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目的观察外源性组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)对基质金属蛋白酶-9(MMP-9)高表达大鼠皮肤成纤维细胞生物学行为的影响,为寻找治疗糖尿病足的新方法提供实验依据。方法应用sD大鼠皮肤成纤维细胞株CRL-1213用高糖(22mmol/L)+高同型半胱氨酸(100μmol/L)联合培养建立体外MMP-9高表达皮肤成纤维细胞模型,用外源性TIMP-1(100μg/iJ)抑制MMP-9的活性,采用实时PCR法和ELISA法检测MMP.9基因及蛋白表达量,用明胶酶谱法检测MMP-9蛋白活性,采用流式细胞术检测细胞增殖功能、CCK-8检测细胞活力、ELISA法检测细胞胶原(羟脯氨酸)分泌能力、划痕实验评价细胞横向迁移能力、Transwell法评价细胞纵向迁移能力。采用单因素方差分析进行统计学分析。结果TIMP-1干预组大鼠皮肤成纤维细胞MMP-9mRNA和蛋白的表达量与MMP-9高表达组比较差异无统计学意义(P〉0.05),但MMP-9蛋白活性受到明显抑制(1.47±0.13VS0.434-0.13,t=12.495,P〈0.01)。与对照组比较,MMP-9高表达组大鼠皮肤成纤维细胞S期的比例[(9.31±0.24)%VS(6.54±0.29)%]、增殖指数[(13.8±0.5)%VS(11.3±0.6)%]、细胞活力(1.76±0.13V81.35±0.12)、胶原(羟脯氨酸)分泌量[(1126-1-63)vs(353±61)μg/L]、6h横向迁移率[(38.7±2.6)%VS(21.3±2.1)%]和纵向迁移细胞数(91±4vs71±4)均明显减少(t=16.433、7.328、5.113、19.847、11.529、8.124,均P〈0.05);TIMP-1干预后,大鼠皮肤成纤维细胞S期的比例[(6.54±0.29)%VS(7.75±0.27)%]、增殖指数[(11.3±0.6)%vs(12.5±0.5)%]、细胞活力(1.35±0.12VS1.64±0.14)、胶原(羟脯氨酸)分泌量[(3534-61)vs(829±59)仙g/L]、6h横向迁移率[(21.3±2.1)%VS(31.5±2.7)%]和纵向迁移细胞数(71±4vs85±4)与MMP-9高表达组比较得到明显改善[t=6.881、3.292、3.615、12.590、6.644、6.015,均P〈0.05]。结论MMP-9高表达大鼠皮肤成纤维细胞的生物学行为受到抑制,外源性TIMP-1能够减缓这种抑制作用。 相似文献
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目的探讨雷公藤多苷(TWP)对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞病变及肾皮质nephrin蛋白表达的影响,为糖尿病的治疗提供实验依据。方法建立高脂饮食联合链脲佐菌素(STZ)诱导DN大鼠模型,按随机数字表法分为DN组13只,小剂量TWP组(每天8 mg/kg)13只和大剂量TWP组(每天16 mg/kg)14只,并以正常大鼠为对照组(n=15)。干预12周后检测大鼠24 h尿蛋白量、血肌酐值(SCr)、尿素氮(BUN)、血糖(Glu)、肾质量/体质量的变化,并以光学显微镜及电子显微镜观察肾脏组织病理改变;免疫荧光法检测肾皮质nephrin蛋白表达。用SPSS 13.0统计软件进行单因素方差分析。结果与对照组大鼠[(0.06±0.02)mg]比较,DN组大鼠24 h尿蛋白[(1.87±0.12)mg]明显增加,差异有统计学意义(P<0.01),TWP干预可显著减少糖尿病大鼠尿蛋白排泄,小剂量和大剂量TWP组尿蛋白分别为(0.98±0.21)、(0.33±0.11)mg,与DN组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),此效应与TWP干预剂量相关,大剂量TWP组尿蛋白较小剂量TWP组下降更明显,差异统计学意义(P<0.05)。