人脐带间充质干细胞向血管内皮祖细胞诱导分化的实验研究

目的探讨人脐带间充质干细胞定向诱导分化为血管内皮祖细胞的可行性,为构建组织工程血管瓣膜内皮化提供新的细胞来源。方法无菌条件下取剖宫产新生儿脐带,复合胶原酶消化法获取脐带间充质干细胞进行培养,以流式细胞仪检测脐带间充质细胞的表面标志。取扩增3～6代的脐带间充质干细胞用VEGF和b-FGF诱导分化。用免疫荧光法鉴定内皮祖细胞的标志。结果脐带间充质干细胞可以诱导分化为血管内皮样细胞,表达CD34、CD133和vWF,且Dil-acLDL实验阳性。结论脐带间充质干细胞可以诱导分化为血管内皮祖细胞,可为构建组织工程血管瓣膜提供新的种子细胞来源。     

快速纯化新生大鼠许旺细胞的新方法

目的探讨一种简单高效的许旺细胞纯化方法。方法选用3～5d的SD乳鼠双侧坐骨神经,用DispaseⅡ短时消化去除神经外膜和束膜,用复合胶原酶NB4彻底消化、离心,获得原代细胞。细胞培养达到亚融合状态后,置于4℃冰箱约5min,收集首先脱壁的许旺细胞。最后用S100免疫荧光法和流式细胞仪法鉴定许旺细胞的纯度。结果通过酶消化法剥脱神经外膜和束膜,获得纯度85%以上的原代许旺细胞;经低温差速法进一步纯化,纯度可达99%。结论先用酶消化神经外膜和束膜,再用低温差速分离许旺细胞,能够获得高纯度的许旺细胞,是一种简便高效的纯化手段。     

人脐带间充质干细胞与乳鼠许旺细胞共培养向类神经元样细胞的分化

背景：间充质干细胞可以通过化学诱导或者共培养的方法分化为类神经细胞,但是对于间充质干细胞是与许旺细胞共培养分化为类神经元还是类许旺细胞,还存在争议。 目的：探索大鼠许旺细胞对人脐带间充质干细胞诱导分化作用。 方法：将1×109 L-1人脐带间充质干细胞通过Transwel 隔离小室与1×109 L-1SD乳鼠许旺细胞共培养2周,观察脐带间充质干细胞的形态变化,并用免疫荧光法检测其表型变化。 结果与结论：共培养2周后,部分间充质干细胞出现类似神经元的形态,且表达nestin,NF-200,β-Ⅲ-tubulin等神经元特异性标记物,不表达许旺细胞特异性表记物S100和胶质细胞特异性标记物MAB1580。提示人脐带间充质干细胞可以与大鼠许旺细胞非接触共培养分化为类神经元。     

胫腓骨开放骨折外固定改内固定后发生并发症的影响因素

目的探讨胫腓骨开放骨折去除外固定器改内固定后发生并发症的影响因素。方法回顾分析54例胫腓骨开放骨折一期临时外固定二期改内固定手术患者的临床资料,包括二期术前白细胞计数(WBC)、中性粒细胞(N)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、血沉(ESR)、降钙素原(PCT)、外固定器放置时间等情况,评价各项指标对内固定术后皮肤坏死缺损、感染率、骨折愈合时间及踝关节功能的影响。结果 54例均获得随访,时间10~12个月。N、hs-CRP、PCT是术后感染、皮肤坏死缺损、骨折延迟愈合、踝关节功能障碍并发症的相关危险因素,多元Logistic回归分析3项指标的P值分别为0.029、0.046、0.011。结论胫腓骨开放骨折外固定改内固定应待N、hs-CRP、PCT 3项指标降至正常区间后施行手术,可减少术后感染、皮肤坏死缺损、骨折延迟愈合、踝关节功能障碍并发症发生。     

磷酸盐缓冲液纯化许旺细胞的实验研究

目的 探索应用磷酸盐缓冲液(PBS)纯化新生小鼠许旺细胞的可行性. 方法 取新生(出生5～7 d)C57BL/6小鼠的坐骨神经,采用0.2%的复合胶原酶NB4消化获取许旺细胞,然后采用含10%FBS的低糖DMEM培养基培养24 h.在16℃～20℃PBS中振荡差速分离纯化许旺细胞,48 h后再重复1次,共进行两次纯化.每次纯化后应用S-100免疫荧光组化法鉴定许旺细胞的纯度. 结果 应用16℃～20℃PBS纯化新生鼠坐骨神经来源的许旺细胞2次后,经免疫荧光组化法鉴定许旺细胞纯度可达98%以上. 结论 该法可以纯化新生小鼠坐骨神经来源的许旺细胞,是一种经济和高效的纯化新方法.     

