肾小球系膜细胞一氧化氮合成酶细胞外基质合成影响的研究

目的研究体外培养的系膜细胞诱生型一氧化氮合成酶(iNOS)表达水平对细胞外基质成分(IV型胶原、纤维连接蛋白)含量的影响。方法胎肾培养原代系膜细胞，取Ⅲ代细胞进行实验。采用TRLzolRNA一步法提取系膜细胞总RNA。半定量逆转录聚合酶链反应法(RT—PCR)测定iNOSmRNA表达，以β-action为内对照。酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养液中细胞外基质成分IV型胶原、纤维连接蛋白(FN)的含量。硝酸还原酶法检测培养液中NO的含量。对照组为RPMI1640 10％小牛血清(FGS) 1mM左旋精氮酸(L-arginine)，实验组为1脂多糖(LPS)10ug／ml，观察24h。结果系膜细胞中iNOSmRNA的表达；在未刺激的MC中无iNOSmRNA表达；刺激后4小时可检测到iNOSmRNA表达，6小时明显增加，24小时达到高峰；至48hr，iNOSmRNA表达仍继续增加。上清中的NO：(1)6小时LPS组与对照组无明显差别，24小时后LPS组NO含量增加：(2)LPS诱导的NO含量的增加可被L—NAME抑制。上清IV型胶原，FN含量：(1)4小时、6小时、24小时、48小时LPS组与对照组比较含量降低(P(O，05)(2)I。PS诱导的IV型胶原、FN的降低被L—NAME明显抑制。结论我们的研究发现肾小球MC确含有iNOS，且在生理状态下呈稳定状态，病理状态下iNOS表达上调；MC分泌的ECM与i—NOS表达有关；NO可降低ECM的含量，提示iNOS诱导的NO在肾小球硬化的发生和发展中起到了重要作用；各种因素对iNOS影响的最终结果是NO的变化．能够引起iNOS表达变化的各种因素均可引起NO含量的变化，从分子水平进一步证实肾小球MC-氧化氮合成酶的表达水平与细胞外基质密切相关。     

连续性肾脏替代治疗在肾功能不全重度酸中毒时的应用

连续性肾脏替代治疗 (CRRT)技术在临床常见危重病例的急救中体现出很大优势 ,我们采用CRRT技术治疗 9例肾功能不全并重度酸中毒的患者 ,现分析报告如下。1　临床资料1.1.　病例选择　 9例均为 2 0 0 2年 5— 12月住院肾功能不全(急性或慢性 )患者 ,男 7例 ,女 2例 ,年龄 4 3～ 81岁 ,平均 6 7岁。1.2　临床表现　急性肾衰 (ARF) 3例 ,均为重度感染、感染性休克诱发 ,其中 2例为急性胰腺炎 ,1例为急性胆囊炎、感染性休克。慢性肾衰 (CRF) 6例 ,其中糖尿病肾病 4例 ,高血压肾病 2例。所有患者均有不同程度其他并发症 ,如肺部感染、消化…     

地塞米松及环磷酰胺对系膜细胞一氧化氮合成酶及细胞外基质的影响

系膜细胞(Mc)在肾小球疾病的发生和发展过程中起到了非常重要的作用。近年来发现一氧化氮(N0)是引起肾脏疾病的重要介质之一，一氧化氮及其合成酶(iNOS)与肾小球硬化密切相关。地塞米松(Dx)、环磷酰胺(cTx)是临床上用于治疗肾小球疾病的常用药。2者是否具有减轻肾小球硬化的作用、其作用机制是否与N0有关?我们从细胞、分子水平来探讨上述问题。     

一氧化氮合成酶在人肾小球系膜细胞中表达的研究

目的探讨肾小球系膜细胞 (MC)诱生型一氧化氮合成酶 (iNOS)的表达。方法采用 4个月龄水囊引产的胎儿 ,取胎肾 ,用不锈钢网筛分离技术 ,培养原代系膜细胞 ,用胰酶传代 ,取Ⅲ代细胞用于实验。设实验组和对照组 ,观察脂多糖 (LPS)刺激后不同时间 (4、6、2 4、4 8小时 )及一氧化氮合成酶抑制剂 (L NAME)刺激后同一时间 (2 4小时 )对诱生型一氧化氮合成酶表达的影响。结果细胞为梭形、星形或树枝状 ,核居中央 ,呈圆形或椭圆形 ;免疫荧光结果为抗结蛋白抗体、抗Ⅳ型胶原、抗纤维连接蛋白 (FN)、抗层粘连蛋白 (LN)阳性 ;抗角蛋白、抗Ⅷ因子抗体阴性 ;在未刺激的MC中无iNOSmRNA的表达 ;LPS刺激后 4小时 ,即可检测到iNOS ;6小时后开始明显增加 ;2 4小时达到高峰 ;至 4 8小时iNOS仍较高 ;L NAME为iNOS特异性的抑制剂。结论肾小球MC确含有iNOS ,且在生理状态下呈稳定状态 ,病理状态下 (如LPS刺激后 )表达上调。     

高糖对系膜细胞诱生型一氧化氮合酶表达及细胞外基质合成的影响

目的:探讨高糖对体外培养的系膜细胞诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达的调节作用及NO合成的变化,以及上述变化对细胞外基质(ECM)合成的影响.方法:利用脂多糖(LPS)诱导系膜细胞表达iNOS,观察5.6、10、25、40 mmol/L不同糖浓度,在0、4、24、48 h不同时间点培养的系膜细胞iNOS mRNA表达的变化及培养上清中NO、Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白含量的变化,以相同渗透压的甘露醇为对照组.细胞增殖测定采用MTT法,iNOS表达采用RT-PCR的方法,NO的检测采用硝酸还原法,Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白的测定采用ELISA法.结果:高糖抑制系膜细胞增殖;LPS刺激后系膜细胞可表达iNOS;高糖浓度时iNOS mRNA表达增加,呈浓度和时间依赖性,相同渗透压的甘露醇无类似作用(P<0.01);随着糖浓度的升高和时间延长,实验组上清中NO含量增加,Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白含量增加.结论:高糖可上调系膜细胞iNOS mRNA的表达和促进NO、Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白的合成.