elavl1a对斑马鱼生长发育的调控作用

目的：构建elavl1a^-/-突变体斑马鱼,探索elavl1a基因对斑马鱼生存及生长发育的影响。方法：运用CRISPR-Cas9技术构建elavl1a F0代嵌合体斑马鱼,通过与野生型斑马鱼杂交得到F1代斑马鱼,经过基因型鉴定让同一型F1代斑马鱼自交得到elavl1a^-/-纯合突变体斑马鱼,通过基因测序及Western blot鉴定,并做相应的数量统计及形态学分析。结果：通过基因测序发现得到的elavl1a^-/-突变体斑马鱼在第2个外显子上缺少5个核苷酸,产生移码突变,提前出现终止密码子,仅能够编码部分氨基酸,Western blot未能检测出elavla蛋白表达,且得到的elavl1a^-/-突变体斑马鱼的生存率降低,不符合孟德尔遗传,生长发育迟缓。结论：成功构建得到elavl1a^-/-突变体斑马鱼,elavl1a基因对斑马鱼生存及发育具有重要作用。     

miRNA let-7a靶向抑制ACVR1B表达

目的：探讨miRNA let-7a对ACVR1B表达的影响。方法：生物信息学分析表明activin receptor type 1B（ACVR1B）是一个let-7a的潜在靶基因。构建ACVR1B 3’UTR野生型（ACVR1B 3’UTR-WT）和ACVR1B 3’UTR突变型（ACVR1B 3’UTR-MUT）双荧光素酶报告载体,分别与let-7a模拟物（let-7a mimic）或let-7a阴性对照（let-7a NC）共同转染HEK293T细胞,通过双荧光素酶报告系统检测各组细胞的荧光素酶活性。分别转染let-7a mimic、let-7a inhibitor和let-7a NC至HEK293T细胞,采用qRT-PCR和Western blot分别检测ACVR1B的mRNA和蛋白表达水平。结果：ACVR1B 3’UTR含有let-7a潜在的高度保守的结合靶点（77～83位点）。在HEK293T细胞中共转染ACVR1B 3’UTR-WT报告载体的let-7a mimic组比let-7a NC组荧光素酶活性组明显降低（P＜0.05）;而共转染ACVR1B 3’UTR-MUT报告载体的let-7a mimic与let-7a NC组其荧光素酶活性差异无统计学意义（P＞0.05）。在HEK293T细胞中let-7a mimic转染组中ACVR1B的mRNA和蛋白水平均低于let-7a NC组和let-7a inhibitor组（P＜0.05）。结论：ACVR1B是let-7a潜在调控的靶基因,miRNA let-7a可以直接抑制HEK293T细胞中ACVR1B基因的表达。     

Masquelet技术结合游离植皮治疗老年慢性难愈创面的临床应用

目的介绍应用Masquelet技术结合游离植皮治疗老年慢性难愈创面的手术方法和临床效果。方法 2020年9月-2022年9月,温州医科大学附属第二医院创面修复外科对20例下肢伴有骨骼或肌腱外露的慢性难愈创面的老年患者应用Masquelet技术,在治疗患者基础疾病的同时,经过多次清创后携抗生素骨水泥封闭创面,在创面诱导膜充分形成后,应用游离植皮覆盖四肢难愈创面。创面缺损面积4.5 cm×3.0 cm～15.0 cm×6.0 cm,所有软组织缺损创面均伴有肌腱或者骨外露。术后定期来院门诊复诊, 并通过电话、视频等方式随访,观察患者创面愈合情况以及取皮区有无相关并发症。采用下肢功能量表(LEFS)评分评价下肢功能恢复情况。结果本组20例术后均定期随访, 时间3～12个月, 平均7.6个月。第一阶段手术进行创面膜诱导1～4次, 平均(1.3±0.7)次,第二阶段在创面诱导膜上进行游离植皮, 20例植皮全部成活, 无坏死和感染发生;植皮区皮肤外观及质地满意, 术后LEFS评分为(69.83±10.82)分。结论 Masquelet技术结合游离植皮治疗老年难愈性创面, 可取得满意的临床效果,可降低...