32P标记寡聚核苷酸探针检测胃癌组织中MUC5AC mRNA表达

揭示正常胃粘膜、癌前病变和胃癌组织中ＭＵＣ５ＡＣ基因转录水平的表达及其临床病理意义。方法：应用＾３２Ｐ标记寡聚核苷酸探针和原位杂交方法检测组织切片中的ＭＵＣ５ＡＣｍＲＮＡ的表达。结果人正常胃粘膜中的浅表１／３范围内广泛分布ＭＵＣ５ＡＣ基因的ｍＲＮＡ,肠上皮化生和胃癌组织中的表达阳性率分别是１５．４％和２５％。胃癌组织中ＭＵＣ５ＡＣｍＲＮＡ的表达与胃癌患者的性别、肿瘤的部分和大小、淋巴结转移、肿瘤的     

6例无肝硬化肝癌的HBV、HCV感染

６例无肝硬化肝癌的ＨＢＶ、ＨＣＶ感染汪荣泉周子成杨建民房殿春作者单位：第三军医大学西南医院消化科（重庆６３００３８）我国原发性肝癌（ＨＣＣ）的发生与ＨＢＶ、ＨＣＶ的感染密切相关，多数病例伴随着肝硬化，但仍有少数病例并不伴有肝硬化。现对６例ＨＣＣ患者中...     

转录因子Ascl2调控Acss1/3的表达影响结直肠癌患者预后

转录因子Ascl2作为WNT信号靶基因,可影响结直肠癌（CRC）前体细胞干性特征,探讨其能否调控短链脂肪酸β-氧化而影响CRC患者的预后。方法 下载稳定干扰Ascl2表达的CRC LS174T细胞（sh-Ascl2/LS174T）的mRNA及miRNA差异表达数据（GSE69036和GSE34926）分析其靶基因;应用RT-PCR方法和Western 印迹定量检测sh-Ascl2/LS174T及对照细胞中的Ascl2、Acss1和Acss3的mRNA表达水平,以及Ascl2和Acss1蛋白表达水平,从GSE44076表达数据和UALCAN数据比较在正常结直肠粘膜、CRC组织和不同临床病理分期的肿瘤组织的表达水平差异;TCGA数据库下载548例CRC患者基因 mRNA表达量及相关临床信息,用Spearman等级相关分析表达相关性,Kaplan-Meier法进行生存分析,Cox回归分析评估危险因素。结果 sh-Ascl2/LS174T细胞中Acss1的mRNA较对照细胞下调2.08倍,miR-4282表达水平下调2.069倍。RT-PCR定量检测sh-Ascl2/LS174T细胞中Acss1的mRNA和miR-4282水平明显下降(P＜0.01), Acss3的mRNA水平明显升高(P＜0.05);Acss1和Ascl2蛋白水平较对照细胞均明显下降。CRC组织Ascl2和Acss1的mRNA水平明显高于癌旁结直肠粘膜组织(P＜0.001),而Acss3明显低于癌旁结直肠粘膜组织 (P＜0.001);CRC组织中Ascl2与Acss1的mRNA表达水平呈正相关,与Acss3的表达水平呈负相关(均P＜0.001)。Ascl2和Acss3表达水平与疾病特异性生存期（DSS）、总体生存期（OS）、无进展生存期（PFS）无关,Acss1高表达组比低表达组的DSS (P=0.0389)和OS (P=0.04)明显降低。Ascl2与Acss1基因异常表达、Ascl2、Acss1和Acss3基因异常联合表达与CRC患者的DSS存在显著的联系(P=0.0377和P=0.0161),Ascl2、Acss1和Acss3三个基因的联合异常表达是影响CRC患者DSS的危险因素之一(P=0.043)。结论Ascl2对CRC细胞中的Acss1/3的表达可能具有调控作用而导致其短链脂肪酸β-氧化的重编程,它们的联合异常表达可以一定程度预测CRC患者的预后     

人正常胃肠道、生殖道粘膜中MUC5AC核粘蛋白及其mRNA定位的研究

目的：提示ＵＭＣ５ＡＣ基因在人胃肠道和生殖道粘膜组织中的表达异质性及其特点,为进一步研究其与疾病关系提供正常的形态学基础。方法：应用免疫组织化学和原位杂交方法。结果：ＭＵＣ５ＡＣ基因编码的核旧白及ｍＲＮＡ主要分布于正常胃粘膜表面１／３,包括粘膜的上皮层和胃腺的中上部,呈细颗粒状,位于阳性细胞的胞内,核周明显,胃窦、胃阍的表达无区别。十二指肠、空肠、结肠及宫颈组织内无表达,胆囊粘膜内灶状分布的阳性着     

