促大鼠毛囊干细胞增殖的实验研究

本研究旨在探讨富含亮氨酸重复序列G蛋白耦联受体5(leucine-rich repeat-ontaining G protein coupled receptor5,Lgr5)基因转染是否可促进毛囊干细胞增殖。     

天然水蛭素水凝胶的皮肤渗透性能及毒理学考察

目的：探讨天然水蛭素凝胶经皮渗透给药的可行性及其对动物皮肤的毒性作用。方法：制备天然水蛭素凝胶,采用改良的Franz扩散池进行经皮渗透试验,使用Markwardt法检测水蛭素活性。选择健康Wistar大鼠进行急性皮肤毒性试验、单次及多次给药皮肤刺激性试验,健康豚鼠进行皮肤致敏性试验。结果：试验组的纤维蛋白原凝结时间均有延迟（P<0.05）,于3 h时达最大值（85.4±1.454）s,而对照组纤维蛋白原凝结时间则无明显延迟;短期内大剂量使用天然水蛭素凝胶对皮肤无毒性,对Wistar大鼠完整皮肤和破损皮肤均无刺激性,对豚鼠完整皮肤无致敏性。结论：天然水蛭素可渗透进入完整皮肤组织,其凝胶剂皮肤局部用药对试验动物较为安全。     

雷火灸联合米非司酮治疗肾虚血瘀型卵巢巧克力囊肿痛经:随机对照研究

目的:观察雷火灸联合米非司酮治疗肾虚血瘀型卵巢巧克力囊肿痛经的临床疗效。方法:将70例患者随机分为观察组和对照组,各35例。对照组予口服米非司酮治疗,每次10 mg,每日1次;观察组在对照组基础上予雷火灸治疗,穴取关元、子宫、血海,隔日1次,两组均治疗3个月。观察两组患者治疗前后COX痛经症状量表(CMSS)评分、异位囊肿最大截面积、血清转化生长因子-β1(TGF-β1)及白介素-17(IL-17)水平,并评定临床疗效。结果:治疗后,两组患者CMSS严重程度、发作时间评分及血清TGF-β1水平均较治疗前降低(P<0.05),观察组血清IL-17水平降低(P<0.05);观察组CMSS痛经症状严重程度、发作时间评分及血清TGF-β1、IL-17水平降低程度均大于对照组(P<0.05)。治疗后,两组患者异位囊肿最大截面积均减小(P<0.05),且观察组减小程度大于对照组(P<0.05)。观察组总有效率为94.3%(33/35),高于对照组的71.4%(25/35,P<0.05)。结论:雷火灸联合米非司酮治疗肾虚血瘀型卵巢巧克力囊肿痛经可明显改善痛经症状、缩短痛经时间,促进卵巢异位囊肿萎缩,其机制可能与降低血清TGF-β1、IL-17水平有关。     

