大鼠DCD供肝原位肝移植术后早期死亡的原因分析

目的建立稳定的大鼠心脏死亡器官捐献(donation after cardiac death,DCD)供肝原位肝移植模型,分析移植后24 h内大鼠死亡原因并探索相应的改进措施。方法所有供肝获取前经历供体心脏停跳10 min,采用改良Kamada的"二袖套"吻合法完成大鼠DCD供肝原位肝移植手术,记录各个手术阶段所用时间及术后大鼠的死亡情况。结果在40 d内完成大鼠DCD供肝原位肝移植手术100例,供体手术时间为(20±5)min,受体手术时间为(55±5)min,无肝期为(20±3)min。移植术后受体一般情况可。术中死亡9例,其中术中大出血4例、麻醉意外1例、无肝期过长1例、套管置入失败1例、空气栓塞2例;术后12 h内死亡22例,其中术后肠道坏死6例、术后吻合口渗血6例、术后肺水肿3例、术中失血量过多4例、术后血管栓塞2例、不明原因死亡1例;12~24 h死亡19例,其中术后肠道坏死9例、术后吻合口渗血3例、术后肺水肿2例、术中失血量过多1例、术后血管栓塞1例、不明原因死亡3例。结论导致大鼠DCD供肝原位肝移植术后早期死亡的原因很多,其中术后肠道坏死、术中及术后出血、术后肺水肿及术后血管栓塞是主要的致死因素。针对术后死亡原因采取相应的预防及改进措施能大大提高大鼠术后存活率,从而建立稳定的大鼠DCD供肝原位肝移植模型。     

大鼠肝移植中veno-lined支架技术的改良研究

目的对veno-lined支架技术进行改良,探究一种更加快速简便且并发症少的大鼠原位肝移植(OLT)方法。方法利用改良的veno-lined支架技术对30对Wistar大鼠进行OLT。将制作好的veno-lined支架预先从供肝胸段的肝上下腔静脉(SHVC)切口处插入,到达膈肌下的SHVC后打结固定;在受体手术的无肝期,将带有供肝的veno-lined支架从受体肝脏左外侧叶根部切口处插入,到达膈肌以下后进行SHVC的吻合固定。记录各阶段的手术时长、手术成功率、7 d存活率和探讨术后SHVC有关的并发症。结果 SHVC吻合时长:(3.9±0.7)min;无肝期时长:(7.0±0.8)min;受体手术时长:(44.2±2.8)min;手术成功率:100%;7 d存活率:90%。SHVC出血、扭折、以及支架脱落等并发症并未出现;在veno-lined支架制作时和SHVC吻合固定时,通过规范打结线的固定位置,能够避免SHVC血栓形成。结论改良后的veno-lined支架技术,能将无肝期时长控制在7 min以内,是一种快速简便且并发症少的大鼠OLT方法。     

大鼠DCD供肝热缺血时间对移植肝的影响

目的评价大鼠心脏死亡器官捐献(DCD)供肝热缺血时间对移植肝的影响。方法建立大鼠DCD供肝原位肝移植模型。根据供肝获取前经历心脏停搏时间的不同,将54只受体大鼠分为3组:对照组(W0组,未经历热缺血)、热缺血10 min组(W10组)、热缺血20 min组(W20组),每组18只。各组大鼠分别于术后1、3、7 d检测血清肝功能[丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)],电子显微镜观察肝细胞及其细胞器,用蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测肝组织细胞色素C(Cyt C)和凋亡诱导因子(AIF)的蛋白表达水平。结果随着热缺血时间的延长,肝移植术后1 d,各组大鼠ALT和AST水平急剧上升,与W0组相比,W10组和W20组的ALT和AST水平均明显升高(均为P0.05)。术后3 d,各组大鼠ALT和AST水平均稍稍下降,与W0组相比,W10组和W20组的ALT和AST水平仍明显较高(均为P0.05)。术后7 d,各组大鼠ALT和AST水平均再次上升,与W0组相比,W10组和W20组的ALT和AST水平升高更显著(均为P0.05)。电子显微镜观察发现,随着热缺血时间的延长,肝细胞水肿程度逐渐加重,内质网扩张逐渐加重,线粒体损伤程度加重,W20组尤为严重。术后1 d,3组大鼠肝组织中的AIF和Cyt C蛋白表达水平的比较,差异均无统计学意义(均为P0.05)。术后3、7 d,与W0组比较,W10组和W20组的AIF与Cyt C蛋白表达水平均较高,差异均有统计学意义(均为P0.05),且W20组的AIF与Cyt C蛋白表达水平均高于W10组(均为P0.05)。结论 DCD供肝热缺血主要损伤肝细胞,随着热缺血时间的延长,移植肝肝细胞内线粒体和其他细胞器形态、及线粒体凋亡相关蛋白水平均出现明显变化。     

