改变细胞膜脂肪酸组成防治大肠癌的基因治疗研究*

目的:利用脂肪酸去饱和酶基因fat- 1 改变细胞膜脂肪酸组成,进行大肠癌的基因治疗研究。方法:将fat- 1 基因插入腺病毒载体中,与骨架载体同源重组,构建腺病毒重组载体（Ad-GFP-fat1）,通过包装细胞系（293）产生的腺病毒,感染人大肠癌株HT- 29细胞。提取细胞的总RNA,以fat- 1 基因的反义mRNA 作探针,用Northern Blot检测fat- 1 基因在HT- 29细胞内的表达。以流式细胞仪对HT- 29细胞G0/G1 期、S 期、G2/M期所占比例进行检测,分析fat- 1 基因对HT- 29细胞增殖和凋亡的影响。以气相色谱分析仪分析fat- 1 基因对HT- 29细胞细胞膜n-6 PUFAs 和n-3 PUFAs 含量及n-6/n- 3PUFAs 比例的影响。将HT- 29细胞皮下接种于裸鼠右前肢腋下,建立裸鼠HT- 29大肠癌细胞皮下移植瘤模型。成瘤后进行治疗实验,经连续5 次治疗,于最后一次治疗后第3 天处死小鼠,取肿瘤称重。分析fat- 1 基因裸鼠体内抗肿瘤效果。结果:通过基因重组技术,得到高滴度的含fat- 1 基因的重组病毒;腺病毒介导的fat- 1 基因能够在HT- 29细胞中有效表达;fat- 1 基因的表达可降低HT- 29细胞膜n-6/n- 3PUFAs 的比例,有效抑制HT- 29细胞增殖,促进细胞凋亡并能抑制裸鼠移植瘤的发展。结论:fat- 1 基因的表达,可抑制HT- 29细胞的体内外增殖并诱导细胞凋亡,在大肠癌基因治疗中可能具有良好利用价值。      

n-3多不饱和脂肪酸对人结肠癌细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨n-3多不饱和脂肪酸（n-3PUFA）对人结肠癌细胞HT．29的作用及其机制。方法应用MTT比色法、细胞的形态学观察（Hochest33258染色）、DNA凝胶电泳、流式细胞技术检测二十二碳六烯酸（DHA）对HT．29增殖和凋亡的影响：气相色谱分析的方法检测DHA对HT-29细胞n-3PUFA和n．6PUFA含量及n-6／n-3PUFA比例的影响。结果DHA在体外对HT．29有明显的增殖抑制作用,10、20、40和80mg儿DHA作用24h时的细胞增殖抑制率分别为16．8％、24．7％、50．0％和60．1％。40mg／LDHA作用24、48和72h的细胞增殖抑制率分别为50．0％、69．9％和77．0％：呈现明显的剂量和时间效应关系。荧光染色可观察到细胞核染色质浓集,核浓缩核碎裂．并出现典型的凋亡小体：DNA凝胶电泳呈现特征性的梯形条带（DNALadder）：流式细胞仪检测显示经DHA处理后HT-29DNA合成前期（G,期）细胞比例较对照组增加（72．1％比51．3％）,DNA合成期（S期）细胞比例明显减少（19．9％比38．9％）,细胞呈现明显的G,期阻滞;气相色谱分析显示．DHA可以降低HT-29细胞内n-6PUFA而提高n-3PUFA含量,降低n-6／n-3PUFA比率。结论n-3PUFA通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡来阻遏结肠癌细胞的生长．这种作用的机制可能为降低了细胞的n-6／n-3PUFA的比例。