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目的探讨下调胸苷酸合成酶(Ts)基因以及化疗药洛拉曲克对人结直肠癌LOVO细胞胸苷酸合成酶表达水平以及对细胞生长、凋亡的影响。方法构建针对人Ts基因的小分子干扰RNA(siRNA)和阴性对照,转染至LOVO细胞,利用RT—PCR和Westernblot技术观察沉默TS基因后其基因和蛋白表达水平的变化,MTF法检测细胞增殖情况;另联合洛拉曲克作用于LOVO细胞,观察两者对LOVO细胞的TS蛋白表达和细胞生长的影响。结果转染TSsiRNA后,LOVO细胞TSmRNA及蛋白的表达水平明显低于阴性对照组,细胞增殖速度亦低于对照组(均P〈0.05)。TSsiRNA联合洛拉曲克组细胞IC50值为(1.46±0.25)μm01/L,而阴性对照组和单用洛拉曲克组的IC50值分别为(6.81±0.31)μmol/L和(6.47±0.43)μmol/L。TSsiRNA联合洛拉曲克作用于细胞36h后。细胞凋亡指数为(62.12±0.89)%,高于单用TSsiRNA和洛拉曲克[(21.56±0.67)%和(40.51±0.83)%.均P〈0.05]。结论TSsiRNA可以下调人LOVO细胞中TS基因和蛋白的表达,使细胞生长速度减慢,凋亡增加,并可以增强洛拉曲克的药物敏感性。 相似文献
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目的:研究洛拉曲克体外对人大肠癌LoVo细胞胸苷酸合酶(TS)水平动态变化以及对细胞增殖的影响。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度的洛拉曲克对LoVo细胞抑制率的影响,RT-PCR和Wes tern blot法检测TS基因和蛋白的表达变化,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化。结果:洛拉曲克对LoVo细胞有明显的抑制作用,其IC50值约为6.31μmol/L;并可促进细胞凋亡,凋亡率随作用时间的延长而增加。RT-PCR结果显示,在mRNA水平,相同剂量洛拉曲克处理细胞后,随着时间的延长,TS/GAPDH比值与对照组相比,有持续升高的趋势,但是只有48 h和60 h相对于未处理组差异有统计学意义。相同剂量的洛拉曲克处理细胞后,随着时间的延长,其TS蛋白的表达水平亦有持续升高的趋势。结论:洛拉曲克可以明显促进大肠癌细胞的凋亡并可产生TS诱导现象,术后以此可以更好地指导临床用药。 相似文献
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RNA干扰(RNAi)是近几年发展起来的一种阻抑内源基因表达的新方法,是由双链RNA诱发的发生在转录后水平的基因沉默。RNAi技术在逆基因分析及基因治疗中已有广泛的应用。大肠癌的发生是一种多基因、多因素相互作用的结果,目前对于大肠癌基因治疗的实验研究已经有了很大的突破。RNAi与传统的基因治疗手段相比,具有沉默效果好、作用稳定等优点。 相似文献
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