大鼠心脏死亡器官捐献供体原位肝移植模型建立的经验总结

目的探讨建立大鼠心脏死亡器官捐献(DCD)供体原位肝移植模型的技巧并总结经验。方法将120只大鼠按热缺血时间分为3组:A组(热缺血0 min)、B组(热缺血10 min)、C组(热缺血20 min),每组各40对。通过改良"二袖套"法,对3组大鼠行原位肝移植术,记录3组大鼠手术各阶段所用时间。记录3组大鼠手术结束时,术后24 h、72 h、7 d的存活率,如出现死亡及时解剖分析死亡原因。结果 3组大鼠的供肝冷缺血时间、无肝期及受体手术时间的差异均无统计学意义(均为P0.05)。手术结束时,A组、B组、C组大鼠的存活率分别为97%、97%、100%;术后24 h,3组相应存活率分别为92%、90%、92%;术后72 h,3组相应存活率分别为90%、80%、77%;术后7 d,3组相应存活率分别为85%、70%、57%。3组大鼠手术结束、术后24 h和术后72 h存活率比较,差异均无统计学意义(均为P0.05),术后7 d C组大鼠的存活率低于A组,差异有统计学意义(P0.05)。术中和术后24 h内死亡原因多为手术操作导致,术后72 h死亡原因多为胆漏和缺血性肝衰竭,术后7 d死亡原因多为胆道并发症,且随着热缺血时间的延长,胆道并发症的发生只数增多。结论大鼠DCD供体原位肝移植模型的稳定建立关键在于保护肝脏和胆道功能,难点在于肝上下腔静脉的吻合和缩短无肝期。     

肝细胞缺血再灌注与肿瘤坏死因子-α关系探讨

肝脏细胞的缺血再灌注损伤是一个复杂的、多因素的过程。本文主要对肿瘤坏死因子-α在肝脏缺血一再灌注损伤中所处的位置、表达水平、作用及其损伤机制的最新研究进展做综述。     

CaMKⅡγ蛋白的过表达及敲低对大鼠肝细胞BRL-3A增殖的影响

目的探究CaMKⅡγ蛋白在肝细胞增殖中的作用。方法分别使用CaMKⅡγ过表达、敲低及相应空载体对照的慢病毒表达体系转染大鼠肝细胞BRL-3A,同时建立正常组形成对照。流式细胞仪检测转染效率,Western blot法检测CaMKⅡγ蛋白的表达水平,CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期。结果 CaMKⅡγ蛋白相对表达量LV-CaMKⅡγ组与CON组有统计学意义(P0.05),LVCaMKⅡγ shRNA组与CON组有统计学意义(P0.05),余间无统计学意义(P0.05)。LV-CaMKⅡγ shRNA组细胞增殖最快,与CON组比较统计学有意义(P0.05);LV-CaMKⅡγ组细胞增殖最慢,与CON组比较统计学有意义(P0.05);余各组间的差异不显著(P0.05);在G0/G1期,LV-CaMKⅡγ组细胞占比明显高于CON组(P0.01),LV-CaMKⅡγ shRNA组细胞占比明显低于CON组(P0.01),余各组间无统计学意义(P0.05)。在S+G2/M期,LV-CaMKⅡγ组细胞占比明显高于CON组(P0.01),LV-CaMKⅡγ shRNA组细胞占比低于CON组(P0.01),余各组间无统计学意义(P0.05)。结论 CaMKⅡγ蛋白表达的敲低可以促进大鼠肝细胞BRL-3A的增殖,而CaMKⅡγ蛋白的过量表达则抑制大鼠肝细胞BRL-3A增殖。