甘露糖敏感型绿脓杆菌制剂对肝癌细胞周期的作用机制研究

目的 探讨甘露糖敏感性绿脓杆菌制剂(pseudomonasaeruginosa mannose sensitive haemagglutination vaccine,PA-MSHA)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞周期的作用及其机制.方法 培养人肝癌细胞株MHCC97L及HepG2,以不同剂量的PA-MSHA作用于肝癌细胞.MTT实验检测PA-MSHA对细胞增殖的影响.流式细胞技术检测PA-MSHA对细胞周期的作用.Western blot检测PA-MSHA作用前后细胞周期蛋白Cyclin D1、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)以及细胞周期蛋白激酶抑制剂p21和p27的表达情况.结果 与对照组相比,PA-MSHA显著抑制MHCC97L和HepG2细胞的增殖,其作用呈剂量及时间依赖性(P＜0.05).PA-MSHA显著诱导肝癌细胞周期阻滞,PA-MSHA作用后G0-G1期和G2-M期细胞比例显著增高,而S期细胞比例则显著下降(P＜0.05).PA-MSHA显著抑制Cyclin D1、CDK2、PCNA蛋白的表达,而促进p21和p27的表达.外源性甘露糖可显著抑制PA-MSHA对肝癌细胞增殖和周期的作用(P＜0.05).结论 PA-MSHA通过调控细胞周期相关蛋白来诱导HCC细胞周期阻滞,抑制细胞增殖.这一作用是通过肝癌细胞表面的甘露糖的介导实现的.     

跨膜丝氨酸蛋白酶4对肝细胞癌增殖侵袭作用的影响

目的 探讨跨膜丝氨酸蛋白酶4 (transmembrane protease serine 4,TMPRSS4)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)增殖侵袭的作用.方法 构建并鉴定慢病毒转染TMPRSS4过表达的人肝细胞癌细胞系BEL-7402.Western blot及RT-PCR检测TMPRSS4的表达.MTT实验检测TMPRSS4对BEL-7402细胞增殖能力的影响.Transwell实验检测TMPRSS4对细胞侵袭性的影响.结果 RT-PCR及Western blot结果显示TMPRSS4过表达组细胞TMPRSS4蛋白及mRNA表达均显著高于对照组及空白载体转染组.MTT实验结果显示,慢病毒转染后,对照组、空白载体转染组和TMPRSS4过表达组细胞增殖能力无显著差异(P＞0.05).侵袭实验显示TMPRSS4过表达组细胞穿过Matrigel胶到达Transwell小室膜背面的细胞数为49.3±7.4,显著高于对照组(23.3±5.0)和空白载体转染组(19.3±3.2)(P＜0.05).结论 HCC细胞表达TMPRSS4.TMPRSS4过表达可促进HCC细胞的侵袭能力,但是不影响HCC细胞增殖.     

IFN-α诱导的信号传导通路的研究进展

IFN-α与受体结合后,可活化多条细胞信号传导通路来调控病毒复制、细胞增殖和免疫功能。众多研究表明,IFN-α主要通过JAK-STATs通路来发挥其生物学作用,但JAK-STATs通路并不能完全解释IFN-α的生物学功能。近年来,IFN-α激活的多条非JAK-STATs通路陆续被发现。这些通路有各自的信号途径,相互协同而又相互牵制,共同构成了一个复杂的IFN-α信号传导网络。     

小剂量阿司匹林协同干扰素-α诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡的实验研究

目的 探讨小剂量阿司匹林协同干扰素-α(IFN-α)诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡的作用及机制.方法 体外培养的人肝癌BEL-7402细胞经IFN-α单独或联合小剂量阿司匹林处理后,采用MTT法测定细胞的增殖情况;流式细胞术分析不同组药物对BEL-7402细胞凋亡的影响,Western blot检测BEL-7402细胞凋亡相关蛋白表达的变化.结果 MTT法检测显示,与对照组相比,作用48 h时IFN-α组和阿司匹林组的肝癌细胞增殖率分别为82.45％±1.71％和83.22％±2.26％,联合用药组为69.84％±1.18％,联合用药组细胞增殖抑制率明显低于单独用药组(P＜0.05);流式细胞术检测结果显示,IFN-α组和阿司匹林组细胞凋亡率分别为14.78％±1.93％和14.00％±0.61％,联合用药组为21.68％±1.28％,明显高于单独用药组(P＜0.05).Western blot检测发现IFN-α及小剂量阿司匹林可促进caspase-3及caspase-9的表达,而二者联合应用时caspase-3及caspase-9亦被明显激活.进一步检测显示,IFN-α单独或联合阿司匹林可促进肝癌细胞促凋亡蛋白Bax的表达(P＜0.05),而抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xl表达未见明显变化(P＞0.05).结论 小剂量阿司匹林可协同IFN-α抑制BEL-7402细胞的增殖,通过激活caspase-3及caspase-9诱导肿瘤细胞凋亡,该作用可能与促凋亡蛋白Bax表达的增高有关.