硫酸钙对人骨髓基质干细胞成骨过程中VDR表达的影响

目的 观察硫酸钙对入骨髓基质干细胞(hBMSC)成骨诱导过程中维生素D受体(VDR)基因表达的影响.方法 原代分离培养hBMSC,在倒置显微镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测hBMSC表型,取第2代hBMSC,分为硫酸钙组与对照组,分别用含或不含硫酸钙的成骨诱导液进行成骨诱导,诱导培养14 d后收集细胞,实时定量PCR检测两组VDR mRNA的表达水平.结果 流式细胞仪检测hBMSC表面抗原,CD34、CD45表达阴性,CD29、CD71、CD106表达阳性,阳性率分别为98.74％、65.74％、68.46％.与对照组相比,硫酸钙组倒置显微镜观察细胞呈长梭形,细胞两极成束状排列,细胞增殖变快,细胞呈多个散在的细胞结节,并且产生大量基质成分.实时定量PCR结果显示,与对照组相比,硫酸钙组VDR mRNA的相对表达明显增加[(2.64±0.49)比(0.99 ±0.16),t=6.297,P<0.01].结论 在hBMSC成骨诱导过程中,硫酸钙能够促进VDR基因表达.     

永生化人骨髓间充质干细胞系的建立及致瘤性的检测

目的构建永生化的人骨髓间充质干细胞系并对其分化能力及其安全性进行评估,以供骨科基础研究及临床应用。方法原代培养人骨髓间充质干细胞,外源性hTERT导入人骨髓间充质干细胞激活端粒酶,获得永生化的人骨髓间充质干细胞。TGF-β_1和地塞米松诱导,使其向软骨细胞分化,并用原位杂交和免疫组化检测Ⅱ型胶原将永生化的人骨髓间充质干细胞和原代培养的人骨髓间充质干细胞按一定密度接种于双层软琼脂培养基中,观察2周后克隆形态并计算克隆形成率。两种细胞接种于裸鼠背部皮下,分别在术后3天、1个月和3个月肉眼观察。结果原代培养人骨髓间充质干细胞和永生化的人骨髓间充质干细胞在向软骨细胞分化的能力上,无显著差异。原代培养的间充质干细胞不能在软琼脂中形成克隆,而永生化的间充质干细胞形成两种克隆,其克隆形成率0.3%。永生化的间充质干细胞接种裸鼠后3天、1个月、3个月后未见明显肿物形成。结论永生化的间充质干细胞可在体外分化为软骨细胞,且无致瘤性。     

永生化骨髓间充质干细胞克隆形成能力和致瘤性的实验研究

目的探讨永生化人骨髓间充质干细胞（hBMSC）用于软骨组织工程的可能性及安全性。方法自健康志愿者骨髓中提取原代hBMSC,流式细胞仪检测表型后建立永生化hBMSC,将hBMSC及永生化hBMSC细胞悬液接种于双层软琼脂培养基中,2周后观察克隆形态并计算克隆形成率;将两种细胞接种于裸鼠背部皮下,术后3d及1、3个月肉眼观察成瘤情况。结果hMSC表面抗原CD34、CD45表达阴性,CD扮、CD71、CD106表达阳性;hBMSC未能在软琼脂中形成克隆,永生化hBMSC克隆形成率为0．3％;永生化hBMSC接种裸鼠后3d接种部位有细胞聚集的团块,1、3个月时均未见肿瘤形成。结论本研究通过转基因技术建立的永生化hBMSC增殖能力较强,但无致瘤性,可作为种子细胞用于软骨组织工程中。