p38MAPK信号转导通路在七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的 评价p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路在七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用.方法 健康新生SD大鼠,日龄1～3 d,处死后取心室肌组织,培养心肌细胞,随机分为7组:对照组(C组)于CO2培养箱中持续培养3 h;缺氧复氧组(AR组)细胞缺氧2 h,复氧1 h;七氟烷后处理组(SP组)细胞缺氧2 h,复氧开始即刻更换为3%七氟烷饱和的DMEM培养液,孵育20 min,再更换为无血清DMEM培养液,继续复氧40 min;七氟烷后处理+SB203580组(SP+SB组)于七氟烷后处理同时加入SB203580(p38MAPK特异性抑制剂)至5 μmol/L,孵育20 min;七氟烷后处理+二甲亚砜组(SP+DMSO组)于七氟烷后处理同时加入0.1%DMSO,孵育20 min;SB203580组(SB组)于复氧开始时加入SB203580至5 μmol/L,孵育20 min;二甲亚砜组(DMSO组)于复氧开始即刻加入0.1%DMSO,孵育20 min.各组细胞分别接种于24孔培养板(1 ml/孔)、35 mm培养皿(5 mlnd/皿)和50 ml培养瓶(8 ml/瓶)中,每组12孔、6皿和6瓶.于复氧结束后,采用比色法测定细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性;采用台盼蓝排斥实验测定细胞存活率;采用流式细胞仪测定细胞凋亡率;采用Western blot法测定磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)表达水平.结果 与C组比较,其余各组LDH活性升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,AR组、SP组、SP+SB组、SP+DMSO组和DMSO组p-p38MAPK表达上调(P<0.05);与AR组比较,SP组、SP+SB组和SP+DMSO组LDH活性降低,细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,p-p38MAPK表达上调(P<0.05);与SP组比较,SP+SB组、SB组和DMSO组LDH活性升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,p-p38MAPK表达下调(P<0.05).结论 七氟烷后处理可通过激活p38MAPK信号转导通路减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.     

钬激光在肾盂癌根治术中的应用

目的:探讨经尿道用钬激光环切输尿管口行肾输尿管全长切除术治疗肾盂癌的应用价值。方法:10例肾盂癌患者先在膀胱镜下使用频率15～30 Hz,脉冲能量1.0～1.5J,功率15～40 W的钬激光光纤绕输尿管开口外周约0.5 cm处环形切割,然后取腰部切口切除肾输尿管并拔除末段输尿管,自切口整块取出肾输尿管全长,术后定期行丝裂霉素膀胱灌注。结果:手术时间140～200 min。平均160 min,术中无一例并发大出血、输尿管断裂,术后无明显尿外渗,无感染。随访3～12月,未见膀胱肿瘤复发及转移。结论:此手术方法创伤小、并发症少、效果好、简单易行,是治疗肾盂癌的有效手术方法之一。     

p38MAPK信号转导通路在七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

Objective To evalnate the role of p38 mitogen-activated protein kinase (p38MAPK) signal pathway in the protective effect of sevoflurane postconditioning (S-Postcon) on cultured neonatal rat cardiomyocytes against anoxia/reoxygenation (A/R) injury. Methods Primary cultured neonatal rat cardiomyocytes were randomly divided into 7 groups: group Ⅰ normal control (C); group Ⅱ A/R; group Ⅲ S-Poatcan + A/R; group ⅣS-Postcon + SB203580 + A/R; group Ⅴ S-Postcon + DMSO + A/R; group Ⅵ SB203580 + A/R and group Ⅶ DMSO + A/R. GroupⅡ-Ⅶ were exposed to 2 h anoxia (95% N2-5% CO2) followed by 1 h reoxygenation. In group Ⅲ, Ⅳ and Ⅴ the cultured myocytes were postconditioned with 20 min 3% sevoflurane in 97% O2 alone (in group Ⅲ) or in conjunction with 5 μmol/L 5B203580 (a specific p38 MAPK inhibitor) (in group Ⅳ) or 0.1% DMSO (in group Ⅴ) followed by 40 min reoxygenation. The cardiomyocytes were reoxygenated in the presence of 5 μmol/L SB203580 in group Ⅵ or 0.1% DMSO in group Ⅶ. The LDH activity, cell survival rate and apoptotic rate were measured at the end of the experiment. The levels of phosphor-p38MAPK (p-p38MAPK) was detected by Western blotting. Results S-Postcon reduced LDH activity and apoptotic rate and increased cell survival rate and the level of p-p38MAPK as compared with group A/R (group Ⅱ). The myocardial protecfive effect of S-Posteon was eliminated by p38MAPK inhibltor-SB203580 and p-p38MAPK level was also decreased at the same time.Conclusion Sevoflurane postconditioning can attenuate anoxia/reoxygenation induced cardiomyocyte injury through activation of p38MAPK signal pathway.     

