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1.
目的 构建并在CHO细胞中表达抗人CD86单链抗体(CD86-scFv),研究该抗体与抗原的结合特性及介导的生物学功能.方法 从分泌鼠源CD86抗体的杂交瘤细胞中克隆出VH和VL基因,构建含有前导肽L-VH-Linker-VL抗体编码基因的表达载体并转染CHO细胞.经筛选高分泌株并扩大培养后收集上清进行纯化.流式细胞术分析CD86-scFv对不同细胞膜型CD86分子的识别及与鼠源亲本抗体1D1的竞争抑制效应.MTT法分析CD86-scFv与Raji细胞表达的CD86结合后对细胞生长的影响.结果 获得了稳定表达抗人CD86-scFv的CHO细胞株及相应抗体.CD86-scFv与CD86基因转染细胞株L929-CD86、天然表达CD86分子的人B系淋巴瘤细胞Raji和Daudi细胞的阳性结合率分别为67.0%、72.3%和80.5%.CD86-scFv对鼠源亲本抗体1D1具有竞争结合能力,将CD86-scFv(终浓度20μg/mL)加入Raji细胞共同培养72 h时的细胞生长抑制率为28.3%.结论 成功构建了稳定分泌抗人CD86-scFv的CHO细胞株(命名为SA-IV).该抗体能够识别CD86分子并具有良好的生物学活性. 相似文献
2.
目的需要行高位硬膜外阻滞的30例患者,通过面罩给氧,PaO2可维持正常,但明显的呼吸抑制可致二氧化碳蓄积,通过对PETCO2监测,了解高位硬膜外阻滞中PETCO2监测的必要性及准确性及与PaCO2变化的相关性。结果30例患者PaCO2都出现了增高且差异有统计学意义(P〈0.05)。最高一例达8.7kPa(65mmHg);PETCO2和PaCO2二者间存在良好的正相关(r=0.821,P〈0.01),PETCO2能真实反映PaCO2值。结论PETCO2,监测对于高位硬膜外阻滞患者值得应用。 相似文献
3.
目的:制备真核细胞CHO表达的CD80单链抗体(CD80-scFv)并研究其对不同肿瘤细胞膜型分子的识别及增殖的影响。方法:将表达CD80-scFv的CHO细胞大规模无血清培养收集上清,采用IMAC亲和层析法纯化获取抗人抗体。采用免疫荧光及流式细胞术分析其对人恶性B系淋巴瘤细胞株Daudi、人黑色素瘤细胞株A375、神经胶质瘤细胞株U251及人多发性骨髓瘤细胞株8266及U266细胞膜型CD80分子的识别。在上述肿瘤细胞的培养体系中加入不同浓度的CD80-scFv,MTT法分析其对肿瘤细胞增殖的影响。以天然高表达CD80分子的8266细胞经丝裂霉素处理后作为APC,人PBMC作为效应细胞,分析抗体通过阻断共刺激信号对PBMC增殖的影响。结果:从CHO细胞培养上清中获取的抗人CD80-scFv纯化品的量为6.67 mg/L;该抗体与Daudi、U251、A375、8266及U266的阳性结合率分别为96.8%、39.6%、20.5%、99.9%及3.8%。抗体对高表达CD80分子的Daudi及8266细胞具有增殖抑制作用,加入抗体(终浓度为25μg/mL)培养72 h时的抑制率分别为24.04%及24.16%。同时,抗体通过阻断CD80-CD28介导的共刺激信号,抑制PBMC的增殖。结论:CD80-scFv能够特异识别细胞膜型CD80分子,并对高表达细胞的体外增殖具有抑制作用。 相似文献
4.
目的:评价冻干进箱板层温度.20℃与5℃对冻干甲肝减毒活疫苗的CCID50、外观的影响。方法:选择同一批号,采用两种不同进箱温度,其余冻于工艺均相同的的冻于甲肝疫苗,分别比较CCID50、外观、废品率。结果:两种进箱温度的冻干甲肝疫苗的感染性滴度CCID50没有明显差异,5℃进箱外观要好于.20℃进箱,5℃进箱废品率更低。结论:5℃进箱冻干甲肝疫苗外观更饱满,废品率更低,利于大规模生产。 相似文献
5.
目的:通过曲马多和布托啡诺在剖宫产术后静脉镇痛中的合理配伍及运用,探讨它们在术后产生最佳镇痛效果。方法:150例腰硬联合下择期剖宫产手术,随机分成三组,每组50例,Q组(曲马多800 mg),B组(布托啡诺8 mg),L组(混合组曲马多400 mg+布托啡诺4 mg)进行术后静脉镇痛。用VAS评分评价镇痛效果,用Ramsay评分评价镇静效果,同时观察并发症。结果:三组镇痛结果无明显差异(P>0.05),但B组的镇静效果优于Q组和L组,有显著性差异(P<0.05)。Q组的恶心呕吐等不良反应发生率明显高于B组、L组,有显著性差异(P<0.05)。结论:曲马多和布托啡诺联合应用在剖宫产手术后静脉镇痛中,效果最佳,不良发生率低,可以在临床上推广应用。 相似文献
6.
