃癌细胞+lncRNA Dleu2抑制剂+miR-150-5p激动剂(DP)组。实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测正常胃上皮细胞及4种胃癌细胞系中lncRNA Dleu2、miR-150-5p表达水平,将阴性对照、lncRNA Dleu2、miR-150-5p类似物转染至胃癌细胞中,小室法检测细胞恶性行为,Western印迹检测USF2蛋白表达,双荧光素酶报告实验证实lncRNA Dleu2和miR-150-5p的相互作用。结果 与正常胃癌上皮细胞系GES-1相比,胃癌细胞系中...     

lncRNA C5orf66-AS1通过调节CYC1表达对胃癌细胞增殖和转移的影响

目的:探讨长链非编码RNA C5orf66反义链1(lncRNA C5orf66-AS1)对胃癌细胞增殖和转移的影响。方法:以2019年6月—2021年6月收集的63例胃癌患者的癌组织与癌旁组织、人胃黏膜细胞GES-1及胃癌细胞BGC823、SGC7901、AGS、MKN28为研究对象,分别检测组织和细胞中C5orf66-AS1和细胞色素c1(CYC1z)蛋白表达情况。将AGS细胞分为7组,分别检测各组细胞增殖、迁移、侵袭以及细胞中C5orf66-AS1表达水平和CYC1、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9蛋白表达情况。结果:与癌旁组织比较,胃癌组织中C5orf66-AS1表达降低,CYC1蛋白表达升高(P<0.05)。与人胃黏膜细胞GES-1比较,胃癌细胞BGC823、SGC7901、AGS、MKN28中C5orf66-AS1表达降低,CYC1蛋白表达升高(P<0.05),且AGS细胞中C5orf66-AS1表达最低,CYC1蛋白表达水平最高。沉默C5orf66-AS1促进AGS细胞增殖、迁移、侵袭及CYC1、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达;过表达C5orf66-AS1抑制AGS细胞增殖、迁移、侵袭及CYC1、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达;过表达CYC1可逆转C5orf66-AS1对AGS细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论:过表达C5orf66-AS1可能通过下调CYC1抑制AGS细胞增殖、迁移和侵袭。     

Notch信号通路对肝癌细胞迁移的调控机制研究

目的：探讨Notch信号通路对肝癌细胞迁移的调控机制。方法体外培养HepG2、MHCC97H、Huh-7肝癌细胞株和HL-7702正常肝细胞株,Transwell小室检测细胞迁移能力,蛋白免疫印迹法检测各细胞系Snail、E-cadherin蛋白表达水平,实时定量RT-PCR检测Snail、E-cadherin mRNA表达水平;采用DAPT阻断Notch信号通路,比较其对细胞迁移能力和Snail、E-cadherin蛋白及mRNA表达水平的影响。结果 HepG2、MHCC97H、Huh-7细胞株迁移能力高于HL-7702细胞株（P﹤0.05）,HepG2、MHCC97H、Huh-7肝癌细胞株迁移能力比较差异无统计学意义（P﹥0.05）。HepG2、MHCC97H、Huh-7细胞Snail蛋白及mRNA高于HL-7702细胞,E-cadherin蛋白及mRNA表达低于HL-7702细胞（P﹤0.05）,HepG2、MHCC97H、Huh-7细胞间Snail、E-cadherin蛋白及mRNA表达差异无统计学意义（P﹥0.05）。HepG2、MHCC97H、Huh-7细胞经DAPT处理后迁移能力低于未经DAPT处理的细胞株（P﹤0.05）,HL-7702细胞DAPT处理与未经DAPT处理迁移能力比较差异无统计学意义（P﹥0.05）。DAPT处理后,HepG2、MHCC97H、Huh-7细胞株Snail蛋白及mRNA表达水平降低,E-cadherin蛋白及mRNA表达增加,与未经DAPT处理的细胞株比较差异具有统计学意义（P﹤0.05）,HepG2、MHCC97H、Huh-7细胞间Snail、E-cadherin蛋白及mRNA表达差异无统计学意义（P﹥0.05）。结论 Notch信号通路可能是通过调控Snail、E-cad-herin通路调控肝癌细胞的迁移过程。     