短发夹RNA对前列腺癌细胞中PIM-1基因沉默效应的研究

目的:探讨脂质体介导的短发夹RNA(shRNA)对前列腺癌细胞中PIM-1基因表达的影响.方法:构建3种针对PIM-1 mRNA不同靶点的shRNA重组质粒表达载体,并转染前列腺癌PC-3细胞.分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹法(Westernblot)检测转染后细胞中PIM-1 mRNA及蛋白的表达情况.结果:转染48 h后,3种PIM-1基因靶向性shRNA表达质粒均可抑制PC-3细胞中PIM-1 mRNA和蛋白的表达,其中靶向PIM-1 mRNA第707-725位和1080-1098位序列的重组质粒干扰效果更显著.结论:本研究所构建的PIM-1 shRNA表达质粒可在体外高效特异地抑制前列腺癌细胞中PIM-1的表达,为下一步研究奠定了基础.     

尿脱落细胞吖啶橙染色检查在膀胱癌诊断中的应用价值

目的 探讨尿脱落细胞吖啶橙荧光染色(AO-F)检查在膀胱癌诊断中的应用价值.方法 回顾性分析1016例膀胱癌患者资料,按临床分期、病理分级、肿瘤大小、数目、部位,手术治疗方式及有无血尿症状,分别计算AO-F阳性率,并进行统计学分析.结果 1016例患者尿样AO-F阳性率78.05%(793/1016),表浅癌和浸润癌患者阳性率分别为74.69%(611/818)和91.92%(182/198);病理分级≤Ⅱ级和Ⅲ级患者阳性率分别为67.24%(351/522)和90.37%(413/457);有无血尿症状患者阳性率分别为80.30%(750/934)和52.44%(43/82);肿瘤直径≥2 cm和<2 cm患者阳性率分别为79.87%(710/889)和65.35%(83/127);多发和单发肿瘤患者阳性率分别为83.07%(363/437)和74.27%(430/579);肿瘤累及膀胱三角区或膀胱颈部者阳性率为77.21%(105/136),累及其他部位者为78.07%(687/880);治疗方法TURBt、膀胱部分切除和膀胱全切除患者阳性率分别为69.68%(393/564),87.87%(268/305)和91.74%(100/109).AO-F阳性率与膀胱癌临床分期、病理分级、手术治疗方式、肿瘤大小、数目及有无血尿症状等因素有明显相关性,且与其临床分期、病理分级间存在正相关(r值分别为0.99和0.97);患者性别及肿瘤发生部位等因素与AO-F阳性率之间无相关性.结论 尿脱落细胞AO-F榆查诊断膀胱癌阳性率高,且简便、无创、经济、准确性高,可反复进行,可提高膀胱癌患者的早期诊断率,值得临床推广应用.     

