天然化合物ACA的生物活性研究进展

乙酰氧基胡椒酚乙酸酯（ACA）是一种从高良姜中提取的小分子天然化合物，具有抗肿瘤、杀菌、保护胃粘膜和抗艾滋病等生物学功能。大量的体内体外实验表明，ACA的抗肿瘤活性是广谱的，并且没有明显的副作用。ACA分子水平的可能作用方式在NF—kB信号途径的研究中得到了大致的确定。ACA在未来的临床和基础研究中将成为一种重要药物。     

缺氧诱导因子-1α对低氧状态下前列腺癌PC-3细胞株增殖及侵袭的影响

目的 研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对低氧状态下前列腺癌PC-3细胞株增殖及侵袭的影响。 方法 利用转染试剂Fermentas将人HIF-1α重组表达质粒pcDNA3.1-HIF-1α转染PC-3细胞株后,低氧环境培养,采用G418筛选,建立稳定表达HIF-1α基因的细胞株,分别命名为pcD-NA3.1-HIF-1 α-PC-3、pcDNA3.1-PC-3及PC-3组。采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测3组细胞HIF-1α mRNA和蛋白的表达情况;噻唑盐法测定细胞生长;transwell小室检测侵袭能力。 结果 与pcDNA3.1-PC-3组和PC-3组相比,pcDNA3.1-HIF-1 α-PC-3组细胞内HIF-1α mRNA条带增强不明显,pcDNA3.1-HIF-1α-PC-3组细胞内HIF-1α蛋白的条带明显增强,HIF-1α过表达的PC-3细胞增殖速度明显增快,侵袭细胞数明显增多。 结论 HIF-1α过表达对PC-3细胞株的增殖及侵袭具有促进作用。     

针对前列腺癌HIF-1α的2种pSUPER RNAi系统的构建及鉴定

目的 构建2种抑制HIF-1α的siRNA表达载体.方法 根据Gen Bank中HIF-1α序列信息并结合2种pSUPER载体的共同的酶切位点结构.化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向HIF-1α基因的寡核苷酸链,各60个碱基、退火、克隆到经Bgl Ⅰ、Hind Ⅲ双酶切的2种pSUPER载体上,获得的2种重组RNAi质粒转化感受态大肠杆菌.挑选阳性克隆,抽取重组质粒,EcoR Ⅰ、HindⅢ双酶切电泳、测序鉴定,培养前列腺癌PC-3细胞通过Western blot检测2种重组BNAi载体干扰效果.结果 将重组构建的2种pSUPER质粒经双酶切电泳分析及插入基因片段进行序列分析,目的 基因片段成功插人到设计位点,并且序列完全一致.2种重组质粒可显著降低前列腺癌PC-3细胞蛋白的表达.结论 2种重组RNAi载体的成功构建,为进一步研究HIF-1α在前列腺癌发病机理及增殖、转移中的功能奠定了基础,同时可以用于其在其他肿瘤的功能研究.     

β-catenin拮抗因子Chibby在鼻咽癌中的表达及意义

目的研究β-catenin拮抗因子Chibby在鼻咽癌组织中的表达情况,并探讨其与鼻咽癌临床病理因素的相关性。方法分别采用Real time PCR及免疫组织化学(SABC法)检测45例鼻咽癌及癌旁正常鼻咽黏膜组织中Chibby mRNA及蛋白的表达情况,统计Chibby的表达与鼻咽癌患者临床病理因素的关系。结果 Chibby mRNA在癌旁正常鼻咽黏膜及鼻咽癌组织中平均相对表达量分别为0.0835±0.0056和0.0776±0.0059,Chibby蛋白在癌旁正常鼻咽黏膜及鼻咽癌组织中的阳性表达率分别为91.1%(41/45)和42.2%(19/45)。鼻咽癌组织中Chibby的表达与T分期及临床分期有相关性,与性别、年龄、颈淋巴结转移及病理分型无明显相关性。结论与癌旁正常鼻咽黏膜组织相比,鼻咽癌组织中Chibby mRNA及蛋白的表达均降低,Chibby的表达与肿瘤T分期及临床分期相关,与性别、年龄、颈淋巴结转移及病理分型无明显相关性,Chibby可能参与了鼻咽癌的发生过程,有望成为鼻咽癌基因治疗新的作用靶点。     

针对前列腺癌HIF—1α的2种pSUPER RNAi焦统的构建及鉴定

目的构建2种抑制HIF—1α的siRNA表达载体。方法根据GenBank中HIF—1α序列信息并结合2种pSUPER载体的共同的酶切位点结构,化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向HIF-1α基因的寡核苷酸链,各60个碱基、退火、克隆到经BglⅠ、HindⅢ双酶切的2种pSUPER载体上,获得的2种重组RNAi质粒转化感受态大肠杆菌,挑选阳性克隆,抽取重组质粒,EcoRⅠ、HindⅢ双酶切电泳、测序鉴定,培养前列腺癌PC-3细胞通过Western blot检测2种重组RNAi载体干扰效果。结果将重组构建的2种pSUPER质粒经双酶切电泳分析及插入基因片段进行序列分析,目的基因片段成功插入到设计位点,并且序列完全一致。2种重组质粒可显著降低前列腺癌PC-3细胞蛋白的表达。结论2种重组RNAi载体的成功构建,为进一步研究HIF—1α在前列腺癌发病机理及增殖、转移中的功能奠定了基础,同时可以用于其在其他肿瘤的功能研究。     

pcDNA3.1-HIF-1α重组质粒的构建及其初步鉴定

目的 探讨HIF-1 α与前列腺癌发病机制之间相关性提供研究工具.方法 采用Trizol法裂解细胞,提取HIF-1 α且以该RNA为模板逆转录为cDNA,然后行PCB处理扩增HIF-1 α基因功能片段区域,克隆至真核表达载体pcDNA3.1上,转化至大肠杆菌DH-5 α,小提质粒,酶切凝胶电泳鉴定,序列测定,经鉴定为正确序列后中抽质粒,采用Fugene试剂转染至前列腺癌细胞PC-3,经G418筛选,建立稳定表达HIF-1 α的前列腺癌细胞系pcDNA3-1-HIF-1 α-PC-3,采用Western印迹鉴定重组质粒的表达.结果 PCR扩增基因片段大小为2.89 kb,克隆至真核载体pcDNA3.1,酶切凝胶电泳可见两个条带,大小大约为5.3 kb和2.89 kb,与预期的大小相符合,序列测定与Cenbank公布的一致,Western印迹验证其在细胞内能表达.结论 重组质粒pcDNA3.1-HIF-1 α能够在前列腺癌PC-3表达,构建成功,为研究HW-1α与前列腺癌提供了一个工具.     

天然化合物ACA的生物活性研究进展

乙酰氧基胡椒酚乙酸酯（ACA）是一种从高良姜中提取的小分子天然化合物，具有抗肿瘤、杀菌、保护胃粘膜和抗艾滋病等生物学功能。大量的体内体外实验表明，ACA的抗肿瘤活性是广谱的，并且没有明显的副作用。ACA分子水平的可能作用方式在NF-κB信号途径的研究中得到了大致的确定。ACA在未来的临床和基础研究中将成为一种重要药物。