重组小鼠干细胞逆转录病毒载体高效基因转染CD41+、UT7、U937和MDA-MB-435细胞

目的:研究重组小鼠干细胞逆转录病毒载体介导基因转染,探索一条高效基因转染的途径,为重组小鼠干细胞逆转录病毒载体在基因转染中的应用提供理论依据和奠定实验基础。方法:①逆转录病毒载体的构建:EC1-4(repeats1-4ofcadherin-5extracellulardomains)基因克隆产物和mutant(Ser222A)MEK1基因克隆产物,Bg1Ⅱ和EcoRⅠ限制性内切核酸酶切割后,克隆进入逆转录病毒表达载体pMSCV。②CD41⁺细胞的获取和细胞培养:从脐带血分离的CD34⁺细胞通过TPO诱导表达CD41,FACS分离CD41⁺细胞。高糖DMEM培养液培养NIH3T3和MDA-MB-435细胞,U937细胞培养在RPMI-1640培养液,UT7细胞是细胞因子依赖性细胞株,Iscove'smodifiedDulbeco's培养液中加入GM-CSF。③测定病毒滴度:逆转录病毒载体转入包装细胞293,36h后收集病毒上清液,感染NIH3T3细胞,流式细胞仪测定病毒滴度。④Westernblot:基因转染CD41⁺、UT7、U937和MDA-MB-435细胞,Westernblot检测基因产物的表达。结果:293细胞产生高滴度MEK1pMSCV病毒:3.1×10⁷,高滴度EC1-4pMSCV病毒:1.0×10⁸。用稀释8倍的病毒转染基因,重组逆转录病毒MEK1pMSCV转染白血病细胞株UT7和U973,GFP阳性细胞(转染阳性细胞)分别是60.73％、72.56％。重组逆转录病毒MEK1pMSCV转染原代培养细胞CD41⁺,GFP阳性细胞为30.57％。重组逆转录病毒EC1-4pMSCV转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-435,GFP阳性细胞为97.54％。TPO作用CD41⁺和UT7细胞以及血清对U973细胞的作用,显示出外源mutationMEK基因的dominantnegative的效应,实验组磷酸化的MEK1减少。EC1-4基因转染的MDA-MB-435细胞表达了EC1-4基因产物。结论:重组小鼠干细胞逆转录病毒载体能高效基因转染CD41⁺、UT7、U937和MDA-MB-435细胞,转染的基因能稳定地表达。     

针刀松解法改善膝骨关节炎疼痛症状的随机对照临床研究

[目的]评价针刀松解法缓解膝骨关节炎疼痛症状的疗效和安全性。[方法]180例膝骨关节炎患者随机分入针刀组和电针组,每组各90例,分别给予针刀松解法和电针干预,共3周。采用日常生活活动能力（ADL）评分法评价两组治疗前、治疗后及治疗后6月随访时行走疼痛和上下楼梯疼痛的疗效,同时评价治疗期间的安全性。[结果]两组治疗后和随访时行走疼痛和上下楼梯疼痛评分均较治疗前升高,差异有统计学意义（P〈0.01）;组间比较治疗后和随访时ADL评分与治疗前的差值,针刀组在两个时间点的行走疼痛和上下楼梯疼痛评分差值均大于电针组,差异有统计学意义（P〈0.01）;组间比较治疗后及随访时疗效等级分布,差异有统计学意义（P〈0.01）,针刀组的疗效优于电针组。[结论]针刀松解法对缓解膝骨关节炎疼痛症状安全有效。     

