卵巢功能减退患者卵泡液外泌体miRNA表达谱分析研究

目的利用高通量测序技术筛选卵巢储备功能减退(DOR)与卵巢功能正常卵泡液外泌体中差异表达的miRNAs,探讨其对DOR的发病影响。方法收集DOR患者和卵巢功能正常者(对照组)的卵泡液各15例,各组每5例卵泡液混合为均一样本提取外泌体,共进行3次生物学重复。使用Illumina HiSeq4000测序平台对DOR组和对照组卵泡液外泌体中的miRNAs进行测序分析,使用miRanda和TargetScanS软件、GO以及KEGG数据库对差异显著的miRNAs进行靶基因预测、生物学功能富集以及信号通路预测。结果与对照组相比,DOR卵泡液外泌体有80个显著差异表达的miRNAs,其中31个表达上调(包括hsa-miR-4792、hsa-let-7c-3p和hsa-miR-184等),49个表达下调(包括hsa-miR-136-3p、hsa-miR-296-3p和hsa-miR-337-5p等)(P<0.05);通过miRanda和TargetScanS的算法预测所有差异表达miRNA的靶基因共17159个,经GO和KEGG分析发现,这些靶基因主要富集的生物学功能有电离型谷氨酸受体信号通路、氨基酸转运调节、脂多糖介导信号通路及发育相关的凋亡过程等,主要参与调节的信号通路有趋化因子信号通路、环磷酸腺苷信号通路、肿瘤坏死因子信号通路及丝裂原活化蛋白激酶信号通路等。结论来源于DOR和卵巢功能正常者的卵泡液外泌体的miRNAs表达谱存在显著差异,差异表达的miRNAs可能在DOR的发生中起到重要的调控作用,这些miRNAs可能经过靶基因参与调节多种生物学功能以及信号通路进而影响DOR的病理生理过程。     

体外受精 - 胚胎移植（IVF-ET）胚胎培养液中 HLA-G 检测在预测胚胎发育潜能和临床结局中的应用价值研究

目的　探讨培养液中可溶性人类白细胞抗原 G(HLA-G) 表达水平在预测胚胎发育潜能、评估临床结局中的应用价值。方法　选取 2017 年 12 月 ~2019 年 8 月在柳州市人民医院生殖医学科接受体外受精 - 胚胎移植（IVF-ET）治疗的不孕不育夫妇共 156 对,收集其胚胎培养第三天（D3）或第五天（D5）的培养上清液,检测培养液中 HLA-G 浓度。根据移植临床结局分为临床妊娠组和未妊娠组,根据移植胚胎培养液 HLA-G 浓度按 D3 卵裂期胚胎≥ 2.5U/ml 或D5 囊胚≥ 6.8U/ml 分为高浓度组和低浓度组分别进行比较,同时对 D3 胚胎继续培养形成囊胚情况及不同级别囊胚培养液 HLA-G 含量进行比较分析。结果　临床妊娠组和未妊娠组间的平均年龄、不孕年限、抗苗勒管激素（AMH）、子宫内膜厚度、平均获卵数、受精率、优质胚胎率比较差异均无统计学意义（均 P ＞ 0.05）,HLA-G 浓度分别为 7.38±4.12U/ml 和 2.46±1.69 U/ml,两组比较差异有统计学意义（t=3.628,P ＜ 0.01）;形成优质囊胚、可用囊胚和不可用囊胚培养液中的 HLA-G 浓度分别为 12.36±5.27,8.15±3.69 和 5.62±3.10 U/ml,三组比较差异有统计学意义（t=2.856,P＜ 0.05）;HLA-G 高浓度组临床妊娠率和胚胎种植率分别为 69.41%（59/85）和 49.60%（62/125）,均高于 HLA-G 低浓度组 46.05%（35/76）和 26.78%（30/112）,差异有统计学意义 (χ 2 =9.011,12.946,均 P ＜ 0.01）,两组之间的生化妊娠率和流产率比较差异无统计学意义（χ 2 =0.527,0.368,均 P ＞ 0.05）。结论　检测胚胎培养液中 HLA-G 水平可作为胚胎发育潜能的预测指标,联合形态学评分进行胚胎移植可获得较好的临床结局。     

卵巢储备功能减退患者卵泡液外泌体对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的 探讨卵巢储备功能减退(DOR)患者卵泡液外泌体对小鼠卵母细胞体外成熟的影响,以期为女性因DOR导致的生育功能降低和不孕症的发生提供新的科学实验数据。方法 选取SPF级4～6周龄C57BL/6J未孕雌性小鼠,收集未成熟卵母细胞并进行体外成熟培养;同时收集DOR患者卵泡液,并提取外泌体。利用Dio荧光标记外泌体后与小鼠未成熟卵丘-卵母细胞复合物(COCs)共孵育培养,观察外泌体摄入情况;通过添加不同浓度0、50、100和150μg/ml外泌体处理小鼠未成熟COCs 16 h观察卵丘扩展和第一极体排出情况,分析其对卵母细胞成熟的影响并筛选出最佳处理浓度;设置分组为体内成熟组(control)、外泌体添加组(exo+)和未添加组(exo-),各组成熟后的COCs利用qPCR检测卵丘扩展相关基因Has2、Tnfaip6和Ptgs2以及凋亡相关基因Bax、Bcl2的mRNA相对表达水平,分析各组间的差异。结果 (1)Dio标记的外泌体与小鼠COCs共孵育,卵丘颗粒细胞上能观察到明显的Dio荧光信号,证实COCs能够摄入外泌体;(2)不同浓度外泌体处理组的GV期卵母细胞百分比均显著高于0μg/...