融合蛋白表达质粒pUL54S-EGFP的构建及在AD293细胞中的表达

目的 探讨构建人巨细胞病毒(HCMV)截短UL54(UL54S)基因融合增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达质粒pUL54S-EGFP转染人胚肾293细胞,瞬时表达UL54S和EGFP的可行性.方法 采用PCR法扩增UL54s基因并将其克隆入真核表达载体pEGFP-N1中,采用脂质体法转染AD293细胞后通过荧光显微镜和流式细胞仪分析EGFP的表达情况.结果 重组质粒pUL54S-EGFP转染AD293细胞12h后即可见到荧光蛋白的表达,至48h表达达高峰;转染48h pUL54S-EGFP组平均转染率为47%.平均荧光强度为547.结论 重组质粒pUL54S-EGFP可在人胚肾293细胞内瞬时表达UL54S和EGFP融合蛋白,EGFP的表达可报告UL54基因的表达,质粒pUL54S-EGFP构建成功.     

主动脉腔内修复术中钬激光原位开窗技术的应用(附42例报告)

目的 探讨钬激光原位开窗技术在主动脉腔内修复术中保留弓上分支动脉的疗效.方法 2016年11月 ～2019年7月对42例紧邻主动脉弓部分支血管、腔内修复治疗近端锚定区不足的主动脉病变在DSA下对胸主动脉行腔内隔绝之后,通过肱动脉或颈动脉逆行导入550μm钬激光光纤,对覆膜支架进行原位开窗,开窗后植入支架,重建左锁骨下动...     

载体法筛选人巨细胞病毒截短UL54基因小干扰RNA靶位体系的建立

目的 建立载体法筛选人巨细胞病毒(HCMV)截短UL54基因(UL54S)小干扰RNA(siRNA)靶位的体系.方法 利用质粒pAVU6+27设计并构建2个小发夹RNA(shRNA)表达载体(psiUL54-1和psiUL54-2),与融合蛋白表达载体pUL54S-绿色荧光蛋白(EGFP)共转染AD293细胞.荧光显微镜观察融合蛋白荧光表达,RT-PCR法分析UL54S mRNA水平变化,流式细胞仪评价siRNA对融合蛋白的抑制作用,采用方差分析对流式细胞检测结果进行统计分析,筛选出有效的siRNA作用靶位.结果 shRNA表达载体psiUL54-2与融合蛋白表达载体pUL54S-EGFP共转染AD293细胞48 h后,pUL54S-EGFP、psiUL54-2共转染组EGFP表达量较pUL54S-EGFP、pAVU6+27共转染组下降;凝胶分析显示,psiUL54-2与pUL54S-EGFP共转染48 h后,UL54SmRNA相对表达量为19.6,明显低于pUL54S-EGFP、psiUL54-1共转染组的96.6与对照组的100.0;psiUL54-1、pUL54S-EGFP共转染48 h后对融合蛋白UL54S-EGFP表达无影响(P>0.05),但psiUL54-2、pUL54S-EGFP共转染抑制融合蛋白UL54S-EGFP的表达(19.43×104±2.29×104比27.89×104±5.50×104,P<0.01).结论 成功建立载体法筛选HCMV截短UL54S siRNA靶位体系,UL54S序列中1532～1550位点是有效的siRNA靶位点.     

右胸小切口二尖瓣置换术与传统手术比较

目的 比较右胸小切口与胸骨正中切口二尖瓣置换术的临床疗效.方法 回顾性分析2009年9月至2012年5月行右胸小切口二尖瓣置换术128例(微创组)与同期行胸骨正中切口二尖瓣置换术120例(传统组)的临床资料,并进行对比研究.结果 两组在年龄、性别、心功能分级、瓣膜病变、合并心脏疾病等方面的差异无统计学意义(P＞0.05);两组术后并发症(再次开胸止血、新发房颤、肺炎、脑血管意外、伤口愈合不良等)发生率差异亦无统计学意义(P＞0.05).围术期微创组死亡1例,传统组死亡2例.微创组的体外循环、主动脉阻断时间较传统组长(P＜0.05),而术后ICU住院、术后机械通气、术后住院时间较传统组短(P＜0.05),术后引流量及输血量也较传统组少(P＜0.05).术后微创组随访(15.0±4.8)个月,传统组(23.3±3.9)个月.两组均无院外死亡病例,无瓣周漏、脑血管意外、机械瓣故障、溶血等严重并发症发生,两组心功能分级差异无统计学意义(P＞0.05).结论 右胸小切口二尖瓣置换手术安全、有效,值得临床推广应用.