益气活血法对人工关节置换患者凝血指标及血浆蛋白的影响

目的观察益气活血法对人工关节置换患者凝血指标及血浆蛋白的影响,探讨其预防深静脉血栓的可能机理。方法将60例人工关节置换患者分为治疗组和对照组各30例,对照组术后常规使用低分子肝素钙注射液4100IU皮下注射,每日1次,共2周;治疗组在对照组基础上术前3天即开始口服益气活血中药,每日1剂至术后2周。两组患者分别在入院、术晨、术后抽取静脉血测定纤维蛋白原(FIB)、部分凝血酶原时间(APTT)、血浆蛋白S、蛋白C,观察深静脉血栓的发生率,同时记录术后引流量。结果治疗组术后FIB较入院时明显降低(P<0.05),治疗组术晨和术后FIB较对照组同时间点明显降低(P<0.05或P<0.01);两组患者各时间点APTT比较差异均无统计学意义(P>0.05)。两组蛋白C术晨组间比较差异有统计学意义(P<0.05);两组蛋白S组间、组内比较差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗组深静脉血栓发生率为3.3%,对照组为10.0%,两组比较差异无统计学意义(P>0.50)。两组术后平均引流量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论益气活血法可以有效预防深静脉血栓的形成,其作用机理可能与降低FIB、激活蛋白C有关。     

工业废水中测定Cr~(6 )标准曲线的选择

络是生物体中所必需的微量元素之一。Ｃｒ６＋毒性较大,易为人体吸收且在体内蓄积．所以,对Ｃｒ６＋的测定与研究显得很重要。１实验部分１．１分析方法：二苯碳酸二肼分光光度法。１．２铬标准溶液（１）：１．００ μｇ Ｃｒ６＋／ｍｌ,铬标准溶液（Ⅱ）：５．００ μｇ Ｃｒ６＋／ｍｌ。１．３显色剂（Ⅰ）： ０．２ｇ二苯碳酰二肼溶于 ５０ｍｌ丙酮中。显色剂（Ⅱ）： １ｇ二苯碳酰二肼溶于 ５０ｍｌ丙酮中。１．４工业废水水质标准：第一类工业废水最高允许排放浓度为０．５ｍｇ／Ｌ。２绘制标准曲线２．１向一系列比色管中分别加入…     

微创椎弓根钉内固定联合磷酸钙骨水泥椎体成形术治疗胸腰椎爆裂性骨折

目的:评估微创椎弓根钉内固定(微小切口非空心椎弓根钉技术)联合磷酸钙骨水泥经皮穿刺椎体成形术(percutaneous vertebroplasty,PVP)治疗胸腰椎爆裂性骨折的疗性和安全性。方法:采用微创椎弓根钉内固定联合磷酸钙骨水泥PVP术治疗23例单节段胸腰椎新鲜爆裂性骨折且无神经症状的患者,伤椎位于T11~L2,均属A3型骨折。记录手术时间、术中出血量、骨水泥注射量和住院天数。记录术前及术后即刻、1个月、2个月、3个月、6个月、1年、2年的腰背痛评分,计算并比较各时点的椎体高度压缩率、恢复率、椎体后凸角、椎体后凸矫正率。结果:磷酸钙骨水泥平均注射量为4.9(3.8~6.4)mL,平均手术时间92(75~120)min,平均出血量52(40~75)mL,平均住院5.6(4~7)d,术后平均随访26(24~29)个月。VAS评分由术前的(8.8±1.2)分下降至术后即刻的(1.8±0.6)分及术后2年的(0.4±0.5)分,差异均有显著统计学意义(P0.001)。高度压缩率由术前的(50.4±7.2)%显著下降至术后即刻的(6.2±1.5)%及术后2年的(6.9±1.4)%,差异均有显著统计学意义(P0.001)。后凸角由术前的(22.6±1.8)°下降至术后即刻的(3.2±1.7)°及术后2年的(5.1±1.5)°,差异均有显著统计学意义(P0.001)。随访过程中术后高度恢复率、后凸矫正率无明显减小;未出现螺钉松动、断钉或断棒。结论:微创椎弓根钉内固定联合磷酸钙骨水泥PVP术是治疗胸腰椎爆裂性骨折的安全、有效的方法。     

