Hela细胞Survivin克隆及HLA-A2限制性CTL表位预测研究

目的：从Hela细胞中克隆凋亡抑制因子Survivin的编码序列,进行测序,并由此预测其HLA-A＊0201限制性CTL表位。方法：设计人Survivin基因序列特异引物,通过RT-PCR扩增Survivin编码序列,构建至pGEM-T载体后,测序分析,并对其进行了HLA-A＊0201限制性CTL表位抗原表位相关预测。结果：从Hela细胞中克隆得到的Survivin和Survivin-ΔEx3两种剪接体,其中Survivin-ΔEx3发生1个同义突变和三个错义突变,预测其抗原表位抗原性发生了变化。结论：寻找抗原性强、结合力高的表位,对于今后抗肿瘤多肽疫苗的研究具有重要的意义。     

老年脑梗死患者医院-家庭过渡期用药偏差现状及影响因素分析

目的探讨老年脑梗死患者医院-家庭过渡期用药偏差现状及影响因素, 并探讨用药偏差和药物不良事件的相关性。方法采用便利抽样法, 选取2021年11月—2022年5月成都医学院第一附属医院神经内科的218例老年脑梗死患者为研究对象。采用一般资料调查表和合理用药自我效能量表对其进行调查。出院后1个月, 采用用药差异评估工具和Morisky服药依从性量表对患者进行电话随访, 并收集药物不良事件的发生情况。采用Logistic回归分析探讨用药偏差的影响因素。采用Spearman相关分析探讨药物不良事件与用药偏差的相关性。本研究共发放问卷218份, 回收有效问卷207份, 有效回收率为95.0%。结果老年脑梗死患者用药偏差的发生率为48.8%(101/207)。Logistic回归分析结果显示, 高血压病、卒中严重程度、服药依从性、医嘱用药数量是用药偏差的影响因素(P<0.05)。Spearman相关分析显示, 药物不良事件与用药偏差呈正相关(r=0.234, P<0.01)。结论老年脑梗死患者医院-家庭过渡期用药偏差发生率较高, 高血压病、卒中严重程度、服药依从性、医嘱用药数量是用药偏...     

P53和P21在PC12细胞分化中的作用

目的探讨P53及其下游P21蛋白在PC12细胞分化中的可能作用机制。方法用反转录病毒质粒pBabe-P53/m175转染未分化PC12细胞,经筛选后建立野生型P53蛋白功能丧失的细胞系PC12(P53/m175);利用倒置相差显微镜、流式细胞术及Western blot等方法,比较两种细胞在神经生长因子(NGF)作用后,细胞分化表型、细胞周期及相关蛋白表达的改变。结果NGF作用于正常PC12细胞组,P53/P21蛋白表达持续升高,细胞G1期阻滞出现的时间与蛋白表达开始增加的时间相一致;而在NGF作用的PC12(P53/m175)细胞组,细胞不能表达P21蛋白,且细胞周期G1期阻滞的程度也出现显著下降。NGF作用下,两组细胞都能观察到神经突起的生长,表现出明显的分化表型。结论PC12细胞经NGF作用后出现P53及P21蛋白持续表达增加,主要介导了细胞分化过程中细胞周期G1期阻滞这一特征的出现,但并不是导致神经突起进行性生长这一特征的必需条件。     

Survivin启动子介导的胞嘧啶脱氨酶(CD)自杀基因的抗肿瘤研究

目的 探讨Survivin启动子介导的CD/5-FC自杀系统的抗肿瘤效果.方法 利用Survivin启动子替换pEGFP-N1载体上的巨细胞病毒(CMV)启动子,构建重组表达载体pSurP-EGFP,通过报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的表达确定Survivin启动子的特异性;将酿酒酵母的胞嘧啶脱氨酶(CD)基因克隆在pSurP-EGFP中,构建成重组载体pSurP-CD,转染肿瘤细胞后利用毛细管电泳仪检测前药5-氟胞嘧啶(5-FC)的转化效率,同时分析肿瘤细胞的凋亡.结果 GFP的表达表明Survivin启动子具有较好的肿瘤靶向性;毛细管电泳检测表明CD能够有效地将5-FC转化为5-FU,显微镜观察和流式分析表明了Survivin启动子介导的CD的抗肿瘤效果.结论 Survivin启动子能有效地介导CD自杀基因的表达,具有较好的靶向性抗肿瘤效果.     