阻断Notch信号通路对肝癌细胞迁移和COX-2蛋白表达的影响

目的探讨阻断Notch信号通路对肝癌细胞迁移的和环氧化酶-2(COX-2)蛋白表达的影响。方法在体外培养肝癌细胞系Hep G2、Huh-7和正常非肿瘤细胞系HL-7702,在Transwell小室检测细胞的迁移能力,对不同肝癌细胞系及正常非肿瘤肝细胞系的侵袭迁移能力进行比较;采用Western Blot的方法检测COX-2、E-cadher-in、Snaill的蛋白表达;采用5μmol/L的γ-分泌酶抑制剂(DAPT)阻断Notch信号通路,通过对肝癌细胞系Hep G2、Huh-7和对照组(空培养基)细胞迁移侵袭的比较得出DAPT和NS-398阻断Notch信号通路对肝癌细胞迁移能力的影响。结果不同肝癌细胞系及正常非肿瘤肝细胞系的侵袭迁移能力比较结果显示,HL-7702细胞系细胞的迁移和侵袭数量分别为(128.23±10.34)、(112.34±9.02)个,低于Hep G2、Huh-7细胞系细胞迁移、侵袭数量,差异有统计学意义(P0.05);DAPT和NS-398处理对肝癌细胞迁移能力的影响结果显示,加5μmol/L的DAPT后Hep G2的细胞迁移侵袭数量分别为(213.36±9.02)和(197.53±11.27)个,Huh-7的细胞迁移侵袭数量分别为(201.74±11.23)和(179.63±9.26)个,采用50μmol/L NS-398后,Hep G2的细胞迁移侵袭数量分别为(203.26±11.25)和(187.54±11.37)个,Huh-7的细胞迁移侵袭数量分别为(187.63±8.87)和(165.64±8.45)个。与对照组相比,使用DAPT或NS-398处理后的肝癌细胞在Transwell小室中迁移侵袭能力均显著降低,两者比较差异有统计学意义(P0.05);Hep G2和Huh-7两细胞系在5μmol/L DAPT干预后,COX-2、Snail蛋白表达明显出现下调,而E-cadher-inl表达明显出现上调现象。结论 Notch信号通路在肝癌细胞侵袭迁移过程中起着非常重要的作用,阻断后细胞的迁移能力下降,Notch调控COX-2后其蛋白表达下调,然后调控Snail/E-cadherin的表达,从而改变肿瘤细胞的迁移过程。     

lncRNA MEG3靶向调节miR-27a-3p抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的:探究lncRNA MEG3对胃癌(GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法:qRT-PCR检测人正常胃上皮细胞GES-1和GC细胞(BGC823、MGC803、SGC7901、AGS、MKN28、MKN451)中MEG3及miR-27a-3p表达差异;将AGS细胞分为对照组、GV144组、GV144-MEG3组、GV144-MEG3+miR-27a-3p NC组、GV144-MEG3+miR-27a-3p mimics组;比较各组AGS细胞中MEG3及miR-27a-3p表达情况;检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,Western blot检测ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白表达,双荧光素酶报告实验验证MEG3与miR-27a-3p的靶向关系。结果:与GES-1细胞相比,GC细胞中MEG3水平降低,miR-27a-3p水平升高(P<0.05);与对照组相比,GV144-MEG3组MEG3水平升高,miR-27a-3p、ki-67、MMP-2、MMP-9水平及增殖、迁移和侵袭能力降低(P<0.05);上调miR-27a-3p表达可减弱MEG3过表达对AGS细胞恶性行为的抑制作用。miR-27a-3p是MEG3的靶基因。结论:过表达MEG3可能通过靶向下调miRNA-27a-3p表达抑制AGS细胞增殖、迁移及侵袭。