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抗体工程与病理学 总被引:3,自引:0,他引:3
结合抗肝癌基因工程抗体的制备,概述了抗体工程的工作内容及其与病理学的关系,抗体工程的主要目的之一是制备人的或接近人的,而能在病人体内应用的抗体,一方面它可以来源于单克隆抗体的改造,首先克隆出鼠抗体可变区的轻链及重链成为小抗体或重组成单链抗体及人鼠嵌合抗体等基因工程抗体。另一方面,也可以用免疫过的小鼠脾细胞或者人的淋巴细胞建立鼠、人抗体库,然后抗原从抗体库中筛选出鼠或人的各种类型抗体。鉴于抗体对靶细胞一般只起导向作用,要携带效应分子才发挥杀伤肿瘤细胞的作用或其它作用。常用的“弹头”有毒素及细胞因子等。所以必须将这种基因与抗体基因融合在一起才能表达有作用的融合蛋白。抗体工程还包括抗体的增效或抗体的成熟,以及对照人抗体的结构进行置换,使抗体人源化等。 相似文献
2.
抗体是一种免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)。抗体工程指的是抗体的人工改造、构建与重组。如同桥梁工程、水力工程是人力对桥梁及水力的构建与改造一样。抗体工程可以分为两种,一种是抗体化学工程,如抗体的标记,抗体与亲合物质结合以及EnVision法等。一般所谓抗体工程是指抗体的基因工程,是通过基因操作、扩增、酶切、连接、构建以及重组来实现的。乍看起来,抗体工程与病理学,特别是诊断病理学,并不那么亲切。但是,实地考查起来,它们之间也不那么遥远,而且随科学的发展,正让它们越走越近。 相似文献
3.
目的:探讨乳腺癌组织中核呼吸因子-1(NRF-1)蛋白表达与乳腺癌发生、发展及临床病理特征的关系。方法:采用免疫组化EnVision二步法,对211例乳腺癌组织和50例乳腺良性病变组织中NRF-1蛋白表达进行检测。结果:NRF-1蛋白表达定位于细胞核,着色呈棕黄色,乳腺癌中阳性表达(82.7%)低于乳腺良性病变组织阳性表达(100%),χ2=100.288,P=0.000;高分化乳腺癌NRF-1阳性率明显高于中、低分化乳腺癌(χ2=16.242,P=0.001;χ2=72.802,P=0.000),中分化乳腺癌也明显高于低分化乳腺癌,χ2=30.190,P=0.000。乳腺癌淋巴结转移患者NRF-1蛋白阳性表达率明显低于未转移者,χ2=12.025,P=0.007;TNM分期中I期NRF-1蛋白阳性表达率明显高于Ⅱ、Ⅲ期,χ2=12.025,P=0.007。结论:NRF-1蛋白的表达可能与乳腺癌的发生发展密切相关,可作为乳腺癌患者疾病进展监控和预后观测的指标,具有临床应用价值。 相似文献
4.
探讨核呼吸因子-1(NRF-1)蛋白表达与乳腺癌发生发展、临床病理特征及Ki-67的关系。方法:采用免疫组化EnVision二步法,对211例乳腺癌组织、50例乳腺良性病变组织中NRF-1和Ki-67进行检测。结果:NRF-1表达定位于细胞核,在乳腺癌中表达率为87.2%,低于乳腺良性病变组织的100%(χ2=100.288,P<0.001);高分化乳腺癌NRF-1表达率明显高于中、低分化乳腺癌(χ2=16.242,P=0.001;χ2=72.802,P<0.001),中分化乳腺癌也明显高于低分化乳腺癌(χ2=30.190,P=0.000)。乳腺癌淋巴结转移患者NRF-1表达率明显低于未转移者(χ2=12.025,P=0.007);TNM分期中I期NRF-1表达率明显高于Ⅱ、Ⅲ期(χ2=12.025,P=0.007)。211例乳腺癌中Ki-67表达率为78.7%,Ki-67表达与NRF-1(χ2=42.914,P<0.001)、病理组织学分级(χ2=40.239,P<0.001)、淋巴结转移(χ2=16.061,P=0.001)和TNM分期(χ2=13.589,P=0.004)间比较差异有统计学意义。结论:NRF-1参与了乳腺癌的发生发展,也与Ki-67表达有相关性,可作为乳腺癌患者疾病进展监控和预后观测的指标,有可能成为乳腺癌新的治疗靶点。 相似文献
5.
