人脂联素球状结构域的表达、纯化和功能鉴定

目的表达和纯化人脂联素（adiponectin,APN）球状结构域并观察其生物学活性.方法用PCR方法复制人脂联素球状结构域（globular domain of adiponectin,gAPN）的cDNA,并克隆于pET28a（＋）原核表达载体中.将重组表达质粒pET28a（＋）-gAPN转化大肠埃希菌BL21（DE3）,37℃培养至A600达到0.6时,加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导目的蛋白的表达.细菌经超声破菌,得到粗提的包涵体洗涤变性后经镍柱亲和层析柱一步纯化,获得纯化的gAPN重组蛋白,复性后冻干保存.然后,用链佐星（streptozocin,STZ）诱导的小鼠高血糖模型检测其生物活性.结果IPTG诱导后有Mr约为17 000大小的目的蛋白表达,免疫印迹结果进一步表明,其具有人gAPN的抗原性.表达蛋白主要以包涵体形式存在,占菌体蛋白的30%以上,表达产物经变性、纯化、复性,可获得纯度90%以上的目的蛋白.该重组蛋白能够降低STZ诱导的小鼠高血糖模型的血糖水平.结论在大肠埃希菌BL21（DE3）中成功表达了人gAPN蛋白,经变性、纯化、复性后得到具有生物学活性的蛋白.     

重组葡激酶（r—Sak）的分离,纯化和结晶

通过葡激酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达，表达产物ｒ－Ｓａｋ以可溶性活性状态存在于胞浆内。本文报道用离子交换和凝胶过滤纯化ｒ－Ｓａｋ的简易路线，从每升发酵液可得纯度９８％以上，比活性１０万ＨＵ／ｍｇ的ｒ－Ｓａｋ３００ｍｇ以上，比国外报导道６倍。     

跨学科思路下人体分子与细胞整合课程的全面建设

随着现代医学的飞速发展、专业知识的逐步分化及学科的不断交叉,大学传统的人才培养模式已经不能满足现代社会的需求。为全面提升医学教育水平,加快推动一流医学学科建设,复旦大学推动一批基础医学阶段的整合式教学课程,以培养拔尖医学人才的综合能力和整体医学观。人体分子与细胞是按照人类的认知规律,将以往生物化学与分子生物学和细胞生物学与遗传学的课程内容进行有机整合的一门全新课程。文章从课程设计、教学方法、教学团队、考核方式及教学效果几个方面介绍整合课程的全面建设情况,以期提高跨学科整合课程的教学质量,为探索一流医学学科建设提供参考与建议。     

重组链激酶在脑内血肿动物模型中的局部应用

观察重组链激酶对人凝血块的溶化作用及对脑组织的毒性反应。分别用重组链激酶（实验组）和生理盐水（对照组）注入人凝血块制成的猫额叶脑内血肿内，观察血肿溶化效果。结果：实验组１０例中６例血肿完全溶化，对照组１０例血肿均未溶化。病理组织学观察，实验组血肿周围脑组织病理改变轻于对照组。结论：重组链激酶对动物模型脑内血肿局部应用有良好的溶化人凝血块的作用，而对周围脑组织无毒性反应。     

人睫状神经营养因子基因的克隆、表达、纯化和生物活性鉴定

目的表达和纯化人睫状神经营养因子(CNTF)并观察其生物学活性。方法用PCR方法构建人CNTF的结构基因,并克隆于pLy4原核表达载体中。将重组表达质粒pLy4-CNTF转化大肠埃希菌JF1125,30℃培养至A600(nm)达到0.6时,迅速升温至42℃诱导目的蛋白的表达。细菌经超声破胞,包涵体经变性、复性、透析和阴离子交换层析,获得纯化的CNTF重组蛋白。然后,用鸡胚背根神经节神经元细胞存活实验观察其生物活性。结果42℃诱导后可以获得Mr≈22.9×103的目的蛋白,Western印迹结果进一步表明,其具有人CNTF的抗原性。表达蛋白主要以不溶形式存在,占菌体蛋白的35%以上,表达产物经变性、复性,纯化后可获得纯度90%以上的目的蛋白。该重组蛋白能够促进鸡胚背根神经节神经元细胞的存活。结论在大肠埃希菌JF1125中成功表达了人CNTF分子,经变性、复性,纯化后得到具有生物活性的蛋白。     