双钢板和钩钢板固定锁骨远端NeerⅡB型骨折临床研究

目的 比较锁骨外侧锁定双钢板和钩钢板固定锁骨远端NeerⅡB型骨折的临床疗效.方法 选择该院2014年12月至2020年7月采用锁骨外侧锁定双钢板和钩钢板治疗固定锁骨远端NeerⅡB型骨折患者49例,其中锁定双钢板固定24例(双钢板组),钩钢板固定25例(钩钢板组).比较两组患者术后Constant-M urley评分(C-M评分),疼痛、肩关节外展角度及术后并发症情况.结果 术后随访时间为8～36个月,平均随访(16.80±5.72)个月.两组患者手术时间、骨折愈合时间比较差异无统计学意义(P＞0.05),双钢板组患者术后3个月肩关节C-M评分及疼痛、肩关节外展、恢复工作时间均优于钩钢板组(P＜0.05).钩钢板组术后有锁骨骨不连1例,肩峰骨溶解1例,肩袖损伤4例.双钢板组无以上并发症发生.结论 双钢板固定锁骨远端NeerⅡB型骨折能进行早期关节功能锻炼,骨折愈合良好,关节活动范围好,是一种治疗锁骨远端NeerⅡB型骨折的合适方法.     

从小鼠脂肪组织中分离纯化雪旺细胞的实验研究

目的 探索从新生小鼠脂肪组织中分离纯化雪旺细胞的可行性.方法 取新生(出生5～7 d)绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠的腹股沟皮下脂肪,采用0.2%的复合胶原酶NB4消化法分离获取细胞,然后用含10%胎牛血清(FBS)的低糖DMEM培养基培养.用0.1%的复合胶原酶NB4差速分离纯化雪旺细胞,每48 h纯化1次,共进行2次纯化.用p75免疫荧光法鉴定雪旺细胞并分析其纯度.结果 从小鼠腹股沟皮下脂肪中分离纯化获得的细胞是雪旺细胞,经过2次纯化,其纯度可达90%.结论 从小鼠脂肪组织中可以分离纯化获得雪旺细胞,为组织工程人工神经种子细胞提供一种新的来源.     

超顺磁性纳米铁颗粒标记许旺细胞及体外磁共振示踪的实验研究

目的 研究超顺磁性纳米铁颗粒(SPIO)体外标记小鼠许旺细胞(SCs)及MRI成像示踪的可行性.方法 分离、纯化新生C57BL/6小鼠(5～7 d)的许旺细胞,取已分别用25.0 μg/ml、50.0 μg/ml浓度SPIO标记的0.5×106、1.0×106、5.0×106个许旺细胞,普鲁士蓝染色和透射电镜观察标记细胞内铁颗粒的分布情况,并用不同MRI扫描序列,测定标记的细胞群信号.结果 0.5×106、1.0×106、5.0×106小鼠许旺细胞与不同浓度的SPIO共同培养24 h后,普鲁士蓝染色见细胞内有许多蓝染的铁颗粒;透射电镜检查显示致密的铁颗粒位于细胞的吞噬泡或溶酶体中.体外MRI呈明显的低信号改变,以T2WI和GRE/30°序列改变最为明显.结论 SPIO可以标记小鼠许旺细胞,应用MRI可以对其进行体外示踪和监测.     

双钢板和钩钢板固定锁骨远端NeerⅡB型骨折临床研究

目的 比较锁骨外侧锁定双钢板和钩钢板固定锁骨远端NeerⅡB型骨折的临床疗效.方法 选择该院2014年12月至2020年7月采用锁骨外侧锁定双钢板和钩钢板治疗固定锁骨远端NeerⅡB型骨折患者49例,其中锁定双钢板固定24例(双钢板组),钩钢板固定25例(钩钢板组).比较两组患者术后Constant-M urley评分(C-M评分),疼痛、肩关节外展角度及术后并发症情况.结果 术后随访时间为8～36个月,平均随访(16.80±5.72)个月.两组患者手术时间、骨折愈合时间比较差异无统计学意义(P＞0.05),双钢板组患者术后3个月肩关节C-M评分及疼痛、肩关节外展、恢复工作时间均优于钩钢板组(P＜0.05).钩钢板组术后有锁骨骨不连1例,肩峰骨溶解1例,肩袖损伤4例.双钢板组无以上并发症发生.结论 双钢板固定锁骨远端NeerⅡB型骨折能进行早期关节功能锻炼,骨折愈合良好,关节活动范围好,是一种治疗锁骨远端NeerⅡB型骨折的合适方法.