中药治疗溃疡性结肠炎实验研究概述

溃疡性结肠炎是一种原因不明的肠道慢性非特异性炎症,以溃疡糜烂为主,病变主要位于结肠的黏膜和黏膜下层,多累及直肠和远端结肠。以腹泻、腹痛和黏液脓血便为主要临床表现,严重影响患者的正常工作和生活。中医药治疗本病具有一定优势,但治疗机制尚不明确,中药治疗本病的实验研究取得了很大进步。     

PSMAe/p驱动shRNA靶向干扰核干因子治疗前列腺癌的研究

目的 探讨前列腺特异性膜抗原增强子、启动子(PSMAe/p)驱动shRNA靶向干扰核干因子(NS)治疗前列腺癌的有效性和应用前景.方法 免疫组织化学染色观察NS基因在前列腺癌LNCaP细胞和PC-3细胞中的表达 ;利用构建的以poly(A)为终止信号的NS特异性shRNA表达载体pPSMAe/p-shNS-poly(A)转染LNCaP细胞和PC-3细胞 ;观察RNA干扰后细胞体外增殖的变化,检测NS基因水平、细胞周期、细胞凋亡的变化.结果 NS在LNCaP和PC-3细胞中高表达 ;pPSMA-shNS-poly (A)在转染高表达PSMA的LNCaP细胞后NS表达受到抑制,细胞周期受到阻滞,并抑制了细胞的增殖,同时导致细胞发生凋亡 ;而在不表达PSMA的PC-3细胞中NS表达无明显抑制,细胞周期未受到阻滞,细胞凋亡无明显变化.结论 PSMAe/p驱动shRNA靶向干扰NS基因具有细胞特异性 ;NS基因在LNCaP细胞恶性增殖中发挥重要作用,NS可能是前列腺癌基因治疗的理想靶基因之一.     

性别差异对异补骨脂素在大鼠体内吸收和分布的影响

目的：目的研究异补骨脂素（iopsoralen,IPO）在雌雄大鼠体内药动学和组织分布特征,探讨性别差异对IPO体内吸收和分布的影响。方法：通过单次灌胃给予雌雄大鼠80 mg·kg^-1IPO溶液,采用HPLC法测定不同时间点雌雄大鼠血浆和主要脏器（肝、肾、心、脾、肺）中IPO的含量,应用DAS 2.0计算主要药动学参数、SPSS 19.0进行统计学分析。结果：血浆药动学结果发现,雌雄大鼠血浆中IPO浓度变化趋势基本一致,但雌鼠血浆中AUC显著高于雄鼠。组织分布结果发现,IPO在雌雄大鼠肝肾组织中暴露量高于其他组织,其中IPO在雌鼠肝脏中AUC_0-t为（1 439.08±84.27） mg·h·L^-1,显著高于雄鼠（1 239.55±26.25） mg·h·L^-1（P<0.05）。结论：IPO在雌雄大鼠体内进程存在显著性别差异,主要表现为雌性大鼠血浆和肝组织中暴露量显著高于雄鼠,这可能是IPO易引起雌性大鼠肝损伤的原因。     

PIM-1基因沉默对前列腺癌细胞生长抑制作用的研究

目的:探讨RNA干扰(RNAi)沉默PIM-1基因表达对前列腺癌细胞体外生长的影响.方法:将RNAi重组质粒(pPIM1-shRNA-3)经脂质体介导转染前列腺癌PC-3细胞,用G418筛选稳定转染、PIM-1基因沉默的PC-3细胞.用空质粒载体(pRNAT-U6.1/Neo)稳定转染的PC-3细胞和正常培养的PC-3细胞作为对照,进行体外研究.利用细胞计数法分别检测3组PC-3细胞的增殖能力.利用流式细胞技术分别检测3组PC-3细胞的细胞周期及凋亡情况.结果:与两对照组PC-3细胞相比,PIM-1基因沉默组的PC-3细胞在培养48、72和96 h的细胞计数显著减少(P＜0.01),细胞周期中G1期细胞的比例显著升高,而S期细胞的比例显著降低(P＜0.01),发生早期凋亡的细胞比例明显升高(P＜0.01).结论:PIM-1基因沉默可以使得PC-3细胞的细胞周期进程受阻,抑制细胞增殖,并诱发细胞凋亡.PIM-1可以作为前列腺癌基因治疗的有效靶点,具有潜在的临床应用价值.