Tet-on基因表达系统调控HIF-1α表达对肝癌细胞凋亡的影响

目的探讨HIF-1α表达在体外对肝癌细胞凋亡的影响。方法利用Tet—on基因表达系统调控HePG2细胞HIF-1α的表达，观察细胞凋亡。结果酶切和DNA测序证实Tet—on基因表达系统反应质粒P^tre-hif-1α构建成功。获得了受强力霉素调控、稳定表达HIF-1α的肝癌细胞。经阿霉素诱导凋亡后，强力霉素终浓度为0μg／ml、0．02μg／ml、0．2μg／ml、1μg／ml、2μg／ml、5μg／ml时的细胞凋亡率分别为59．6％、50．9％、38．1％、30．5％、23．9％、18．3％；强力霉素0．02μg／ml、0．2μg／ml、1μg／ml、2μg／ml、5μg／ml处理细胞后，Casepase-3活性分别降低了2．3、5．5、8．7、12．6、18．8倍。RT—PCR检测结果显示，随着强力霉素浓度的增加，HIF-1α表达水平增加，Survivin和Bcl-2基因表达强度逐渐增加，差异有统计学意义（P〈0．001）。结论HIF-1α基因在体外可以抑制肝癌细胞凋亡，而且随着HIF-1α表达水平的增加，对肝癌细胞的凋亡抑制作用进一步加强，可能与HIF-1α诱导survivin和Bcl-2的表达及抑制casepase-3的活性有关。     

入肝血流联合肝下下腔静脉阻断在腹腔镜肝切除术中的应用

目的评价入肝血流联合肝下下腔静脉阻断在腹腔镜肝切除中的安全性及疗效。方法回顾性分析2015年1月至2015年12月由同一医疗组开展的腹腔镜下肝切除51例,其中入肝血流联合肝下下腔静脉阻断(联合阻断组)32例,入肝血流阻断(Pringle组)19例。记录术中阻断时间、出血量、血流动力学改变、术后肝功能、肾功能变化,及并发症的发生率。结果联合阻断组入肝血流平均阻断时间17 min,肝下下腔静脉阻断时间12 min。Pringle组平均阻断时间23 min。联合阻断组术中出血量平均(370.1±107.9)ml,1例病人输血,显著低于Pringle组(560.3±191.3)ml,术中输血3例。联合阻断组无手术中转开腹,Pringle组中转开腹1例。阻断肝下下腔静脉,病人平均动脉压由阻断前的(92.3±4.7)mmHg下降至(71.3±4.6)mmHg,心率则由阻断前的(73.9±6.9)次/min增快至(93.5±10.7)次/min。松开阻断带后,在无明显出血情况下,平均动脉压和心率可自行恢复至阻断前水平。两组肝功能和肾功能恢复无明显差异,总体并发症无明显差异。结论腹腔镜下入肝血流联合肝下下腔静脉阻断安全有效,并能减少术中出血量及中转率。     

中西医结合治疗肝硬化腹水56例疗效探讨

目的:探讨中西药联合治疗肝硬化腹水的临床疗效.方法:用中西医结合治疗肝硬化腹水56例.结果:总有效率为89.3%.结论:中医采用疏肝解郁,活血软坚,滋养肝肾,利水消肿之法配合西药治疗肝硬化腹水疗效满意.     

Hes1在肝细胞癌中的表达及意义

目的：检测Hes1基因在人肝细胞癌、癌旁、肝硬化和正常肝组织中的表达情况,分析其与乙肝病毒（HBV）的关系和临床意义,探讨Hes1通路在HBV致癌过程中发挥的作用。方法通过免疫组化技术检测60例人肝细胞癌标本（癌、癌旁组织）,20例肝硬化组织和20例正常肝组织标本中Hes1蛋白的表达情况;同时利用蛋白质印迹技术（Western-Blot）技术对组化结果进行验证（分别检测10例标本）。比较Hes1在四种组织中的表达差异,分析其与HBV的相关性和与分化程度的关系。结果免疫组化显示,Hes1蛋白在肝癌组织中呈强阳性表达,癌旁和肝硬化组织中呈中度阳性表达,而正常肝组织中呈阴性表达;Hes1在肝癌、癌旁、肝硬化和正常肝组织中的阳性率分别为65．12％、40．23％、32．23％和15．00％,差异有统计学意义（P＜0．05）。Hes1在癌旁和肝硬化组织中表达无差别（P＞0．05）。在HBsAg阳性和HBsAg阴性肝组织中,前者的阳性率显著高于后者（P＜0．05）,Hes1的表达与HBV呈显著正相关（r＝0．787,P＝0．001）。低分化肝细胞癌中Hes1的表达明显强于高分化肝细胞癌（P＜0．05）。结论 Hes1在肝癌组织中表达升高与肝癌的发生发展有关,Hes1在HBV相关性肝癌的发病机制中可能起重要作用,Hes1高表达可能意味着预后较差。     

乙肝病毒X 蛋白对正常肝细胞生物钟基因表达的影响

目的：探讨乙肝病毒X蛋白（HBx）对人正常肝细胞中生物钟基因表达的影响。 方法：分别将HBx表达质粒（pcDNA3.1-HBx）与空载体质粒（pcDNA3.1）转染入人正常肝细胞系L02后,用RT-PCR与Western blot法检测细胞HBx mRNA与蛋白的表达;real-time PCR检测细胞中生物钟基因CLOCK、BMAL1、Per1、Per2、Per3、Cry1、Cry2、CKIε的表达。 结果：RT-PCR与Western blot结果显示,L02细胞转染HBx表达质粒后有明显的HBx mRNA与蛋白表达,而转染空载体质粒的L02细胞无HBx mRNA与蛋白表达。与转染空载体质粒的L02细胞比较,转染HBx表达质粒的L02细胞CLOCK与Cry1的mRNA表达明显升高,而BMAL1、Per1、Per2、Per3、Cry2、CKIε的mRNA表达明显降低,差异均有统计学意义（均P<0.05）。 结论：HBx能使正常肝细胞中的生物钟基因表达发生改变,破坏肝细胞正常的生物节律,这可能为其导致肝癌形成的机制之一。     

