绿色荧光蛋白标记兔BMSCs体外成骨的定量能谱分析

目的观察绿色荧光蛋白( GFP)标记的兔骨髓间充质干细胞( BMSCs)成骨诱导后形态学改变和体外骨生成中矿化钙结节的形成,并结合扫描电镜和X射线能谱分析技术( SEM/EDS)对矿化钙结节元素进行定量能谱分析。方法
　　用携带GFP基因的腺病毒转染兔BMSCs进行示踪标记,并诱导细胞向成骨方向分化,通过倒置荧光显微镜、钙结节茜素红染色观察成骨诱导后细胞形态改变和矿化钙结节的形成,结合SEM/EDS技术观测矿化钙结节的表面微观结构及其元素构成。结果腺病毒介导GFP基因( Ad-GFP )转染兔 BMSCs后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,经成骨诱导后细胞形态向成骨方向分化,并形成不透光的矿化钙结节,钙结节茜素红染色见红色矿化结节,SEM下见矿化钙结节散布于细胞中,细胞重叠生长,分泌基质旺盛。 EDS分析显示矿化钙结节主要组成元素与正常骨组织相同,其钙磷比(Ca/P)为1.55,接近正常骨组织钙磷比1.49。结论 Ad-GFP能成功转染并标记兔BMSCs,成骨诱导后BMSCs向成骨方向分化,具备较好的骨生成能力,BMSCs体外矿质化成骨过程与体内基本相同。     

hBMP-2基因转染兔骨髓间充质干细胞体内移植后hBMP-2的活性检测

目的 探究人骨形态发生蛋白-2(human bone morphogenetic protein-2 ,hBMP-2)基因植人兔股骨头坏死模型体内后的活性，为后续实验奠定理论基础。方法 1.采用髓芯减压联合液氮冰冻法制备兔股骨头坏死模型;2.将造模成功的兔子随机分为A、B、C3组（n = 12) ,A组不植人材料，为对照组，B、C组分别植人DBM/BMSCs、hBMP-2/BMSCs/DBM；3.术后第1、第2、第3 周各组分别处死4只兔子，分别运用PCR、RTFQ-PCR、Western Blot检测股骨头内hBMP-2基因和蛋白的表达量，评估hBMP-2 基因在兔体内的活性。结果 植人后，在第1、第2、第3周，PCR结果示：A、B两组KBMP-2基因呈阴性表达，C组hBMP-2基因呈阳性表达；RTFQ-PCR 示：C 组相对表达量分别为 1，0.947 ±0.025,0.895 ±0.059, P = 0. 081； Western blot 示：A、B 两组 hBMP-2蛋白在兔体内呈阴性表达,C组hBMP-2蛋白呈阳性表达；凝胶成像系统分析显示：C组hBMP-2蛋白表达灰度值（目的/内参）分别为：0. 530 ± 0. 056、0. 507 ± 0. 066、0. 475 ±0. 086，且两两之间比较P> 0. 05。结论 hBMP-2基因转染BMSCs植人兔股骨头坏死模型体内后能够稳定表达，进而能够持续诱导BMSCs向骨细胞分化,达到修复股骨头坏死的目的。     

腺病毒 rhBMP-2转染兔 BMSCs 复合同种异体脱钙骨基质的生物相容性研究

目的：探讨腺病毒重组人骨形态发生蛋白-2（Ad-rhBMP-2）转染兔骨髓间充质干细胞（BMSCs）复合同种异体脱钙骨基质（DBM）的生物相容性。方法参照 Urist 方法制得兔同种异体 DBM 材料,免疫组化观察转染后 BMSCs 内 BMP-2表达情况;转染48 h 后复合同种异体 DBM 上,扫描电镜观察细胞生长、贴附情况,MTT 法检测细胞增殖情况。结果腺病毒转染48 h 后,BMSCs 能够表达 BMP-2,扫描电镜可见转染后的细胞在 DBM 上贴附良好并且大量增殖。MTT 检测结果显示,种植于DBM 上的转染后细胞增殖情况正常,与对照组比较差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论Ad-BMP-2转染 BMSCs 与同种异体DBM 的生物相容性良好。     

SOFA评分、NPR和APRI与脓毒症相关性肝损伤预后的关系及意义

探讨SOFA评分、NPR、APRI与脓毒症相关性肝损伤患者预后的关系。采用回顾性病例对照研究,选取2018年7月—2021年12月治疗无效死亡的48例脓毒症相关性肝损伤患者（死亡组）、并选取同期治疗后痊愈出院的72例脓毒症相关性肝损伤患者作为存活组,对比两组入住ICU 24 h内的SOFA评分、NPR、APRI等指标,采用Logistic多因素回归模型分析,了解其与患者预后的关系。死亡组SOFA评分、NPR、APRI值均显著高于存活组（P<0.05）;死亡组的年龄、机械通气患者占比、APACHEⅡ评分、COPD占比均高于存活组,死亡组的肝损伤持续时间、ICU治疗时间显著长于存活组（P<0.05）;死亡组的外周血WBC、乳酸、PCT、ALT、TBIL均高于存活组（P<0.05）;Logistic回归模型结果显示,年龄增大、肝损伤持续时间延长、APACHEⅡ评分增高、合并COPD、乳酸增高、PCT增高、TBIL增高、SOFA评分升高、NPR增高、APRI增高脓毒症相关性肝损伤患者死亡的独立危险因素（P<0.05）。脓毒症相关性肝损伤死亡患者的SOFA评分、NPR、A...     

