miR-155调节淋巴细胞免疫功能以及与病毒感染的相关性

miR-155在活化淋巴细胞内高表达,参与各种淋巴细胞亚群,包括B细胞、CD8+T及CD4+T细胞,辅助T细胞1型（Th1）、Th2、Th17和调节性T细胞（Treg）的免疫调节过程。此文就miR-155在分子水平和细胞水平参与淋巴细胞发展、介导调节免疫应答,以及在单核细胞增生李斯特菌、HIV和HBV等病毒感染中的作用进行综述。     

IL-4诱导THP-1细胞表达DC-SIGN的信号通路调节研究

目的 研究IL-4诱导THP-1细胞表达DC-SIGN的信号调节通路,探索DC -SIGN表达的信号调控网络.方法 以佛波脂(PMA)刺激THP-1细胞24h后加入IL-4作用48 h诱导DC-SIGN的表达,并设ERK阻断剂、NF-κB阻断剂、JAK-STAT阻断剂和MAPK阻断剂处理组.用RT-PCR检测DC-SIGN的mRNA表达,Western blot检测胞质内DC-SIGN蛋白的表达,流式细胞术检测细胞表面DC-SIGN的表达.另外,提取IL-4诱导0、10、20、30、60和120 min的THP-1细胞胞质和胞核蛋白,Western blot检测不同信号通路的信号蛋白及其磷酸化蛋白的变化.结果 IL-4可以大幅提高DC-SIGN在THP-1细胞上的表达,包括mRNA和胞膜蛋白水平.在mRNA、胞质和细胞表面蛋白表达3个水平上,ERK通路阻断剂阻断效果最好,几乎完全阻断了IL-4的诱导效果,JAK-STAT和NF-κB通路阻断剂具有部分阻断效果,而p38通路阻断剂无阻断效果.信号蛋白检测结果显示,IL-4诱导0～120 min内,胞质磷酸化ERK1/2、磷酸化STAT6以及NF-κBp65、NF-κBp50、磷酸化IKB和磷酸化AKT随时间推移浓度逐渐升高,而p38MAPK及其磷酸化蛋白浓度无明显改变.胞核内胞质磷酸化ERK1/2、磷酸化STAT6以及NF-κBp65和NF-κBp50随时间推移浓度逐渐升高.结论 ERK、JAK-STAT和NF-κB通路参与了DC-SIGN启动子的活化,其中以ERK通路为主.     

Yamagata系乙型流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立

目的制备Yamagata系乙型流感病毒血凝素蛋白(hemagglutinin, HA)的特异性单克隆抗体, 建立检测Yamagata系乙型流感病毒的双抗体夹心ELISA方法。方法用Yamagata系乙型流感病毒(B/Phuket/3073/2013)抗原免疫BALB/c小鼠, 取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合, 通过4次有限稀释获得阳性杂交瘤细胞并建株。将单克隆抗体1F7和2H6分别作为捕获抗体和检测抗体, 建立一种检测Yamagata系乙型流感病毒的双抗体夹心ELISA法。结果该方法中捕获抗体1F7在96孔板的包被量为40 ng/孔, 检测抗体2H6工作浓度为100 ng/孔;该方法仅能与Yamagata系乙型流感病毒发生反应, 具有较强特异性。灵敏度分析显示, 该方法对病毒尿囊液和病毒纯化HA蛋白最低检测值分别为2-1 HAU/100 μL和1.22 ng/mL, 具有较高灵敏度。重复性试验表明, 该方法批内和批间重复性变异系数均小于5%。结论本研究建立的ELISA方法特异性强、灵敏度高、重复性好, 为Yamagata系乙型流感病毒快速诊断及定量检测提供技术支持。