神经生长因子撤退诱导神经元样PC12细胞凋亡及HRK/MCL-1基因表达变化

目的:探讨神经生长因子(NGF)撤退对已分化神经元样PC12细胞的影响.方法:建立NGF诱导PC12细胞交感神经元样分化模型,观察NGF撤退后,神经元样PC12细胞形态学及超微结构的变化情况,检测凋亡相关基因HRK/MCL-1的表达变化情况.结果:神经元样PC12细胞在NGF撤退后,可观察到显著的细胞凋亡样特征性改变,并随着NGF撒退时间的延长,凋亡率不断增加,同时随着NGF撤退时间的延长,促凋亡基因HRK的表达不断增高.而抑凋亡基因MCL-1在撤退24 h内表达水平下降明显,撤退24 h后变化不显著.结论:NGF撒退确实能诱导已分化的神经元样PC12细胞出现典型的神经元细胞凋亡现象,该现象与凋亡相关基因HRK/MCL-1的表达变化有密切关系.     

HLA-A2限制性Survivin点突变肽诱导特异性抗肝癌CTL反应

目的 探讨HLA-A2限制性Survivin点突变抗原肽体外诱导CTLs的抗肝癌作用.方法 生物信息学软件BIMAS和SYFPEITHI用来鉴定点突变的HLA-A2限制性Survivin抗原九肽;流式细胞术检测突变肽与HLA-A2分子结合效率;肽体外刺激肝癌患者腹水来源的肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)诱导反应性CTLs,用流式细胞术及ELISA检测反应性CTLs释放IFN-γ情况;肽诱导的CTLs与肝癌细胞系HepG2及BEL-7402共孵育,CytoTox 96(R)非放射性细胞毒性检测法检测对肿瘤细胞的裂解情况,倒置相差显微镜观察肝癌细胞形态学变化.结果 生物信息学分析筛选出与MHC分子结合效率评分显著提高的点突变Survivin抗原九肽Sur79M2 (KMSSGCAFL),流式细胞术检测证实负载Sur79M2的T2细胞,HLA-A2表达率显著提高,经Sur79M2体外刺激诱导的CTLs与靶细胞共孵育后能释放较高水平的IFN-γ,Sur79M2诱导的CTLs能通过HLA-A2限制性机制有效杀伤肝癌细胞系HepG2,对HLA-A2阴性的BEL-7402细胞无明显杀伤作用.结论 点突变肽Sur79M2能在体外诱导反应性CTLs产生,该CTLs能以HLA-A2限制性方式有效杀伤肝癌细胞系.     

1例甲状腺危象流浪病人的护理

甲状腺危象是甲状腺毒症急性加重的一个综合征,属甲状腺功能亢进恶化的严重表现[1].其发病原因可能与交感神经兴奋,垂体-肾上腺皮质轴应激反应减弱,短时间内大量三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)释放入血有关.     

人类TCRαβ家族V基因的进化研究

目的：了解人类TCRα家族V基因（TCRAV）和TCRβ家族V基因（TCRBV）的进化特征。方法：采用MEGA3．1软件对人类TCRAV和TCRBV基因分别构建进化树，并估算基因复制的发生时间；采用FEL法检测TCRAV和TCRBV编码序列正选择和负选择位点。结果：进化树显示TCRAV和TCRBV的基因分组在进化过程中已经维持了相当长的时间。TCRAV已经不受正选择作用，TCRBV基因序列的CDR8区域检测到两个正选择位点。结论：人类TCRαβ家族V基因的进化特征为研究TCR基因在机体免疫及疾病防治提供了理论分析基础。