病理结果显示,DN组表现为肾小球体积增大,基底膜增厚,系膜基质显著增多,足细胞足突增宽、融合、细胞减少;TWP组大鼠肾小球、小管间质及足细胞病变明显减轻。免疫组化结果显示,DN组大鼠肾脏皮质nephrin蛋白表达[每个肾小球平均(2.35±1.75)个]较对照组大鼠肾脏皮质nephrin蛋白表达[每个肾小球平均(18.24±2.89)个]明显减少,差异有统计学意义(P<0.01),而TWP组大鼠肾脏皮质nephrin蛋白表达增加,差异有统计学意义(P<0.01),且小剂量TWP组[每个肾小球平均(11.34±1.56)个]与大剂量TWP组[每个肾小球平均(15.27±2.03)个]的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TWP干预可缓解DN大鼠足细胞病变,肾皮质nephrin蛋白表达上调可能在该保护机制中发挥作用。 相似文献
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高分泌MMP9皮肤成纤维细胞模型的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:建立高分泌基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)的皮肤成纤维细胞模型,为探讨MMP9在糖尿病足伤口愈合中的作用提供细胞模型。方法:用不同浓度的糖和同型半胱氨酸培养皮肤成纤维细胞,检测各组细胞MMP9 mRNA及蛋白表达水平和活性,筛选出MMP9表达量最高的组。结果:(1)高糖+高同型半胱氨酸组MMP9mRNA表达量(7.05±1.02)显著高于正糖组和高糖组(P均<0.01);(2)高糖+高同型半胱氨酸组MMP9蛋白表达量(206.9±33.6)pg/ml明显高于正糖组和高糖组(P均<0.01);(3)高糖+高同型半胱氨酸组MMP9蛋白活性(1.47±0.13)高于正糖组和高糖组(P均<0.01)。结论:高糖+高同型半胱氨酸联合培养成功建立体外高分泌MMP9皮肤成纤维细胞模型。 相似文献
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目的 观察基质金属蛋白酶9(matrixmetalloproteinase 9,MMP 9)高表达对大鼠皮肤成纤维细胞生物学行为的影响,以阐述其在糖尿病足伤口愈合中的可能机制.方法 本研究在中山大学孙逸仙纪念医院内分泌专科实验室完成.大鼠皮肤成纤维细胞与高糖(22 mmol/L)+高同型半胱氨酸(100 μmol/L)联合孵育建立体外MMP 9高表达细胞模型,另设正糖(5.5 mmol/L)孵育对照组.Realtime PCR、ELISA和明胶酶谱法检测MMP 9 mRNA、蛋白表达量及活性,流式细胞仪检测细胞增殖功能,CCK-8检测细胞活力,ELISA法检测细胞胶原(羟脯氨酸)分泌能力、划痕实验评价细胞横向迁移能力、Transwell法评价细胞纵向迁移能力.计量数据以均数±标准差(x-±s)表示,两组间均数的比较采用成组t检验,以P <0.05为差异具有统计学意义.结果 与对照组比较,MMP 9高表达组大鼠皮肤成纤维细胞的MMP 9 mRNA、蛋白表达量及活性,分别升高6.05倍、4.12倍和1.58倍(P<0.01);与此同时MMP 9高表达组大鼠皮肤成纤维细胞S期的比例、增殖指数、细胞活力、胶原(羟脯氨酸)分泌量、6h横向迁移率和纵向迁移细胞数,分别下降29.8%、18.1%、23.3%、68.7%、45.0%和21.4% (P <0.01).结论 MMP 9高表达的皮肤成纤维细胞增殖减慢、活力下降、迁移和胶原分泌能力降低,提示MMP 9可能抑制成纤维细胞的生物学行为. 相似文献