组织工程骨表面微观形貌和生物矿化的实验研究

目的：用绿色荧光蛋白( GFP)标记结合扫描电镜和X射线能谱分析( SEM/EDS)技术对组织工程骨的表面微观形貌和生物矿化进行观测,以评价脱钙骨( DBM )支架体外构建组织工程骨的生物性能。方法用重组腺病毒介导GFP基因转染兔骨髓间充质干细胞( BMSCs)进行示踪标记,细胞与DBM复合经成骨诱导后,通过倒置荧光显微镜对细胞生长情况进行即时观察,结合SEM/EDS技术,观测组织工程骨的表面微观形貌和生物矿化。结果在倒置荧光显微镜下见细胞在DBM支架上能较好的黏附、重叠生长和增殖,体外培养至14 d 时,细胞内 GFP 有较高水平瞬时表达。SEM见DBM呈疏松多孔结构,孔隙直径为300~600μm,孔隙率达90%。 SEM下观察组织工程骨,见细胞在DBM网孔内表面贴壁生长,分泌基质旺盛,并可见粗糙的生物矿化物覆盖支架。 EDS显示其表面为钙、磷沉积物,其钙磷比( Ca/P)为1．46。结论 DBM体外构建组织工程骨有非常好的生物性能,GFP标记结合SEM/EDS技术可以作为DBM体外构建组织工程骨较好的评价手段。     

枸橼酸抗凝在脓毒症伴高危出血行连续性肾脏替代治疗患者中的应用效果

目的 分析枸橼酸抗凝在脓毒症伴高危出血行连续性肾脏替代治疗(continuous renal replacement therapy, CRRT)患者中的应用效果。方法 纳入2020年1月至2022年12月在郑州市第一人民医院接受CRRT治疗且伴有高危出血风险的105例脓毒症患者作为研究对象,应用随机数字表法分为无抗凝组、肝素组和枸橼酸组三组,每组35例。无抗凝组不采取任何抗凝治疗措施,肝素组给予低分子肝素进行抗凝治疗,枸橼酸组给予枸橼酸抗凝治疗,观察三组抗凝治疗前后凝血功能,统计两组过滤器使用时间、实际超滤量、抗凝效果及出血相关并发症发生情况。结果 治疗后,三组凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(FIB)和活化凝血酶时间(APTT)组间比较具有统计学意义(P<0.05),其中,无抗凝组TT、PT、APTT长于肝素组和枸橼酸组(P<0.05),无抗凝组FIB高于肝素组和枸橼酸组(P<0.05);治疗后枸橼酸组TT、PT、APTT短于肝素组(P<0.05),FIB高于肝素组(P<0.05)。三组的过滤器使用时间和实际超滤量组间比较具有统计学...     

腺病毒介导hBMP-2转染BMSCs复合DBM修复兔缺血性股骨头坏死的实验研究

摘要： 目的 评价人骨形态发生蛋白（hBMP） -2/骨髓间充质干细胞（BMSCs）/脱钙松质骨（DBM）对兔股骨头坏 死的修复作用, 探索临床治疗股骨头坏死的新途径。方法 髓芯减压联合液氮冰冻法制备兔股骨头坏死模型。将 造模成功兔随机分为 A、 B、 C、 D 4 组(n=12), A 组不植入材料, 为对照组, B、 C、 D 分别植入 DBM、 DBM/BMSCs、 hBMP- 2/BMSCs/DBM。术后 4、 8 及 12 周各组分别处死 4 只, 运用 X 线技术、 大体标本观察、 HE 染色技术评判股骨头坏死 修复情况。结果 X 线示 A 组股骨头塌陷, 无明显成骨; B、 C、 D 组股骨头缺损区有骨再生现象, 但 D 组再生情况明 显优于 B、 C 组。Lane-Sandhu X 线评分 A 组B、 C 组>D 组 （P < 0.05), B 和 C 组差异无统计学意义。结论 hBMP-2/BMSCs/DBM 植入体内后能 够诱导 BMSCs 向成骨方向分化, 对兔股骨头坏死具有较好的修复效果。     

Ad-BMP-2/GFP转染兔骨髓间充质干细胞前后生物学特性的研究

目的：对Ad－BMP－2／GFP转染兔骨髓间充质干细胞（ BMSCs ）前后的生物学特性进行观察。方法采用密度梯度离心结合贴壁培养法分离获取第10代兔BMSCs,应用流式细胞仪检测细胞表面抗原CD44、CD45、CD29的表达,用携带BMP2和GFP基因的腺病毒转染细胞。分别通过倒置荧光显微镜下观察转染前后细胞形态改变,MTT 法分析转染前后细胞增殖的情况,体外Ⅰ型胶原免疫组化染色和钙结节茜素红染色以观察转染前后细胞的成骨分化情况,Western Blot 检测转染前后细胞内目的蛋白表达。结果密度梯度离心结合贴壁培养法能获取高纯度第10代兔BMSCs ,流式细胞仪检测显示CD44、CD29阳性,CD45阴性。 Ad－BMP－2／GFP转染兔BMSCs后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,细胞形态向成骨方向分化,在短时间内能促进兔BMSCs 的增殖（P＜0．05）,Ⅰ型胶原免疫组化染色、茜素红染色均呈阳性,Western Blot显示细胞内稳定表达BMP－2目的蛋白。结论 Ad－BMP－2／GFP能成功转染兔骨髓间充质干细胞并能改变其生物学特性。