人胎儿雪旺氏细胞的体外培养及其纯化研究

本实验用酶消化法从孕１４～１９周人胎儿周围神经中分离培养雪旺氏细胞，结合差速贴壁和阿糖胞苷处理进行纯化，根据Ｓ－１００蛋白免疫细胞化学染色和形态学特征，分析不同时期雪旺氏细胞的纯化程度。实验结果显示：培养４ｄ，倒置相差显微镜下观察，雪旺氏细胞呈典型的双极或三极形，端对端或旋涡状排列，Ｓ－１００蛋白免疫细胞化学染色呈阳性反应，其比例约占９８％；在２～３周内，雪旺氏细胞的纯度维持在８５％～９０％；培养３５ｄ，雪旺氏细胞约占８０％；单纯采用阿糖胞苷或差速贴壁处理，培养３５ｄ，雪旺氏细胞约占７０％；原代培养９２ｄ，传代１１代细胞生长良好。实验结果表明，多种方法联合使用较单一方法所得的纯度高。本方法快速、简便，能为雪旺氏细胞作为移植材料提供足够的来源。     

雪旺氏细胞的功能研究进展

雪旺氏细胞是周围神经系统的胶质细胞，具有多种生理功能，当周围神经受损时，反应性地分裂增殖，形成Ｂｕｎｇｎｅｒ带，为轴突再生提供通道；同时雪旺氏细胞分泌数种神经营养因子，防止受损神经经元死亡，促进轴突再生；雪旺氏细胞还分泌细胞外基质成分和细胞粘附分子等，为轴突体供良好的再生环境，支持和引导再生的轴突重新支配靶组织。将体外培养的雪旺氏细胞进行移植，不仅能促进周围神经和中枢神经再生，而且能修复脱髓鞘损伤。     

新生鼠缺氧缺血时脑TPA活性与微血管基膜的相关性研究

为了探讨缺氧缺血时脑内组织型纤溶酶原激活物 (TPA)与脑微血管基膜降解的相关性 ,本研究采用了下述二种方法 :第一组是将一日龄 SD大鼠分为五组 :(1)空白对照组 ,(2 )假手术组 ,(3 )缺氧缺血组 ,(4 )缺氧缺血后复氧 2 4h组 ,(5 )缺氧缺血后复氧 48h组 ,每组 12只。每组取 4例测 TPA活性和 8例鼠脑用抗 型胶原、层粘连蛋白和纤维粘连蛋白抗体标记。第二组是脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞体外培养 :分为 (1)空白对照组 ,在常规条件下培养的细胞 ;(2 )缺氧组 ,在培养液表面覆盖无菌医用液体石蜡 ,形成缺氧环境 ,每组取 8例培养液测 TPA活性。结果证明 ,在三个实验组中以缺氧缺血组的 TPA活性最高 ,而后随着复氧时间的增加而下降。培养的内皮细胞缺氧组 TPA活性比对照组高 ,而星形胶质细胞缺氧组 TPA活性与对照组无差别。三个实验组的 型胶原、层粘连蛋白和纤维粘连蛋白阳性染色平均单位面积较两对照组者小。三个实验组阳性产物呈不连续线状的微血管数较两对照组多。以上结果显示 ,缺氧缺血可激发新生大鼠脑内 TPA活性增高 ,主要是脑微血管内皮分泌的 TPA活性增高 ,然后通过一系列酶促反应 ,使微血管基膜的细胞外基质成分— 型胶原、层粘连蛋白和纤维粘连蛋白等降解 ,血脑屏障受损 ,微血管的渗透性增?     

钾离子对体外培养中枢神经髓鞘形成的影响──一种新的体外培养中枢神经脱髓鞘模型的建立

本文应用组织培养和电镜等方法研究了ＫＣＩ对体外培养中枢神经系统髓鞘形成的影响。结果表明：体外培养Ｂ６Ｃ３小鼠小脑组织髓鞘形成的关键期是１０～１４ｄ，在１０～１２ｄ时体外培养的小脑组织对ＫＣＩ最为敏感；当培养液内ＫＣＩ浓度达到３０ｍｍｏｌ／Ｌ时，即可完全抑制髓鞘形成。本文对钾离子引起体外培养中枢神经组织脱髓鞘的机制进行了讨论。     

豚鼠脊髓运动神经元分支至股神经和腰背肌的研究——逆行荧光双标记法

应用碘化丙院-双苯甲亚胺配伍逆行荧光双标记技术对豚鼠脊髓运动神经元分支至股神经和腰背肌作了研究.结果发现股神经的运动纤维来源于同侧L1～5脊髓前角内侧核运动神经元和L4～5脊髓前角外侧核运动神经元;腰背肌的运动纤维来源于同侧相应节段脊髓前角内侧核运动神经元.在L3～5脊髓前角内侧核运动神经元中,有碘化丙啶-双苯甲亚胺荧光双标记运动神经元,占内侧核全部标记运动神经元的18.8‰.结果提示脊髓前角运动神经元具有分支分布至腰背肌和股神经的现象.     

