WNK4激酶通过溶酶体途径抑制BK通道表达

目的 研究WNK4激酶对BK通道的调节作用及机制.方法 将BK和WNK4野生型(WNK4-WT)或CD4(对照)质粒DNA共同转染进Cos-7细胞中,采用免疫染色-共聚焦激光显微镜、化学发光法、Western印迹法检测BK在细胞上的分布、细胞膜表面蛋白和总蛋白的表达;并使用质子泵抑制剂bafilomycin A1( Baf A1)阻断溶酶体降解检测BK蛋白表达水平的减少是否由于其蛋白降解增多所致.结果 免疫染色-共聚焦激光显微镜发现,与对照组相比,WNK4-WT组BK在细胞膜表面的分布明显减少.化学发光法检测结果显示,对照组BK的细胞膜表面蛋白表达水平为299.9±18.6,WNK4-WT组中其细胞膜表面蛋白表达水平为148.4±13.7,比对照组显著下降(P＜0.01).Western印迹结果提示,WNK4-WT组BK的总蛋白表达水平比对照组明显减少.和对照组(100％)相比,WNK4-WT显著减少BK的总蛋白水平(42.3％±15.2％,P＜0.01),而Baf A1则逆转WNK4-WT对BK蛋白的抑制作用(82.2％±12.1％,P＜0.05).结论 WNK4激酶能同时抑制BK在Cos-7细胞膜表面蛋白和总蛋白的表达水平;WNK4激酶抑制BK通道蛋白的表达是通过增加其在溶酶体内的降解所致的.     

雷帕霉素通过调节mTOR-ULK1信号通路减轻高糖诱导的足细胞损伤

目的探讨雷帕霉素对高糖环境下足细胞自噬和损伤作用的机制。 方法体外培养永生化小鼠肾小球足细胞(mouse podocyte cell 5,MPC5)并进行分组：甘露醇等渗组(mannitol isotonic group,MG组)、高糖组( high glucose group,HG组)、雷帕霉素组(rapamycin group,RG组)以及自噬相关蛋白5-siRNA组(SiG组)。PCR和Western印迹检测足细胞标志Synaptopodin、自噬相关的ULK1以及mTOR通路相关蛋白p70S6K的表达。 结果与MG组相比,HG组的Synaptopodin表达降低,自噬活性降低,p-ULK1以及p70S6K表达明显升高。与HG组相比,RG组的Synaptopodin表达升高,自噬活性较高,p-ULK1以及p70S6K表达较低。SiG组表现出与HG组相似的变化趋势。 结论雷帕霉素可能通过mTOR-ULK1信号通路调节足细胞内自噬反应、减轻高糖环境引起的足细胞损伤。