乙型肝炎病毒X基因诱导卵圆细胞恶性转化的研究

目的 研究乙型肝炎病毒X(HBx)基因对卵圆细胞转化和分化的影响.方法 用稳定表达HBx的转基因即圆细胞株pEGFP-HBx卵圆细胞作为实验组,pEGFP卵圆细胞及LE/6卵圆细胞作为对照组,运用倒置相差显微镜和透射电镜、流式细胞术、糖原染色、软琼脂生长、实时定量PCR、细胞免疫化学技术观察和检测pEGFP-HBx卵圆细胞在细胞形态、细胞周期、分化标志物、癌基因c-myc及TGF-α的变化.结果 (1)与对照组相比,pEGFP-HBx卵圆细胞体积增大,核具有明显异型性;(2)流式细胞仪检测显示,与对照组相比,pEGFP-HBx卵圆细胞G0/G1期细胞百分比下降,S期和G2/M期细胞百分比明显升高,而且非整倍体细胞明显增多;(3)糖原染色显示,pEGFP-HBx卵圆细胞胞质内可见大量糖原颗粒;(4)软琼脂中可见pEGFP-HBx卵圆细胞克隆形成;(5)癌基因c-myc及TGF-α表达量明显增高,卵圆细胞分化指标HNF-4α、AFP表达上升,CK-7、CK-19表达下降,未见有cps1 mRNA表达.结论 HBx基因可以引起卵圆细胞异常分化,并直接诱导卵圆细胞发生恶性转化.     

中西医结合治疗肝硬化腹水56例疗效探讨

目的：探讨中西药联合治疗肝硬化腹水的临床疗效。方法：用中西医结合治疗肝硬化腹水56例。结果：总有效率为89．3％。结论：中医采用疏肝解郁，活血软坚，滋养肝肾，利水消肿之法配合西药治疗肝硬化腹水疗效满意。     

HBx基因大鼠卵圆细胞株的建立及鉴定

目的 构建带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的真核表达质粒pEGF-HBx,建市稳定、高效表达乙型肝炎病毒x基因(HBx)的大鼠卵圆细胞株,以便进一步研究HBx基因和卵圆细胞在肝癌发牛过程中的作用和机制.方法 用PCR方法从质粒pcDNA3.1-HBx中扩增含Kpn Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点的HBx基因序列.对增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP-NI)及扩增的HBx目的 基因片段进行双酶切,纯化后用连接酶连接得到重组体pEGFP-HBx,将其转化大肠杆菌DHSα,抗生素筛选培养得到阳性克降,提取质粒后用双酶切和基因测序进行鉴定.通过脂质体介导将质粒pEGFP-HBx转染到大鼠卵圆细胞株(LE/6)中,经G418筛选,尤限传代后得到稳定表达EGFP-HBx融合蛋白的细胞株.分别采用RT-PCR和免疫细胞化学技术检测细胞株中HBx基凶的表达情况.结果 双酶切及基因测序结果均显示构建的pEGFP-HBx质粒中含有完整的HBx基因片段.将得到的抗性细胞株培养传代20次后仍表达强的荧光;RT-PCR及免疫细胞化学检测均发现HBx基因在抗性细胞(LE/6)中得到了稳定转录和翻译.结论 已成功构建带HBx基因的真核表达质粒pEGFP-HBx,获得了稳定、高效表达EGFP-HBx融合蛋白的大鼠卵圆细胞株,为进一步研究HBx基凶和卵圆细胞在肝癌发生过程中的作用和机制奠定了实验基础.     

肝移植治疗原发性肝癌的现状

原发性肝癌(PLC)是最常见的恶性肿瘤之一，每年新增病例在100万人以上。中国是乙型肝炎、肝硬化及原发性肝癌的高发区。肝癌是肝硬化患者的主要死因之一。随着新的医疗技术的发展，治疗肝癌的方法逐渐改变，肝移植的出现改变了传统治疗肝癌的方法。因为各种因素，肝癌手术切除的效果受到限制。肝癌手术切除术后5年生存率平均40％，但肝癌人群5年生存率仅为5％，     

ICG-R15、iMELD及CLD评分在预测肝细胞癌术后肝功能不全程度中的作用及相关性研究

目的 以术后肝功能不全程度为标准来研究术前吲哚氰绿15 min内滞留率（indocyanine green retention rate at 15 minute,ICG-R15）、综合的终末期肝病模型评分（the integrated model for end-stage liver disease scores,iMELD）和慢性肝功能不全评分（chronic liver dysfunction scores, CLD）三者之间的相关性.方法 回顾性分析61例行手术切除的原发性肝细胞肝癌患者的临床资料,根据肝功能不全程度分为轻、中、重三组,利用脉冲式色素浓度分析法（pulse dyedensitonmetry,PDD）行吲哚氰绿（indocyanine green,ICG）排泄试验,同时计算患者的iMELD及CLD评分.结果 随着术后肝功能不全程度的递增,ICG-R15及CLD评分逐渐升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）;ICG-R15与CLD评分相关性明显强于ICG-R15与iMELD评分的相关性（r=0.65,r=0.49）.结论 ICG-R15与CLD评分正向相关性明显强于iMELD评分.