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目的 :探讨中老年男性睾酮水平与动脉粥样硬化之间的相关性。方法:选取2012年10月至2013年3月40~75岁的广州男性居民413例作为研究对象,收集人口学资料、临床资料及身体测量指标,实验室检测性激素、血糖、血脂等指标,彩色多普勒超声诊断仪测定颈动脉内膜中层厚度(CIMT)。结果:以CIMT=0.9 mm作为切点将人群分为颈动脉硬化组与非硬化组,游离睾酮(FT)在两组间的中位数分别为57.41 pmol/L及59.72 pmol/L(P=0.005),总睾酮(TT)两组间未见差异。Spearman相关分析提示TT、FT与CIMT呈负相关,r分别为-0.126(P=0.011)和-0.188(P<0.01)。以四分位数点作为切点由低到高将FT分为Q1、Q2、Q3、Q4组,各组颈动脉硬化患病率分别为23.30%、13.46%、17.48%、7.77%(P for trend=0.008)。TT各组颈动脉硬化的患病率分别为17.48%、18.27%、16.50%、9.71%(P for trend=0.116)。多因素Logistic回归分析评估FT各组颈动脉硬化患病优势比(OR)提示,以Q4组作为对照,在校正了年龄、腰围、收缩压、糖基化血红蛋白的影响后,Q1组的患病风险明显增高(OR1=2.491,95%CI:1.01~6.149)。同样在TT的分组中采取Logistic回归分析,以Q4组作为对照,各组患病风险未见明显差异。结论:中国40岁以上男性,血清FT低下可能是动脉粥样硬化的危险因素。 相似文献
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目的比较原发性醛固酮增多症(PA)和原发性高血压(EH)患者甲状旁腺素(PTH)水平的差异,探讨PTH和醛固酮等因素与左心室肥厚的关系。方法选择因"高血压查因"住院确诊的资料完整的病例,按性别、年龄、血压水平及高血压病程等相匹配的原则纳入110例PA患者和110例EH患者,比较两组患者的电解质情况、PTH及左心室结构的差异。结果 PA组的血钙[(2.22±0.16)比(2.29±0.10)mmol/L]、血磷[(1.00±0.20)比(1.13±0.20)mmol/L]、血钾[(3.2±0.5)比(4.0±1.5)mmol/L]水平低于EH组(均P0.01);PA组的血钠[(142.3±2.5)比(140.4±3.0)mmol/L,P0.01]和PTH水平[(71.94±33.92)比(43.53±19.94)ng/L,P0.01]高于EH组。线性回归分析示,PA组的高醛固酮水平与PTH正相关(β=0.311,P0.05)。PA组的左心室质量指数(LVMI)高于EH组[201.2(162.4~251.4)比155.5(131.4~176.1)g/m~2,P0.01]。根据PTH水平将PA组人群分为两个亚组,高PTH组LVMI高于正常PTH组[252.4(240.5~328.9)比188.0(145.2~225.5)g/m~2,P0.05]。多元线性回归分析结果示,PA组的血磷和PTH是LVMI的影响因素(分别β=-0.264、0.607,P0.05);全部样本中,入院收缩压、醛固酮、PTH、血钙、腰臀比是LVMI的影响因素(分别β=0.292、0.244、0.416、0.241、0.209,均P0.05)。结论 PA患者具有更高水平的PTH,醛固酮和PTH共同参与左心室肥厚的发生。 相似文献
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目的 探索甘油三酯-葡萄糖(triglycerides-glucose,TyG)指数与脂联素的相关性。方法 纳入2018年12月至2019年10月在广州及东莞采集的自然人群3680例受试者样本作为研究对象,采用胶乳增强免疫比浊法检测脂联素水平,检测甘油三酯、空腹血糖,利用公式计算甘油三酯-葡萄糖指数。相关性分析采用Pearson相关性分析及多因素校正后的线性回归分析。结果 根据脂联素四分位数间距分组下的组间比较结果显示甘油三酯-葡萄糖指数随脂联素水平增加而减少,相关性分析和多因素线性回归分析结果显示两者呈负性关联,差异具有统计学意义(P<0.001)。此外,亚组分析结果显示,除外瘦人群,两者负性关联在其他亚人群中稳定存在(P<0.001)。结论 甘油三酯-葡萄糖指数与脂联素存在显著的负性关联。然而,在瘦人群中甘油三酯-葡萄糖指数与脂联素负向关联消失,提示在瘦人群中胰岛素抵抗与脂肪代谢的关联与一般人群存在差异。 相似文献