天然水蛭素联合高压氧治疗对大鼠随意皮瓣成活的影响研究

目的探讨天然水蛭素联合高压氧治疗对大鼠随意皮瓣成活的影响。方法取72只SD大鼠,于背部制备面积为10.0 cm×2.5 cm的随意皮瓣移植模型后,随机分为4组(n=18)。对照组术后即刻及之后4 d内注射生理盐水,高压氧组注射生理盐水同时行高压氧治疗,水蛭素组仅注射天然水蛭素,联合组注射天然水蛭素同时行高压氧治疗。术后大体观察皮瓣成活情况,第6天计算皮瓣成活率;第2、4天取材,HE染色观察皮瓣组织学变化;免疫组织化学染色检测皮瓣微血管密度(microvessel density,MVD)以及TNF-α表达水平。结果术后各组皮瓣均出现部分坏死,其中联合组皮瓣成活最佳;术后第6天高压氧组、水蛭素组及联合组皮瓣成活率明显高于对照组,联合组高于水蛭素组、高压氧组,比较差异有统计学意义(P0.05);水蛭素组与高压氧组比较,差异无统计学意义(P0.05)。组织学观察示,术后第2天,水蛭素组、高压氧组及联合组微血管结构较对照组多,各组均见炎性细胞浸润;第4天,高压氧组、水蛭素组及联合组中仍可见较多微血管形成,对照组中见大量炎性细胞浸润,其余各组炎性细胞均较术后第2天时明显减少。免疫组织化学染色观察示,术后第2天,高压氧组、水蛭素组及联合组MVD均显著高于对照组、TNF-α蛋白表达量显著低于对照组(P0.05);高压氧组、水蛭素组及联合组以上指标比较,差异无统计学意义(P0.05)。术后第4天,高压氧组、水蛭素组及联合组MVD均显著高于对照组,联合组及水蛭素组高于高压氧组,比较差异有统计学意义(P0.05),联合组及水蛭素组间比较差异无统计学意义(P0.05);高压氧组、水蛭素组及联合组TNF-α蛋白表达量显著低于对照组,联合组低于水蛭素组及高压氧组,比较差异有统计学意义(P0.05),水蛭素组及高压氧组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论高压氧和天然水蛭素干预均能提高随意皮瓣移植后成活率,且两者联合发挥协同效应,可能与促进血管生成和减轻炎性反应有关。     

天然水蛭素对人微血管再生作用的初步研究北大核心CSCD

目的研究天然水蛭素对人微血管内皮细胞(human microvascular endothelial cells,HMVECs)增殖的影响及其诱导血管再生的机制。方法取HMVECs接种至Matrigel基质胶培养24 h,体外建立三维培养模型,于倒置相差显微镜下观察细胞生长情况。然后将细胞三维培养模型随机分为不同浓度天然水蛭素培养组(1、4、7 ATU/mL组)以及单纯含10%FBS的DMEM培养基培养组(对照组)。各组细胞三维培养模型加入对应培养基后,培养24、48、72 h采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测细胞增殖情况;培养24 h行成管实验并采用免疫荧光染色法测定细胞VEGF及Notch1表达水平。结果细胞三维培养观察示,HMVECs于基质胶上贴附良好,24 h时完全形成管腔样结构。CCK-8检测示,各时间点1、4 ATU/mL组A值均高于对照组(P<0.05),其中4 ATU/mL组最高;而7 ATU/mL组A值显著低于对照组以及1、4 ATU/mL组(P<0.05)。细胞成管实验示,1、4 ATU/mL组成管数量较对照组及7 ATU/mL组明显增多,且4 ATU/mL组多于1 ATU/mL组,差异有统计学意义(P<0.05);7 ATU/mL组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光染色示,与对照组比较,1、4 ATU/mL组Notch1表达量增高,7 ATU/mL组降低;其中4、7 ATU/mL组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。1、4、7 ATU/mL组VEGF表达量均较对照组增高,4 ATU/mL组高于1、7 ATU/mL组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论低、中浓度天然水蛭素可促进HMVECs增殖使血管再生,高浓度天然水蛭素则对HMVECs增殖及血管再生起抑制作用;其作用机制可能与VEGF-Notch信号通路有关。     

天然水蛭素水凝胶可改善随意皮瓣的存活

背景：随意皮瓣移植后易发生瘀血,甚至缺血坏死,临床与动物实验已经证明水蛭素能够提高皮瓣的存活率。 目的：探讨天然水蛭素凝胶对大鼠随意皮瓣存活的影响。方法：制备天然水蛭素凝胶,用改良的Franz扩散池进行经皮渗透实验,使用Markwardt法进行水蛭素活性的检测。选用Wistar大鼠,在其背部设计随意皮瓣,面积为9 cm×3 cm;皮瓣随机分3组,分别涂抹生理盐水、天然水蛭素凝胶、空白凝胶基质。术后进行大体、组织病理学形态观察,第7天计算皮瓣存活率。结果与结论：体外实验：Markwardt法检测到天然水蛭素凝胶组的活性成分能透过皮肤,而空白凝胶组未检测到任何活性成分。体内实验：术后7 d,天然水蛭素凝胶组皮瓣坏死长度明显长于生理盐水组、空白凝胶基质组,差异有显著性意义（P 〈 0.05）。术后 3 d,天然水蛭素凝胶组真皮内毛细血管及微静脉红细胞瘀滞现象较生理盐水组、空白凝胶基质组明显减轻;术后7 d,天然水蛭素凝胶组皮下胶原及肉芽组织增生明显优于生理盐水组、空白凝胶基质组;术后7 d,天然水蛭素凝胶组皮瓣存活率高于生理盐水组、空白凝胶基质组,差异有显著性意义（P 〈 0.05）。结果表明天然水蛭素可渗透进入完整皮肤组织,局部应用天然水蛭素水凝胶同样对皮瓣移植后瘀血有改善作用,有利于新生血管的生成。     

