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目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein, HBx)是否通过调控活性氧(reactive oxygen species, ROS)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3, NLRP3)信号通路引起足细胞焦亡。方法采用小鼠肾足细胞过表达HBx基因来模拟乙型肝炎相关性肾炎的发病机制。将足细胞分为以下5组:空白对照组(不予特殊处理)、阴性对照组(转染对照慢病毒)、HBx过表达组(转染HBx过表达慢病毒)、HBx过表达+NLRP3 siRNA组(共转染HBx过表达慢病毒和NLRP3 siRNA)、HBx过表达+ROS抑制剂组(转染HBx过表达慢病毒和添加ROS抑制剂)。电镜下观察足细胞的形态学改变;二氯二氢荧光素二乙酸酯(dichlorodihydrofluorescein diacetate assay, DCFH-DA)法检测ROS的生成;Hoechst 33342染色观察足细胞细胞核的形态和数量变化;酶联免疫吸附测定试... 相似文献
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目的探讨微RNA(microRNA, miRNA)-223在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)X蛋白(HBV X protein, HBx)诱导的HBV相关性肾炎(HBV-associated glomerulonephritis, HBV-GN)足细胞焦亡中的潜在功能及相关机制。方法采用人肾足细胞中过表达HBx基因来模拟HBV-GN的发病机制。实时荧光定量PCR和Western印迹分别检测焦亡相关蛋白[核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3, NLRP3)、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD, ASC)]及炎性因子[白细胞介素1β、白细胞介素18]mRNA和蛋白的表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-223的下游靶标;TUNEL染色和流式细胞术检测细胞焦亡情况;免疫荧光检测足细胞损伤标志物... 相似文献
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目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)诱导足细胞膜上M型磷脂酶A2受体(PLA2R)表达增加对乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBV-GN)中足细胞焦亡的影响及其作用机制。方法采用转染HBx基因至人肾脏足细胞内的方法模拟HBV-GN发病过程, 并将足细胞分为以下8组:正常对照+分泌型磷脂酶A2-ⅠB(sPLA2-ⅠB)组、空白质粒+sPLA2-ⅠB组、HBx组、HBx+sPLA2-ⅠB组、HBx+sPLA2-ⅠB+PLA2R对照siRNA组、HBx+sPLA2-ⅠB+PLA2R-siRNA组、HBx+sPLA2-ⅠB+ROS对照siRNA组及HBx+sPLA2-ⅠB+ROS-siRNA组。电镜下观察足细胞形态, 荧光显微镜下利用免疫荧光染色观察足细胞膜上PLA2R的表达, 流式细胞术分析足细胞焦亡率及活性氧(ROS)表达, 实时荧光定量PCR及Western 印迹测定PLA2R、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、白细胞介素(IL)-1β及IL-18 mRNA及蛋白的表达情况。结果与正常对照组相比, 体外转染HBx质... 相似文献
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