细菌内毒素作用血管内皮细胞的机制及其临床疾病

细菌内毒素(endotoxin)，即脂多糖(lipopolysaccharide)，是革兰阴性菌的主要致病因子。机体感染革兰阴性菌后会出现炎症，发热等病理反应，严重的内毒素血症可导致感染性休克，多器官功能衰竭甚至死亡。而血管内皮细胞(vascular endothelial cell，VEC)是内毒素及各种细胞因子作用的主要靶细胞。LPS可通过直接或间接的方式激活并损伤内皮细胞，引起VEC形态与功能的改变。     

闭孔疝的诊断和治疗

目的探讨闭孔疝的诊治方法。方法对15例闭孔疝病例诊治经过结合相关文献进行回顾性分析。结果15例中,术前确诊率仅20%(3/15),误诊率80%(12/15),全组均行疝环修补术,采用剖腹探查切口。本组治愈率100%,术后切口感染及愈合不良4例(21.67%),随访8例至今无复发。结论术前易误诊、漏诊;对年老体弱、多胎生育伴有不明原因肠梗阻表现的妇女,应高度考虑闭孔疝,Howship-Romberg征及Hannington-Kiff征阳性可确诊。疝环修补术是惟一有效的方法,首选腹腔内入路。早确诊,及时手术是减少并发症、降低死亡率的关键。     

曲安奈德加玻璃酸钠关节腔内注射治疗膝骨性关节炎

膝骨性关节炎为临床常见骨科疾患，治疗上分为非手术治疗和手术治疗，非手术治疗以全身用药和关节局部用药为主，对于关节疼痛肿胀明显，行走功能障碍的患者，多采用手术治疗。自2004—2006年，作者采用曲安奈德加玻璃酸钠治疗早期膝骨性关节炎150例，疗效满意，现总结报告如下。     

祛瘀利水方结合灌洗疗法治疗膝早期骨性关节炎的临床观察

我院用祛瘀利水中药结合关节腔灌洗疗法治疗早期膝关节骨性关节炎 ,取得满意疗效 ,现报告如下。1　临床资料本组共 98例 (12 6膝 ) ,男 31例 ,女 6 7例。年龄2 3～ 83岁 ,平均 5 2 9岁。发病部位 :右膝 39例 ,左膝 31例 ,双膝 2 8例。病程 3周～ 2 5年 ,平均 4 5年。诊断标准     

猪胸腰段脊髓火器贯通伤后p53基因的早期表达

目的:建立家猪胸腰段脊髓火器贯通伤模型和改良Allen's打击伤后全瘫模型,观察伤后促凋亡基因p53基因的早期表达。方法:实验于2005-05/08在解放军第一七五医院实验室完成。取健康雄性家猪20只,单纯随机分为3组:①火器伤组:9只,在全麻状态下制作胸腰段(L1～L2)脊髓火器伤模型,分为伤后1,3,6h3个时间处死。②打击伤组:9只,L1节段脊髓行改良Allen’s打击,致伤力为500g·cm,处死时间同前。③空白对照组:2只,只麻醉,不造模,伤后6h处死。伤后不同时间点(伤后1,3,6h)和不同节段(伤点、近伤点、中伤点及远伤点)取材,采用SP法进行P53蛋白免疫组化染色,用TJTY-300型全自动图像分析仪测量P53免疫组织化学染色阳性物质吸光度。结果:经补充后20只猪进入结果分析。①脊髓损伤后3h打击伤组伤点,火器伤组近伤段脊髓P53蛋白的表达高于空白对照组(P<0.001),随着时间推移,打击伤组和火器伤组P53蛋白的表达呈升高趋势(P<0.001),且火器伤组要高于打击伤组(P<0.0001)。②在脊髓损伤后6h,打击伤组仅在伤点和近伤段P53蛋白的表达高于空白对照组(5.57±0.82,3.21±0.43,P<0.05),而火器伤组近伤段、中伤段及远段伤均高于空白对照组(6.46±0.66,4.27±0.39,1.16±0.17,P<0.05)。结论:①细胞凋亡基因p53在脊髓损伤中的表达有一定的时空性,在脊髓损伤后3h出现P53蛋白表达量的增加。②脊髓火器伤的波及范围较打击伤更为广泛。