天然水蛭素水凝胶可改善随意皮瓣的存活

背景：随意皮瓣移植后易发生瘀血,甚至缺血坏死,临床与动物实验已经证明水蛭素能够提高皮瓣的存活率。目的：探讨天然水蛭素凝胶对大鼠随意皮瓣存活的影响。方法：制备天然水蛭素凝胶,用改良的Franz扩散池进行经皮渗透实验,使用Markwardt法进行水蛭素活性的检测。选用Wistar大鼠,在其背部设计随意皮瓣,面积为9 cm×3 cm;皮瓣随机分3组,分别涂抹生理盐水、天然水蛭素凝胶、空白凝胶基质。术后进行大体、组织病理学形态观察,第7天计算皮瓣存活率。结果与结论：体外实验：Markwardt法检测到天然水蛭素凝胶组的活性成分能透过皮肤,而空白凝胶组未检测到任何活性成分。体内实验：术后7 d,天然水蛭素凝胶组皮瓣坏死长度明显长于生理盐水组、空白凝胶基质组,差异有显著性意义(P < 0.05)。术后 3 d,天然水蛭素凝胶组真皮内毛细血管及微静脉红细胞瘀滞现象较生理盐水组、空白凝胶基质组明显减轻;术后7 d,天然水蛭素凝胶组皮下胶原及肉芽组织增生明显优于生理盐水组、空白凝胶基质组;术后7 d,天然水蛭素凝胶组皮瓣存活率高于生理盐水组、空白凝胶基质组,差异有显著性意义(P < 0.05)。结果表明天然水蛭素可渗透进入完整皮肤组织,局部应用天然水蛭素水凝胶同样对皮瓣移植后瘀血有改善作用,有利于新生血管的生成。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

天然水蛭素对大鼠缺血皮瓣血管生成作用的Micro-CT观察

目的通过Micro-CT及三维重建技术观察天然水蛭素对大鼠缺血皮瓣血管生成的影响。方法选取32只成年SD大鼠,在其背部制备一8.0cm×1.8cm大小的缺血皮瓣模型,然后随机分为水蛭素组和对照组(n=16)。水蛭素组术后即刻和术后3 d内每天皮下注射天然水蛭素0.3 mL(含天然水蛭素6 ATU),对照组皮下注射等量生理盐水。术后6 d,大体观察皮瓣成活情况并测定皮瓣成活率,取材行HE染色观察皮瓣组织学变化,行Micro-CT三维重建观察并测量皮瓣血管容积、长度及数量。结果术后两组大鼠均存活至实验完成,无感染发生。术后6 d,两组皮瓣远端均发生不同程度坏死,水蛭素组皮瓣成活率为72.11%±8.97%,显著高于对照组的58.94%±4.02%,差异有统计学意义(t=3.280,P=0.008)。组织学观察示水蛭素组较对照组组织结构层次更清楚,有较多微血管生成,炎症反应及炎症细胞浸润更轻。Micro-CT三维重建示水蛭素组皮瓣血管更多、更加密集;血管容积、长度及数量均显著大于对照组(P<0.05)。结论天然水蛭素可减轻组织炎症反应、促进缺血皮瓣血管的新生与再通,从而提高皮瓣成活率。