目的:构建抗肝癌单链抗体融合CD3(真核表达载体。方法:应用PCR法将二硫键稳定的人源化的单链抗体scFv的基因克隆入真核细胞表达载体pcDNA3,在5′端及3′端分别引入相应酶切位点;用RT-PCR法从正常外周血人T细胞扩增出CD3ζ的胞内区、跨膜区基因,然后将其克隆于scFv的下游,并在5′端及3′端引入相应的酶切位点。以脂质体转染法将pcDNA3-scFv-CD3ζ转入T细胞,采用免疫细胞化学的方法,利用抗CD3(的单克隆抗体检测转染前后T细胞中CD3ζ的表达。结果:二硫键稳定的人源化抗肝癌的单链抗体ScFv的cDNA片段为735bp,与已知的序列相符;CD3ζ的胞内区、跨膜区的cDNA片段为294bp,与GeneBank公布的序列一致。重组的表达载体经酶切琼脂糖电泳及测序加以证实。转染前后T细胞中CD3ζ染色强度显著增强。结论:完成了二硫键稳定的人源化抗肝癌的单链抗体scFv及CD3ζ的胞内区、跨膜区融合基因真核表达载体pcDNA3-scFv-CD3ζ的构建,制备了肝癌靶向性T细胞。 相似文献
6.
目的:利用大肠杆菌系统表达重组RC蛳RNase融合蛋白,并对其表达产物进行初步纯化。方法:以PCR方法扩增出RC蛳RNase基因,插入到融合蛋白原核表达载体PET32a中,构建重组表达载体PET蛳RC蛳RNase,转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3)plyS,利用异丙基硫代蛳β蛳D蛳半乳糖苷(IPTG)诱导表达。工程菌经超声碎菌,离心后,采用Ni亲合层析法在变性条件下进行初步纯化。结果:经IPTG诱导后,SDS蛳PAGE和免疫印迹分析显示,工程菌在相对分子质量为3.1×104处出现一条新生蛋白带,目的蛋白占菌体总蛋白的34%,主要以包涵体形式存在。所得包涵体经纯化,纯度可达90%以上。结论:重组融合蛋白RC蛳RNase在大肠杆菌中获得成功表达,纯化效果令人满意,为进一步研究其生物学特性和功能奠定了良好的基础。 相似文献
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目的:探讨重组免疫毒素hdsFv-hEDN在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化,观察其体外杀伤作用。方法:利用IPTG诱导hdsFv-hEDN免疫毒素在大肠杆菌中的表达。诱导转化菌经超声碎菌、离心、Ni-NTA Agarose亲合层析等步骤纯化,并通过SDS-PAGE和Western-blot进行分析及检测。采用MTT比色法观察其对人肝癌细胞的杀伤作用。结果:IPTG诱导后.hdsFv-hEDN在大肠杆菌中获得了可溶性表达,表达量为8%。表达产物纯化后,纯度达到基本均一。MTT结果表明,其对人肝癌细胞具有一定的杀伤作用。结论:本研究实现了hdsFv-hEDN重组免疫毒素在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化,获得了具有一定杀伤作用的抗肝癌重组免疫毒素。 相似文献
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目的:观察抗肝癌重组单链免疫毒素hdsFv-RC-RNase对荷人肝癌裸鼠移植瘤的导向治疗作用,并探讨其临床应用价值。方法:将原核表达载体TIG-hdsFv-RC-RNase转化E.coli BL21(DE3)plys中,利用IPTG大量诱导表达抗肝癌hdsFv-RC-RNase重组单链免疫毒素。表达产物在非变性条件下经Ni-NTA Agarose亲合层析法纯化并体外复性,利用细胞ELISA法检测其特异性结合体外培养的人肝癌细胞的免疫活性。建立荷人肝癌裸鼠移植瘤动物模型,初步评估其对荷人肝癌裸鼠移植瘤的导向治疗作用。结果:工程菌经IPTG诱导后,出现一条相对分子质量约为41000的新生蛋白带,且主要以可溶性形式表达。纯化后表达产物的纯度达到基本均一。细胞ELISA检测结果显示,纯化产物复性后能够与体外培养的人肝癌细胞特异性结合,而对正常肝细胞的结合能力非常弱,两者具有非常显著的差异(P〈0.01)。导向治疗结果表明,其对荷人肝癌裸鼠移植瘤治疗有效率为100%,与生理盐水组相比具有非常显著的差异(P〈0.01),抑瘤率达到79.38%。结论:成功获得了特异性强的有活性的抗肝癌重组单链免疫毒素hdsFv-RC-RNase,其对荷人肝癌裸鼠移植瘤具有一定的导向治疗作用,可能成为抗肝癌导向治疗药物。 相似文献
10.
结直肠癌(CRC)的发生、发展伴随着许多基因的表达变化,但其具体调控机制至今仍未完全阐明。近年来对CRC表观遗传学尤其是微小RNA(miRNA)、异常DNA甲基化及组蛋白修饰状态等方面的研究受到广泛关注。研究证实,CRC进展过程中均存在异常的甲基化基因和miRNA的表达变化。与癌症基因组的基因突变一样,这类遗传学的分子改变在CRC中扮演着重要角色。表观遗传学的特异性改变可作为CRC诊断、治疗和预后的临床生物学标记物,对表观遗传学进行深入研究对CRC的防治具有重要指导意义。 相似文献