稳定表达TSLC1基因骨肉瘤MG63细胞系的建立及鉴定

目的 建立稳定表达人肺癌抑癌基因-1（TSLC1）骨肉瘤细胞系并对其进行鉴定.方法 脂质体转染的方法 将真核表达载体pCI-TSLC1稳定转染至MG63细胞系,经克隆化培养以及G418筛选,获得了1株稳定高表达TSLC1蛋白的细胞系.对其表达的蛋白性质进行了鉴定,对其分泌动态、细胞纯度、遗传稳定性、外源基因整合等生物学特性做了鉴定.结果 获得高表达TSLC1的稳定细胞系,命名为M8T.生物学性状研究结果 表明该转基因细胞系纯度好,遗传性状稳定,抽提细胞RNA进RT-PCR,扩增到与预期结果 大小一致的DNA片段,说明TSLC1基因成功整合到细胞基因组中.细胞系无细菌和霉菌污染.结论 成功建立了稳定表达TSLC1的骨肉瘤细胞系M8T.该细胞系遗传性质稳定,为进一步研究抑癌基因TSLC1在骨肉瘤中的作用奠定了基础.     

周期性单轴牵张应力对大鼠前软骨干细胞相关增殖基因的影响

目的观察周期性单轴牵张应力对大鼠前软骨干细胞增殖相关基因的影响。方法采用四点弯曲应力仪分别以2000μstrain和4000μstrain的牵张力刺激前软骨干细胞1h,并设空白对照组,荧光定量PCR检测相关增殖基因PCNA和CyclinD1的表达情况,并用免疫荧光检测力学激前后Ki67阳性细胞的表达情况。结果2000μstrain刺激组细胞表达PCNA以及CyclinDl较对照组高（P〈0．05）,免疫荧光检测提示2000μstrain刺激组的细胞核内Ki67表达较对照组明显增多;而4000μstrain刺激组细胞PCNA的表达与对照组相比明显降低（P〈O．05）,而CyclinD1降低不明显（P〉0．05）。结论适宜的周期性单轴牵张力能引起大鼠前软骨干细胞相关增殖基因的表达增加。     

环境14C的卫生与监测

14C是碳的一种放射性同位素。近年来,由于它在地质、考古、生物、医学和环境等科学领域日趋广泛的应用,现在14C的研究工作巳在很多学科开展起来。     

核反应堆放射性废液的监测

目前全球已兴建核反应堆471座,对核反应堆的排污监测早已为人们所重视。据美国50个商业核电站的常规排放放射性废液,其中半数来自压水堆,其它来自沸水堆。在美国的核安全规程管理委员会(NRC)和环境保护局(EPA)要求掌握     

周期性单轴牵张应力对大鼠前软骨干细胞相关增殖基因的影响

目的观察周期性单轴牵张应力对大鼠前软骨干细胞增殖相关基因的影响。方法采用四点弯曲应力仪分别以2 000μstrain和4 000μstrain的牵张力刺激前软骨干细胞1 h,并设空白对照组,荧光定量PCR检测相关增殖基因PCNA和Cyclin D1的表达情况,并用免疫荧光检测力学激前后Ki67阳性细胞的表达情况。结果 2 000μstrain刺激组细胞表达PCNA以及CyclinD1较对照组高(P<0.05),免疫荧光检测提示2 000μstrain刺激组的细胞核内Ki67表达较对照组明显增多;而4 000μstrain刺激组细胞PCNA的表达与对照组相比明显降低(P<0.05),而Cyclin D1降低不明显(P>0.05)。结论适宜的周期性单轴牵张力能引起大鼠前软骨干细胞相关增殖基因的表达增加。     

NF-κB shRNA转染骨髓间充质干细胞对炎症因子的影响

目的鉴定NF-κB/p65-shRNA质粒并转染入骨髓间充质干细胞,检测靶细胞在NF-κB通路激活时磷酸化NF-κB/p65的表达。方法用双酶电泳鉴定所得质粒。使用HP试剂将NF-κB/p65-shRNA质粒转染至小鼠BMSCs,在荧光显微镜下观察绿色荧光,并且以流式细胞术检测转染效率,最后以Western Blot检测转染后靶细胞在炎症环境下对磷酸化NF-κB/p65表达的抑制情况。结果 NF-κB/p65-shRNA质粒酶切鉴定结果与预期一致;流式细胞术检测转染效率达到52.76%;Western Blot检测在炎症环境刺激下,转染后靶细胞磷酸化NF-κB/p65表达明显降低。结论成功将NF-κB/p65-shRNA质粒转染至BMSCs中并有效表达,为进一步实验通过BMSCs修复和重建骨关节炎患者的软骨组织奠定基础。     

周期性单轴牵张力对前软骨干细胞增殖影响的实验研究

目的观察周期性单轴牵张力对前软骨干细胞增殖能力的影响。方法免疫磁珠分选新生大鼠前软骨干细胞(precartilaginous stem cells,PSCs),取生长良好的第三代PSCs,通过四点弯曲细胞加压装置对细胞加载不同的机械牵张力(2 000、4 000μstrain),并在不同时间点(1、2、4和8 h)收集细胞,采用流式细胞仪检测应力刺激后PSCs的细胞周期及增殖指数的变化,揭示不同的牵张力在不同的时间点对PSCs增殖活性的影响。结果周期性单轴牵张力能影响大鼠PSCs的增殖活性。2 000μstrain机械牵张力组与对照组相比,增殖指数升高(P<0.05),促进细胞增殖,并且S期DNA合成率增多(P<0.05);而4 000μstrain机械牵张力组与对照组比较,增殖指数降低,抑制细胞增殖(P<0.05),同时S期细胞DNA合成率减少(P<0.05)。结论适宜的机械牵张力能促进PSCs增殖,过大的机械牵张力反而抑制细胞增殖。     

Hedgehog信号通路抑制剂HPI-4对软骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 检测Hedgehog (HH)信号通路在人软骨肉瘤中的表达情况,探讨HH信号通路抑制剂HPI-4对于软骨肉瘤细胞SW1353增殖和侵袭能力的影响.方法 应用免疫组化技术检测人软骨肉瘤标本中HH信号通路相关蛋白Ihh及增殖相关蛋白Ki67的表达情况,应用CCK-8实验、平板集落形成实验、Transwell肿瘤细胞侵袭实验及免疫印迹法(Western blot)检测HPI-4阻断HH信号通路后SW1353细胞增殖和侵袭能力的变化.结果 免疫组化结果证实Ihh蛋白及Ki67蛋白在人软骨肉瘤中存在明显表达.经不同浓度HPI-4干预后,CCK-8实验显示软骨肉瘤细胞SW1353的增殖活性随HPI-4浓度的增高而逐渐降低;平板集落形成实验显示单个肿瘤细胞不断克隆形成集落的能力受到抑制;Transwell实验证实肿瘤细胞侵袭能力随着HPI-4浓度的增高而递减;Western blot结果显示肿瘤细胞内增殖与侵袭相关蛋白的表达明显下降.结论 人软骨肉瘤中存在HH信号通路的明显激活,HH信号通路抑制剂HPI-4能够明显抑制软骨肉瘤细胞的增殖和侵袭能力.