恶性疟原虫113肽抗原基因重组的减毒鼠伤寒沙门菌在家兔中免疫应答的研究

我们已经在减毒鼠伤寒沙门菌ＳＬ３２６１以融合蛋白的形式表达了人工合成的恶性疟原虫杂合１１３肽基因ＡＢ（ＧＺ－ＡＢ）。活菌以２×１０９ＣＦＵ经口服免疫新西兰家兔，用ＥＬＩＳＡ测定抗体水平，结果于首次免疫或加强免疫后都可检测到一定水平的特异性抗体。所免疫的家免可以诱发针对恶性疟原虫抗原及ＧＺ－ＡＢ的迟发性超敏反应（ＤＴＨ）。我们的研究表明，含有多个恶性疟原虫抗原表位的人工合成基因可以在减毒鼠伤寒沙门菌中表达，活菌可诱发家兔产生特异的体液免疫及细胞免疫，为恶性疟口服活菌苗的制备打下基础。     

用斑点酶联免疫吸附试验筛选抗恶性疟原虫单克隆抗体及检测恶性疟抗原

用培养的恶性疟原虫免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0细胞融合,以海南恶性疟病人感染血中疟原虫为抗原,用斑点酶联免疫吸附试验检测,共得到10个针对恶性疟原虫红内期抗原的单克隆抗体株。其中1     

恶性疟原虫抗原基因在鼠伤寒沙门氏菌中的表达及免疫原性的初步鉴定

将人工合成的恶性疟原虫杂合７４肽抗原基因克隆到表达载体ｐＷＲ４５０－１中，获得了重组质粒ｐＷＲＣ，将其先转化到减毒伤寒沙门氏菌ＬＢ５０００修饰后，再转化到ＳＬ３２６１，得到重组减毒鼠伤寒沙门氏菌ＳＬ３２６１（ｐＷＲＣ）。ｐＷＲＣ在ＳＬ３２６１中以β－半乳糖苷酶－杂合多肽抗原Ｃ融合蛋白（ＧＺ－Ｃ）形式表达，表达量约占菌体蛋白总量的１１．３％．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ及免疫双扩散显示ＧＺ－Ｃ可与兔抗ＧＺ－Ｃ抗原的免疫血清发生特异反应。ＧＺ－Ｃ识别兔抗ＧＺ－Ｃ及鼠抗恶性疟原虫抗血清的ＥＬＩＳＡ滴度分别为１：３２００及１：５１２０。初步结果表明ＳＬ３２６１（ｐＷＲＣ）表达的ＧＺ－Ｃ具有抗原性。连续传代ＳＬ３２６１（ｐＷＲＣ）未见质粒ｐＷＲＣ丢失及对宿主有明显的毒性。     

疟原虫抗原检测及在疟疾诊断中的应用

本文综述了免疫学技术在疟原虫抗原检测中的应用,着重叙述了近年来发展较快的放射免疫技术、酶标技术及DNA探针技术等在恶性疟原虫(P.f.)抗原检测中的应用及用于疟疾免疫诊断的前景。现有的各种检测技术均有各自的特点,实验室检测P.f.抗原都有较好的敏感性和特异性,有些试验在现场应用与镜检有较好的相关性。然而,疟原虫抗原检测基本上还处于实验研究阶段,与临床应用尚有一定距离,主要问题在于有些技术操作过程复杂,检测临床标本时有假阳性和假阴性出现,且有些敏感度较低等。今后的研究重点应放在检测力法的敏感性、特异性、简单性和实用性等几个方面,以找到一种能彻底代替显微镜检查的疟疾免疫诊断方法。     

用双夹心斑点免疫金银染色法检测病人血中疟疾循环抗原

应用抗间日疟原虫和抗恶性疟原虫红内期抗原单克隆抗体建立了双夹心斑点免疫金银染色法和双夹心免疫酶斑点法并用于检测间日疟和恶性疟患者血清中循环抗原。共检测20份间日疟血清和15份恶性疟血清,双夹心斑点免疫金银染色法阳性率分别为90％和93％,可检出最低原虫密度为0.0009％;双夹心免疫酶斑点法阳性率分别为85％和87％,可检出最低原虫密度为0。0075％。与包虫病。弓形虫病和乙肝表面抗原阳性血清无交叉反应,检测60份健康献血员血清,两法分别有5％和8％假阳性。初步结果提示双夹心斑点免疫金银染色法检测疟疾循环抗原敏感度较高,若经过适当改进,有可能用于疟疾现场诊断和流行病学调查。     

产植酸酶青霉菌株的分离及其生物学特性的初步研究

从霉变的菜籽粕中筛选出具有产生植酸酶、降解植酸能力的青霉菌株P7。在液态发酵条件下，48h植酸降解率达96％。采用DEAE－52柱层析技术部分纯化植酸酶，对其生物学特征的研究表明：该植酸酶的最适反应温度为60℃，最适反应酸碱度为pH5.0，测得酶的米氏常数为0．25mmol／L。     

恶性疟原虫杂合45肽抗原基因重组减毒鼠伤寒沙门氏菌在家兔免疫应答的初步研究

已经在减毒鼠伤寒沙门氏菌ＳＬＳ３６１以融合蛋白的形式表达了人工合成的恶性疟原虫杂合抗原基因Ａ。活菌以２×１０￣９ｃｆｕ（ｃｏｎｏｌｙｆｏｒｍｕｎｉｔｓ）经口服免疫新西兰家兔，用ＥＬＩＳＡ法测定血清中抗体水平，结果于首次免疫或加强免疫后都可检测到一定水平的特异性抗体，并可诱发出针对融合蛋白和恶性疟原虫抗原的迟发性超敏反应（ＤＴＨ）。活菌苗免疫后未见明显的毒副作用。     

重组人白细胞介素－3在大肠杆菌中表达及纯化研究

将化学合成的人白细胞介素－３（ｈＩＬ－３）基因与表达质粒ｐＫＫ２２３－３重组并转化大肠杆菌ＪＭ１０５，重组菌在摇瓶中发酵并诱导表达，表达产量达菌体蛋白质总量的５３％以上。发酵菌经超声破碎后得到包含体，经洗涤处理使包含体纯度达９０％以上。用８ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍溶解包含体后直接透析复性，复性液经Ｓｅｐｈｏｒｏｓｅ－ＳＰ离子交换层析，得到纯化的重组ｈＩＬ－３，纯度达９８％。用ＴＦ－１细胞进行体外检测活性，比活达到１０８单位／ｍｇ蛋白质。本研究为重组人白细胞介素－３的大规模生产提供了条件。