大鼠背根神经节内kv2.1 mRNA和kv4.2 mRNA的表达

目的　了解kv2 1和kv4 2型钾离子通道在背根神经节的表达。方法　应用原位杂交方法观察背根神经节内细胞膜钾离子kv2 1和kv4 2型通道的mRNA阳性神经结构的表达。结果　腰 3～ 5背根神经节内均有kv2 1和kv4 2mRNA阳性神经元的表达 ,kv4 2mRNA阳性神经元的数量和总面积明显多于kv2 1阳性神经元。结论　kv2 1和kv4 2型钾离子通道可能参与了背根神经节对外周传入信息的传递和调制。     

胸水中CYFRA21－1测定的临床意义

利用ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ公司的ＣＹＦＲＡ２１－１酶免疫分析试剂盒，测定了已有明确诊断的１３０例胸腔渗漏液标本。结果表明，ＣＹＦＲＡ２１－１对于癌性胸水的诊断敏感性为６１．３％，特异性为８７．３％，准确度为７２．３％。若同时利用ＡＤＡ活性测定排除结核性胸膜炎，则其特异性可达９２．８％。揭示ＣＹＦＲＡ２１－１测定对胸水良恶性的诊断与鉴别诊断具有重要的临床价值。     

神经妥乐平促进雪旺细胞体外增殖作用的研究

目的　研究神经妥乐平促进周围神经修复的机制和体外作用的最适浓度。方法　将成年兔坐骨神经用植块法分离纯化雪旺细胞 ,将纯化后的细胞培养 2 4h后分成 4组 :神经妥乐平药物组 (按用药浓度分 3组 )和正常组。相差显微镜观察下每日计数测定雪旺细胞的增殖曲线 ,2 4h和 72h后用流式细胞仪测定S期的比例。结果　 0 .1NU/ml浓度的神经妥乐平对雪旺细胞的增殖作用不明显。 0 .5NU/ml和 1NU/ml浓度的神经妥乐平组 ,在 2 4h和 72h后处于S期的雪旺细胞明显增多。 10d后药物组细胞计数明显高于对照组 ,其中 0 .5NU/ml组、1UN/ml组和对照组的倍增时间分别为 6.1d ,5 .5d和8.1d ,两者相比 ,差异有非常显著性意义 (t =16.91、17.15 ,P <0 .0 1)。结论　神经妥乐平能显著地促进雪旺细胞的增殖从而促进周围神经损伤的修复     

成纤维细胞转录BDNF基因后的条件培养液在体外培养中对神经突起生长 …

将带有ＢＤＮＦ基因的成纤维细胞（ＮＩＨ／３Ｔ３）冻存－７０℃，６个月后将虎工程细胞复苏，放在３７℃、５％ＣＯ２培养箱中培养扩增，观察形态学并同时收集其培养液，对新生ＳＤ大鼠的脊神经节、脊髓和大脑皮层中的神经元进行条件２并设对照组。脊神经节植块培养２天后显示ＢＤＮＦ转基因成纤维细胞的条件培养液对促进神经元突起的生长具有良好的活性在脑皮层中神经元分别进行分散原代培养，１５天后，其突起长度作图像分析并分     

人参皂甙对小脑生长锥影响的体外培养观察

自吉林人参根部制备的总皂甙(Rx),按每毫升培养液含50,100,200μg的浓度,对新生(P-O)B_6C_3小鼠的小脑进行Maximow器官——组织型培养,总数达120片。在体外培养第2,3,5天分别在相差显微镜下进行活体观察,对生长锥的长度和密度作进一步的观察和测量,同时结合神经染色和扫描电镜的观察与记录,结果显示实验组在生长锥的生长趋势较对照组明显,尤以100μg/ml组最为显著,具有统计学意义。本研究结果提示人参皂甙对神经组织的生长和神经网络的建立具有促进作用。