用聚合酶链反应检测人巨细胞病毒DNA的失败原因

聚合酶链反应(PCR)是一种新的基因扩增技术,应用日趋广泛,但影响因素较多。我们在用 PCR 检测人巨细胞病毒(HCMV)DNA 时发现,紫外吸收法进行引物定量,不一定能测出样品中寡核苷酸的实际含量,引物寡核苷酸定量不准,是 PCR 不成功的重要原因。材料与方法(一)PCR 模板 HCMV AD 169株,引自解放军第302医院病毒室。病毒经人胚肺纤维母细胞培养增殖,冰融3次,直接或     

柯萨奇B组病毒感染的ELISA检测

为了对柯萨奇B(CoxB)组病毒感染进行病原诊断,我们用细胞培养的病毒抗原建立了检测该组病毒(1～6型)抗体的ELISA 法.两年多临床试用表明,该法快速、简便、特异与稳定.现报告如下.     

亲环素A抗原表位氨基酸序列及三维结构研究

目的：研究人抗亲环素A（CyPA)McAb D4识别的抗原表位的氨基酸组成及其在蛋白分子上的三维定位。方法：以抗人亲环素A McAb D4作捕获抗体,对噬菌体展示肽库进行淘筛,并对筛选出的噬菌体中插入片段进行DNA序列测定和氨基到序列分析,再用RasMol蛋白质三维结构分析软件在亲环素A分子的三维结构中查找相应的抗原表位。结果：经过三轮淘筛和扩增,选择7个克隆进行序列,提示该抗原表位是构象性的。用RasMol蛋白质三维结构分析软件在亲环素A分子的三维结构中,找到由W121、S99、L98、Q111、S110、F112、L122构成的疏水代状结构,可能就是McAb D4的抗原表位。结论：人亲环素A分子上W121、S99、L98、Q111、S110、F112、L122构成一个构象型抗原表位。     

亲环素A与HIV－1的感染性

亲环素A（CyPA）是免疫抑制药物环孢素A的受体,是胞质内一种具有肽基－脯氨酸顺／反异构酶活性的蛋白质。CyPA在HIV－1的生命周期中能掺入病毒颗粒,其掺入为HIV－1的感染性所必需。本文简要综述CyPA在HIV－1复制中的作用,以及这方面的研究对抗HIV－1治疗的意义。     

45例SLE患者抗CyP与ENA多肽抗体谱测定结果分析

0　引　　言系统性红斑狼疮 ( SLE)是一种全身性的自身免疫病 ,其血清学异常常表现为产生一系列特异的自身抗体 ,如抗 Sm、抗 ds- DNA、抗 U1- RNP等 ,其中可提取的核抗原 ( ENA)多肽抗体谱的出现在 SLE的发病机制中具有重要作用。近年来 ,国外有学者发现 SLE患者存在有较高水平的亲环素 ( Cy P)自身抗体 ,并与疾病的活动性密切相关 [1]。为探讨 Cy P自身抗体与 ENA多肽抗体间的关系 ,作者以 SLE患者为研究对象 ,对二者进行了测定和比较 ,现报告如下。1　材料与方法1 .1　主要试剂　重组人 Cy PA( rh Cy PA)抗原、辣根过氧化…     

人穿孔素cDNA的克隆与序列分析

引言穿孔素（ｐｅｒｆｏｒｉｎ）又称成孔蛋白（ｐｏｒｅｆｏｒｍｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ,ＰＦＰ）,是一种主要由激活的细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）和自然杀伤（ＮＫ）细胞所产生的溶细胞蛋白,贮存于细胞的杀伤颗粒中,在细胞介导的杀伤过程中起非常关键的作用［１］。...     

LDH释放法检测肿瘤患者PBMC和CIK细胞的细胞毒活性

目的建立检测细胞毒活性的乳酸脱氢酶（LDH）测定法，了解肿瘤患者外周血单个核细胞（PBMC）和细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）的抗肿瘤活性，为肿瘤的免疫细胞治疗提供参考。方法采集肿瘤患者和健康成人外周血，常规分离PBMC，体外进行CIK的培养，用LDH释放法分别检测PBMC和CIK对肿瘤细胞K562的细胞毒活性。结果肿瘤患者PBMC对K562的杀伤活力比正常人显著降低（P〈0．05）。经多种细胞因子诱导培养7～10d后，健康人和肿瘤患者的CIK对K562的杀伤活力都有显著提高（P〈0．01），肿瘤患者CIK杀伤活力接近于健康人。结论肿瘤患者PBMC细胞毒活性显著降低，但经诱导培养成CIK后则显著提高。用LDH释放法检测肿瘤病人CIK细胞毒活力，有助于CIK疗法适应病人的选择及个体疗效观察。     

假丝酵母菌属感染评分预测外科ICU患者侵袭性真菌感染

目的采用假丝酵母菌属评分(CS)以预测普通外科ICU患者侵袭性假丝酵母菌病(IC),弥补血培养方法的不足。方法采集2011年6月-2013年5月普通外科ICU 307例患者资料及微生物检验结果,结合临床诊疗实际,参考国外假丝酵母菌属感染评分标准(CS=2×脓毒症+1×外科手术+1×全肠外营养+1×假丝酵母菌属定植),以CS=3作为预测假丝酵母菌属感染的临界值,并将评分结果与真菌培养结果进行比较分析。结果 307例ICU患者中,CS≥3者145例占47.2%;确诊IC感染患者34例,感染率为11.1%;CS≥3的确诊感染IC患者33例,占总体确诊感染IC患者总数的97.1%。结论假丝酵母菌属评分方法早期预测ICU患者侵袭性假丝酵母菌病具有一定的价值,对临床预防性应用抗真菌药物有一定的指导意义。     

精子蛋白17抗体免疫磁性颗粒活性分析及细胞成像研究

目的:制备精子蛋白17(Sp17)抗体免疫磁性纳米颗粒, 以期用于卵巢癌的磁共振成像靶向诊断.方法:在偶联剂EDC/NHS作用下, 将壳聚糖修饰磁性氧化铁纳米颗粒与抗人Sp17抗体结合, 制备抗Sp17抗体免疫磁性纳米颗粒(IMNPs).透射电镜观察颗粒的形貌特征, 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳评价抗体与磁性颗粒的结合效果, ELISA检测免疫磁性颗粒的免疫活性.将IMNPs与转染人Sp17的卵巢癌HO-8910细胞共孵育, 进行体外磁共振成像检测.结果:成功实现了抗体与磁性纳米颗粒的偶联, 并且IMNPs保持良好的抗体活性.磁共振显示该颗粒成功靶向Sp17阳性的细胞, 没有发生明显的非特异吸附.结论:该免疫磁性纳米颗粒特异性良好, 可进一步用作卵巢癌的靶向治疗研究.     

凋亡相关基因突变与人类疾病

细胞凋亡 (又称细胞程序性死亡 )过程由多种不同基因产物的协同作用来完成。其中某些凋亡基因的突变 ,已被认定为人类疾病的病因或相关因素。作者综述了当前对凋亡基因突变所致人类疾病的认识 ,以及将凋亡的基础研究成果应用到临床疾病诊治的情况