目的:制备鼠抗人CD86分子的单克隆抗体(m Ab),分析其对天然表达CD86分子的恶性肿瘤细胞株的生长与迁移的影响。方法:采用小鼠腹水诱生法制备CD86 m Ab,Protein A亲和层析法纯化抗体。采用流式细胞术(FCM)检测抗体对细胞膜型CD86分子的识别。以Raji、Daudi和8266细胞为观察对象,加入CD86 m Ab共同孵育,用FCM检测抗体对细胞凋亡的诱导作用,MTT检测抗体对细胞增殖的影响,Transwell~(TM)研究抗体对细胞迁移的影响。结果:本实验获得的CD86 m Ab能很好地识别细胞膜型分子,其与Raji、Daudi和8266细胞的结合率分别为96. 5%、99. 0%和83. 9%。FCM结果显示,共同孵育24 h,当抗体浓度为20μg/ml时,上述细胞的凋亡率分别为16%、18%及14%,均明显高于同型对照组(P0. 05)。MTT结果显示,共同孵育48 h,20μg/ml抗体对细胞的增殖己可产生抑制作用,40μg/ml抗体对上述细胞增殖的抑制效果更明显(P0. 05),抑制率依次为23%、25%及26%。TranswellTM结果显示,共同孵育48 h,20μg/ml抗体组的Raji、Daudi和8266细胞的迁移率分别为26%、23%和24%,均明显低于同型对照组(P0. 05)。结论:本实验制备的抗体能很好地识别细胞膜型分子,其对表达CD86分子的肿瘤细胞的增殖及迁移具有抑制作用,同时可诱导肿瘤细胞发生凋亡,提示该抗体对表达相应抗原分子的肿瘤具有一定的抗瘤效应。 相似文献
7.
目的:构建介导小鼠B7-1 基因RNAi 的慢病毒载体,研究其对L929 细胞表面B7-1 分子表达的沉默效应。方法:从小鼠B7-1 基因编码区选择3 段RNA 干扰靶序列,制备转录双发夹RNA 的前体DNA,并克隆至慢病毒穿梭质粒,构建B7-1 的RNAi 慢病毒穿梭载体,测序鉴定。将重组质粒及辅助质粒共转染293T 细胞产生慢病毒,经超速离心获得浓缩慢病毒颗粒。通过测定293T 细胞GFP 表达水平确定病毒滴度,流式细胞术检测感染效率以及对细胞表面B7-1 的干扰效率。病毒感染细胞经嘌呤霉素筛选及克隆培养获得小鼠B7-1 基因RNAi 慢病毒稳定感染的L929 细胞,流式细胞术分析细胞中GFP 及B7-1 分子表达的状况;将感染细胞与分离的小鼠脾脏T 细胞混合培养,分析B7-1 稳定沉默细胞刺激T 细胞增殖的能力。结果:成功了构建小鼠B7-1 基因RNA 干扰的重组慢病毒载体;获得了滴度达(3 ~ 5) 108 TU/ ml 的浓缩重组慢病毒,重组慢病毒可有效感染L929 细胞介导GFP 表达以及沉默其表面的B7-1。经筛选获得慢病毒稳定感染的L929 细胞,该细胞表面B7-1分子表达受到抑制,刺激T 细胞增殖的能力显著下降(P<0.05)。结论:构建了能够高效感染及沉默小鼠B7-1 分子的RNAi 慢病毒载体,该载体可稳定沉默L929 细胞表面B7-1 分子表达,抑制B7-1/ CD28 信号诱导的T 细胞增殖效应。 相似文献
8.
9.
目的:采用姥鲛烷诱导建立C57BL/6小鼠狼疮肾炎模型,并进行生物学鉴定和形成机制的探讨。方法:模型组小鼠单次腹腔注射0. 5 mL姥鲛烷,对照组同方式注射等量生理盐水。注射后监控生存状态;第10天采用流式细胞术分析脾脏巨噬细胞、粒细胞、树突状细胞及B细胞的活化情况;间接免疫荧光法每月检测血清抗核抗体(ANA)及抗双链DNA(dsDNA)抗体的滴度,Albustix试纸法分析尿蛋白含量;注射后8个月处死小鼠并取肾脏,经直接免疫荧光法观测免疫复合物沉积状况,免疫组化法分析干扰素γ(IFN-γ)与白细胞介素4(IL-4)的表达,并进行HE染色及透射电镜病理检查。结果:第10天时脾脏巨噬细胞、粒细胞、树突状细胞及B细胞呈不同程度活化(P<0. 05),B细胞表面标志物B7-1、B7-2及MHC-Ⅱ表达上调(P<0. 05);3~8个月时血清ANA和抗dsDNA抗体水平进行性升高(P<0. 05),3只小鼠出现腹水,1只消瘦并最终于7个月时死亡;4个月时3只小鼠出现蛋白尿,8个月时蛋白尿阳性率100%,尿蛋白含量1~20 g/L;8个月时腹腔内出现大量的异位淋巴组织,肾小球及... 相似文献
10.
目的 测定丙泊酚靶控输注(TCI)在阴道取卵术时半数有效效应室浓度(EC50)以及脑电双频指数(BIS)变化.方法 阴道取卵术患者22例,采用序贯法测定丙泊酚EG50:设定初始靶浓度3 μg/ml,增减梯度为0.3 μg/ml,记录相应的BIS值和其他生命体征.结果 丙泊酚TCI的EC50为2.95 μg/ml,95%的可信区间为2.63-3.31 μg/ml.取卵术中BP、HR、RR、SpO2均有轻度下降,但无须处理.术后无一例患者出现恶心、呕吐等不良反应.结论 阴道取卵术中,丙泊酚TCI的EC50为2.95 μg/ml、BIS值62.36±7.45比较合适. 相似文献