OATP-C分子阳离子赖氨酸-49突变体削弱其底物摄取能力

目的研究人肝脏特异的有机阴离子转运蛋白基因OATP-C分子膜外区保守的49位阳离子赖氨酸,对其有机阴离子底物摄取能力的影响。方法从人肝脏mRNA中克隆OATP-C野生型基因全长cDNA序列,通过定点突变将高度保守的第49位赖氨酸残基突变为中性氨基酸-苏氨酸,构建其C端的GFP融合蛋白的真核表达载体,转染HEK293细胞,观察突变体的细胞膜定位能力及底物摄取功能的变化。结果OATP-C野生型及突变体基因均能定位表达于HEK293细胞质膜;[^3H]硫酸盐雌酮底物摄取实验显示,突变体5min底物摄取量较野生型下降74.18%,浓度依赖的[^3H]硫酸盐雌酮底物摄取动力学分析表明,突变体Km增高和vmax降低。结论OATP-C蛋白膜外区第49位赖氨酸是其关键的功能氨基酸,是其重要的功能结构单位。     

hPOT1 RNA干扰对人胃癌BGC823细胞TRF1、TRF2和Tankyrase1表达的影响

目的 观察人端粒保护蛋白(hPOT1)RNA干扰对胃癌BGC823细胞端粒重复序列结合因子1(TRF1)、端粒重复序列结合因子2(TRF2)、端锚聚合酶(Tankyrase1)转录水平的影响.方法 采用半定量RT-PCR方法检测TRF1、TRF2和Tankyrase1在mRNA表达水平的改变.结果 hPOT1RNA干扰抑制细胞中hPOT1表达后,TRF1表达明显上调,TRF2和Tankyrase1明显下调.结论 人胃癌BGC823细胞中hPOT1表达下调伴随TRF1表达明显上调、TRF2和Tankyrase1表达明显下调,提示hPOT1和TRF1、TRP2、Tankyrase1三个端粒相关蛋白之间具有较为密切的联系,并且相互制约、相互影响.     

大肠癌错配修复基因hMLH1突变与微卫星不稳二维DNA电泳及DNA测序技术的意义

背景：微卫星不稳是一种重要的基因改变方式，在肿瘤的发生中起重要作用，其发生是由于错配修复基因发生缺陷所致。错配修复基因hMLH1突变在遗传性非息肉性大肠癌中的作用已有报道，但在散发性大肠癌的作用尚缺乏深入的研究。目的：探讨错配修复基因hMLH1突变在大肠癌发生中的作用及与微卫星不稳的关系。设计：单一样本实验。单位：解放军第三军医大学西南医院消化科。材料：76例大肠癌及相应正常组织均为2001-01／2003-12西南医院外科手术切除标本，所有患者均无肿瘤家族史，并未接受过放疗和化疗，对实验知情同意。方法：采用二维DNA电泳和DNA测序技术检测hMLH1突变；采用聚合酶链反应为基础的方法检测微卫星不稳。主要观察指标：①大肠癌hMLH1突变及微卫星不稳检出率。②微卫星不稳与hMIH1突变的关系。结果：①76例大肠癌中检出hMLH1基因突变8例，突变率为10．5％，检出微卫星不稳20例，检出率为26.3％。右侧大肠癌hMLH1突变和微卫星不稳的检出率显著高于左侧大肠癌（6／26比2／50，x^2=4．739，P=0．029；11／26比9／50，x^2=5．212，P=0．022），hMLH1突变和微卫星不稳与肿瘤大小、分化程度、组织学类型、浸润深度、淋巴结转移和临床病理分期无显著相关。②将微卫星不稳分为高频率微卫星不稳（≥2个位点）10例、低频率微卫星不稳（仅为1个位点）10例和微卫星不稳阴性56例3组，8例hMLH1基因突变均发生于高频率微卫星不稳组，而低频率微卫星不稳和微卫星不稳阴性组未见有突变者。结论：hMLH1基因突变与微卫星不稳多发生于右侧大肠癌，hMLH1突变与高频率微卫星不稳大肠癌的发生有关。     

原发性肝癌患者肝组织内HCV RNA核心NS3,NS5区编码抗原的检测

目的 研究原发性肝癌（ＨＣＣ）患者肝组织中ＨＣＶ相抗原的表达，揭示在ＨＣＶ在ＨＣＣ发生中的可能作用。方法 应用免疫组化ＳＰ法定位４６例ＨＣＣ组织及３８例癌旁组织中ＨＣＶ核心，ＮＳ３，ＮＳ５抗原和ＨＢｓＡｇ。结果 癌组织中各抗原的检出率分别为２１．７％，２１．７％，１５．２％和１９．６％，癌旁组织中的检出率分别为３６．８％，３４．２％，３１．６％和７８．９％，阳性染色细胞呈弥漫，灶状和散在分布，各抗     

肝细胞癌患者HCV感染及其致癌机理研究

目的：揭示肝细胞癌患者的ＨＣＶ感染情况及其致癌机理。方法：应用免疫组织化学ＳＰ法对４６例肝细胞癌癌组织及其３８例癌旁肝组织中丙型肝炎病毒核心抗原作了定位研究，并进一步检测其中癌基因ｒａｓ、ｃｍｙｃ和抑癌基因ｐ５３的蛋白表达。结果：核心抗原的检出率分别为２１７％和３６８％，４６例肝癌患者中１６例存在丙型肝炎病毒感染；ｐ２１、ｃｍｙｃ和ｐ５３蛋白在癌组织中的检出率分别为５８７％、６７４％和３０４％；丙型肝炎病毒感染的阳性与阴性组患者之间的ｐ２１、ｃｍｙｃ和ｐ５３蛋白的表达无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；两组患者癌旁肝硬化的阳性率分别为８７５％和８６７％（Ｐ＞００５）。结论：上述结果提示丙型肝炎病毒致肝细胞癌的机理可能与ｒａｓ、ｃｍｙｃ和ｐ５３基因的激活或失活无关，其机理尚待进一步探索