pcDNA3.1(+)/VEGF165质粒转染骨髓内皮祖细胞后VEGF165的表达

目的:培养和鉴定大鼠内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells,EPCs),观察pcDNA3.1(+)/VEGF165质粒转染大鼠骨髓内皮祖细胞后内皮细胞生长因子165(Vascular endot-helial growth fator-165,VEGF165)的表达.方法:体外培养内皮祖细胞,以免疫细胞化学法检测其表面抗原(CD34、CD133、KDR)的表达.通过pcDNA3.1(+)质粒转染VEGF165后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测内皮祖细胞培养上清液中VEGF蛋白的水平,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测内皮祖细胞中VEGF165mRNA的表达.结果:免疫细胞化学检测表明培养的细胞为大鼠内皮祖细胞,PCR后凝胶电泳显示pcDNA3.1(+)/VEGF165质粒转染组在576 bp处可见有明显条带,pcDNA3.1(+)空质粒转染组和未转染组可见微弱的电泳带位于500 bp与600 bp之间,约576bp大小.ELISA检测结果为pcDNA3.1(+)/VEGF165质粒转染组上清液中VEGF165水平为(175.8±10.7)pg/ml,pcDNA3.1(+)空质粒组为(10.5±1.6)pg/ml,未转染组为(9.3±1.3)pg/ml.结论:内皮祖细胞体外培养有微量VEGF165表达,应用pcDNA3.1(+)/VEGF165载体转染,可使SD大鼠内皮祖细胞高效表达VEGF165.     

睾丸脱位合并腹股沟斜疝嵌顿(附1例报道及文献复习)

<正>睾丸脱位是一种罕见的疾病,1818年Claubry最先报道[1],至2008年国内文献报道70例,其中恶变4例[2]。随着车祸发生率上升,近年来其发病率有所提高,由于对该病的认识不足该病容易漏诊而延误治疗,应引起全科医师的重视。睾丸脱位多系创伤引起,非创伤性睾丸脱位更罕见,国内曾报道过     

体外分离培养大鼠骨髓内皮祖细胞及其生物学特性鉴定

背景：现阶段急需建立一种稳定的体外分离培养内皮祖细胞的方法,骨髓中内皮祖细胞的含量丰富,增殖能力强,而且容易获得,操作简单。 目的：拟在体外分离培养大鼠骨髓内皮祖细胞,并对其生物学特性进行鉴定。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2008-08/12在重庆医科大学附属第一医院中心实验室完成。 材料：清洁级2周龄SD大鼠20只,由重庆医科大学实验动物中心提供。 方法：无菌条件下分离大鼠股骨和胫骨,用预冷至4 ℃的0.01 mol/L磷酸盐缓冲液冲洗骨髓腔,以密度梯度离心法收集单个核细胞层,含体积分数为20%胎牛血清的M199培养液重悬细胞,制成单细胞悬液后进行细胞计数,按1×109 L-1浓度接种到预先用纤维连接蛋白包被的培养瓶中,37 ℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度恒温培养。 主要观察指标：倒置显微镜观察细胞形态变化,免疫细胞化学检测内皮祖细胞表面特异性抗原CD133、内皮祖细胞表面抗原CD34和血管内皮生长因子受体KDR的表达,并进行流式细胞仪定量分析和细胞生长曲线分析。 结果：新分离获得的骨髓单个核细胞为小圆形,培养4 d后贴壁细胞呈“集落”样生长,中间为圆形贴壁细胞,外周梭形细胞较多,传代后梭形细胞首尾相连,呈“毛细血管”样排列。培养第4,7,10,14天贴壁细胞CD34,KDR,CD133均呈阳性表达,CD133阳性细胞第10天时开始减少。流式细胞仪检测结果显示,CD133/KDR双阳性细胞率逐渐升高, 10 d时达峰值,随后下降。KDR阳性细胞率随培养时间的延长而逐渐升高。原代细胞生长曲线显示细胞在第3~6天处于指数生长期,贴壁细胞大量增殖,呈“集落”样生长。 结论：采用密度梯度离心法可成功从SD大鼠骨髓中分离获得内皮祖细胞,加入M199培养液后能够贴壁增殖,并可以分化为内皮细胞。     

勃起功能障碍的干细胞治疗研究

勃起功能障碍（erectiledysfunction,ED）是指阴茎不能持续勃起或虽能勃起但不能维持勃起而无法达到满意性生活的状况,病程至少3个月以上。定义中的性生活“满意”,指阴茎不仅能勃起足以插入阴道而且还要维持一定的时间。ED发病率较高,1995年全世界约有1．52亿男性患者,估计2025年将有3．22亿。     

国内伐地那非治疗勃起功能障碍临床疗效的Meta分析

目的:系统评价国内伐地那非治疗勃起功能障碍的临床疗效。方法:计算机检索2004年～2009年6月CBMdisc、VIP、CNKI以及万方数据库等,获得5篇符合纳入标准的文献,对其进行Meta分析,并评价Meta分析结果的稳定性和发表偏倚。结果:异质性检验Chi-square=206.56,P<0.00001。采用随机效应模型进行Meta分析,合并WMD=9.64,95%CI为(8.92,10.35),总体效应检验,Z=26.44,P<0.00001,具有统计学意义。固定效应模型WMD值和95%CI与随机效应模型、剔除小样本后随机效应模型的结果基本一致,且本研究的发表偏倚得到了较好控制。结论:伐地那非能明显改善男性勃起功能障碍。     

