肾移植受者血清抗血管内皮细胞特异性抗体的提取和纯化

目的  探讨肾移植术后出现排斥反应的受者血清中抗血管内皮细胞特异性抗体的提取和纯化方法。方法  首先分离培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)。收集肾移植术后肾功能不良受者的血清样本, 应用流式细胞术进行抗血管内皮细胞特异性抗体的筛选; 用Luminex抗体检测平台检测血清中抗人类白细胞抗原(HLA)和主要组织相容性复合体Ⅰ类相关链A (MICA)的抗体。在确定血清标本中存在有抗血管内皮细胞特异性抗体后, 用HUVEC将其吸附。洗涤细胞后再将吸附的抗体从细胞膜上洗脱下来, 再用Protein-A/G磁珠再次纯化和浓缩洗脱液中的抗体IgG。采用流式细胞术检测洗脱液中抗体活性, 用SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)凝胶和免疫印迹法鉴定纯化的抗血管内皮细胞特异性抗体(IgG)。结果  在386例肾移植受者的血清中, 选取血清肌酐(Scr)>400 μmoI/L、抗HLA抗体阴性、抗MICA抗体阴性和荧光反应强度(MFI)>16的5例受者的血清样本, 纯化后的抗血管内皮细胞特异性抗体IgG在SDS-PAGE凝胶显示免疫球蛋白重链(纯度>95%)。流式细胞术结果显示纯化的抗体具有重新结合血管内皮细胞表面抗原的特性。结论  采用人脐静脉血管内皮细胞吸附肾移植受者血清中抗血管内皮细胞特异性抗体的提纯方法可取得较好效果。     

强直性脊柱炎患者炎性指标的临床意义

目的 探索强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis, AS)患者人类白细胞抗原(human leukocyte antigen, HLA)B27 (HLA-B27)核酸、C反应蛋白(CRP)、抗链球菌溶血素O (ASO)、类风湿因子(RF)及红细胞沉降率(ESR)水平与AS的相关性,辅助AS的早期诊断。方法 选取101例AS患者(AS组)及同期入院的68例健康人(对照组)的临床资料进行分析。分析其外周血中HLA-B27、CRP、抗ASO、RF及ESR的水平。结果 AS组HLA-B27的阳性率为90.1%,高于对照组6.1%,差异有统计学意义(P<0.001)。AS组CRP水平为(17.23±29.44)mg·L^-1,高于对照组(1.36±1.90)mg·L^-1,差异有统计学意义(P<0.001)。AS组和对照组的ESR水平分别为(32.90±27.06)mm·h^-1、(8.60±6.93)mm·h^-1,差异有统计学意义(P<0.001)。HLA-B27对AS的诊断...     

抗主要组织相容性相关蛋白MICA / B 的单克隆抗体制备及应用

目的:制备抗主要组织相容性相关蛋白A/ B(MICA/ B)的单克隆抗体并对其特异性进行验证。方法:以重组MICA*012 蛋白免疫小鼠后将其脾细胞与SP2/0 细胞进行融合和筛选得杂交瘤细胞株,并用ELISA 对其中9B10 细胞株产生的单克隆抗体进行效价检测以及通过Western blot、Luminex、免疫荧光对其特异性进行检测。结果:获得6 株杂交瘤细胞株,其中9B10 细胞株产生单克隆抗体(mAb)9B10 的最低反应浓度为0.02 ng/ μl,且mAb 9B10 可应用于Western blot、Luminex 和免疫组化荧光试验对MICA 和MICB 分子的检测。结论:成功获得可同时检测MICA 和MICB 表达的单克隆抗体9B10。