胃癌侧群细胞检测分选及其增殖能力的初步分析

 目的 检测和分选胃癌细胞系中的侧群细胞（side population,SP）,并对其体外增殖能力进行初步分析。方法 选择3株不同分化程度的人胃癌细胞系MKN-28、SGC-7901、BGC-823,以Hoechst 33342 / 碘化丙啶（propidium iodidc,PI）荧光染料双染,维拉帕米拮抗对照,应用流式细胞仪荧光激活分选法检测SP细胞比例;通过细胞生长曲线（CCK-8法）对SP细胞体外增殖能力进行初步分析。结果 3株胃癌细胞中均存在含量极少的SP细胞,比例在0.8%～2.7%之间;SP细胞比例随着胃癌细胞分化程度降低而下降（2.20% vs 1. 57% vs 0.93%, P=0.023）人胃癌细胞系MKN-28来源的SP细胞体外培养1周、2周后的增殖倍数分别为22.67和290,明显高于非SP细胞培养后的13.68和124。细胞生长曲线显示,SP细胞体外增殖能力明显强于non-SP细胞及未经分选的MKN-28细胞（P=0. 044）。结论 胃癌细胞系中存在比例相对稳定的SP细胞,SP细胞比例随着胃癌细胞分化程度增高而上升。胃癌SP细胞体外增殖能力明显高于非SP细胞。     

棕色脂肪基础研究进展

哺乳动物体内的脂肪组织按功能主要分为白色脂肪组织（WAT）和棕色脂肪组织（BAT）。WAT主要以甘油三酯的形式储存机体摄取的能量，当能量摄入超出脂肪细胞的存储能力时，机体就会产生肥胖。与WAT不同，BAT主要通过氧化脂肪酸消耗能量。BAT一方面通过非颤抖性产热维持动物体温，另一方面可以消耗机体过剩的能量，维持能量平衡。基于BAT在消耗能量方面的作用，     

葡激酶突变体基因的克隆与表达

为制备Ｍｒ的葡激酶以便作口服制剂，用ＰＣＲ技术克隆Ｎ－末端缺失１８个氨基酸的葡激酶突变体基因。经大肠杆菌表达，目的蛋白占总菌体蛋白的３２％。表达产物Ｍｒ约为１４０００，在菌体内形成包涵体。经复性后，该突变体对纤溶酶原具有激活作用。     

C/EBPα基因在大鼠肝星状细胞内的表达及意义

目的 初步探讨CCAAT增强子结合蛋白α(C／EBPα)在肝星状细胞(HSC)激活过程中的作用。方法 采用免疫细胞化学、western blot及RT-PCR检测原代培养不同时间段HSC内C／EBPd蛋白和mRNA的表达，以及α平滑肌肌动蛋白(α SMA)、结蛋白、基质金属蛋白酶-2(MMP2)mRNA、Ⅰ型前胶原(α1)mRNA的表达；Lipofect AMINE2000介导的瞬时转染方法将pcDNA3．1(-)-C／EBPα真核表达质粒转染入激活的HSC内，采用免疫细胞化学方法鉴定转染成功及转染后HSC内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达；在相差显做镜下观察HSC在原代培养过程中形态的改变。结果 原代正常HSC中可以检测到C／FBPα mRNA和蛋白的表达，蛋白位于细胞质和细胞核内，但主要位于细胞质内，且除新鲜分离(0d)组以外，随着HSC培养至2、4、7、10d，C／EBPα蛋白和mRNA的表达呈逐步下降的趋势，而α-SMA、MMP2和Ⅰ型前胶原(α1)的表达则逐步增强；转染后24h，目的基因转染组HSC内C／EBPα的表达明显强于空载体对照组，而PCNA的阳性细胞数较空载体对照组明显减少；转染后36h，目的基因转染组细胞几乎全部死亡，残存的细胞形态变细，体积缩小，而空载体对照组细胞仍存括。结论 C／EBPα基因可能参与HSC的激活调控机制，且C／EBPα过表达对HSC的增殖存在抑制作用。     

脂肪细胞因子adiponectin的研究进展

脂联素（adiponectin）是最近发现的一种由脂肪组织分泌的胶原样蛋白质，其编码基因位于人染色体3q27，称apM 1基因。研究显示：adiponeetin具有抗糖尿病、抗动脉粥样硬化、抗炎等作用，本文对adiponectin与胰岛索抵抗、2型 糖尿病和动脉粥样硬化关系研究综述如下。