体外分离培养大鼠骨髓内皮祖细胞及其生物学特性鉴定

背景:现阶段急需建立一种稳定的体外分离培养内皮祖细胞的方法,骨髓中内皮祖细胞的含量丰富,增殖能力强,而且容易获得,操作简单.目的:拟在体外分离培养大鼠骨髓内皮祖细胞,并对其生物学特性进行鉴定.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-08/12在重庆医科大学附属第一医院中心实验室完成.材料:清洁级2周龄SD大鼠20只,由重庆医科大学实验动物中心提供.方法:无菌条件下分离大鼠股骨和胫骨,用预冷至4℃的0.01 mol/L磷酸盐缓冲液冲洗骨髓腔,以密度梯度离心法收集单个核细胞层,含体积分数为20%胎牛血清的M199培养液重悬细胞,制成单细胞悬液后进行细胞计数,按1×109L-1浓度接种到预先用纤维连接蛋白包被的培养瓶中,37℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度恒温培养.主要观察指标:倒置显微镜观察细胞形态变化,免疫细胞化学检测内皮祖细胞表面特异性抗原CD133、内皮祖细胞表面抗原CD34和血管内皮生长因子受体KDR的表达,并进行流式细胞仪定量分析和细胞生长曲线分析.结果:新分离获得的骨髓单个核细胞为小圆形,培养4 d后贴壁细胞呈"集落"样生长,中间为圆形贴壁细胞,外周梭形细胞较多,传代后梭形细胞首尾相连,呈"毛细血管"样排列.培养第4,7,10,14天贴壁细胞CD34,KDR,CD133均呈阳性表达,CD133阳性细胞第10天时开始减少.流式细胞仪检测结果显示,CD133/KDR双阳性细胞率逐渐升高,10 d时达峰值,随后下降.KDR阳性细胞率随培养时间的延长而逐渐升高.原代细胞生长曲线显示细胞在第3～6天处于指数生长期,贴壁细胞大量增殖,呈"集落"样生长.结论:采用密度梯度离心法可成功从SD大鼠骨髓中分离获得内皮祖细胞,加入M199培养液后能够贴壁增殖,并可以分化为内皮细胞.     

膀胱胃肠外间质瘤1例并文献复习

目的：探讨胃肠道外间质瘤（extra-gastrointestinal stromal tumor,EGIST）,尤其是膀胱胃肠外间质瘤的临床特点、诊断及治疗。方法：分析1例膀胱胃肠外间质瘤患者的诊治情况,并复习有关文献。结果：患者行膀胱部分切除术,免疫组化结果：CD117（＋＋）,诊断为膀胱胃肠外间质瘤。结论：膀胱胃肠外间质瘤临床罕见,无特征性临床表现,需靠免疫组化确诊,以手术切除治疗为主,转移和不能手术治疗者可采取分子靶向治疗。     

携带小鼠信号转导子及转录激活子3重组慢病毒载体的构建与鉴定

目的：构建携带小鼠信号转导子及转录激活子3(STAT3)的重组慢病毒载体,并检测 STAT3的蛋白表达,进行慢病毒包装并鉴定。方法将小鼠成肌细胞总 RNA 通过 STAT3引物逆转录为 cDNA PCR 扩增、回收后,同 pLVX-IRES-Zs-Green1载体片段连接,酶切鉴定及测序,将 pLVX-IRES-ZsGreen1-STAT3转染293 T 细胞,48 h 后收集细胞,Western blot 检测STAT3表达量,通过瞬时转染法包装出病毒上清。结果测序结果证实 STAT3成功插入 pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒载体,成功构建了慢病毒载体 pLVX-IRES-ZsGreen1-STAT3,共转染293 T 细胞48 h,Western blot 检测 STAT3表达量明显增强。测定病毒滴度为8.4×107 TU/mL。结论成功构建了 STAT3基因的重组慢病毒表达载体,为进一步应用奠定了基础。     

勃起功能障碍的干细胞治疗研究

勃起功能障碍(erectile dysfunction,ED)是指阴茎不能持续勃起或虽能勃起但不能维持勃起而无法达到满意性生活的状况,病程至少3个月以上.定义中的性生活"满意",指阴茎不仅能勃起足以插入阴道而且还要维持一定的时间.ED发病率较高,1995年全世界约有1.52亿男性患者,估计2025年将有3.22亿[1].     

Wnt信号传导通路与恶性黑素瘤的相关性研究进展

恶性黑素瘤(Malignant Melanoma,MM)是一种高度恶性肿瘤,其特点为生长隐匿、转移早且迅速,预后差及死亡率高[1]。资料统计显示在所有原发皮肤恶性肿瘤中恶性黑素瘤虽然只占4%,但其致死率却占79%[2]。近年来全球范围累积发病率正以每年5%~7%的速度逐年上升,上升率超过了任何一种人类肿瘤。目前影响该病的因素尚不十分清楚,临床治疗仍以手术为主,并辅以放疗、化疗及免疫治疗,但疗效并不理想。Wnt信号传导通路作为细胞间信号传导途径之一,在细胞分化、增殖及肿瘤形成过程中起着举足轻重的作用。Wnt途径的异常与多种肿瘤的发生或转移有关,恶性黑素瘤的发生发展也与其关系密切。本文对Wnt信号传导通路的研究进展做一综述,重点介绍其在恶性黑素瘤中的作用。