Notch通路在高浓度葡萄糖腹膜透析液所致大鼠腹膜纤维化模型中的活化

目的 观察Notch通路在高浓度葡萄糖透析液所致大鼠腹膜纤维化模型中的变化并探讨其可能机制。 方法 给予SD雄性大鼠每日腹腔注射高浓度葡萄糖腹膜透析液，于实验后2周和4周杀检。取壁层腹膜组织行光镜检查；免疫印迹检测转化生长因子β1 （TGF-β1）、 E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA) 和I型胶原蛋白（Col I）的表达；RT-PCR检测Notch通路的下游靶基因Hes-1的表达；免疫印迹和RT-PCR检测Notch配体Jagged-1和Notch通路的负性调节因子Numb的表达。 结果 HE染色显示模型组腹膜明显增厚，间皮细胞减少；Masson染色显示壁层腹膜中可见明显的胶原沉积。与健康对照组相比，模型组的TGF-β1、α-SMA 和 Col I的表达增加而E-cadherin的表达下降（均P < 0.01）。4周模型组与对照组相比Jagged-1表达明显增加（P < 0.05），同时Hes-1的表达亦明显增加（P < 0.01），而Notch通路的负性调节因子Numb的表达下降（P < 0.01）。 结论 在高浓度葡萄糖腹膜透析液所致的大鼠腹膜纤维化模型中有Notch通路的活化，而该通路的活化可能与Notch通路的负性调节因子Numb表达的下调有关。高表达Notch通路的负性调节因子，如Numb，可能是治疗腹膜透析患者腹膜纤维化的新途径。     

Numb基因在大鼠肾小管上皮细胞转分化过程中的作用

目的 探讨Numb在大鼠肾小管上皮细胞转分化过程中的作用。 方法 重组人转化生长因子β1（TGF-β1）刺激大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E细胞),不同浓度TGF-β1 （0、1、5、10、15、20 μg/L）作用48 h与TGF-β1 10 μg/L作用不同时间(0、24、48、72 h)后,采用RT-PCR、Western印迹和免疫荧光染色分别检测NRK52E细胞内E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Numb 的表达。采用RNA干扰技术下调Numb表达,Western印迹观察改变Numb水平对E-cadherin、α-SMA蛋白水平的影响。 结果 TGF-β1以剂量及时间依赖的方式诱导NRK52E细胞E-cadherin 蛋白表达下调,α-SMA 蛋白表达增高。Numb蛋白的表达随TGF-β1浓度的增加而增高,在5、10、15和20 μg/L时分别为0 μg/L时的1.33倍（P = 0.024)、1.39倍（P = 0.035）、1.45倍（P = 0.025）和1.51倍（P = 0.000)。而Numb蛋白和mRNA的表达亦随TGF-β1作用时间的延长而增高,作用24 h、48 h、72 h,Numb蛋白分别为0 h的1.48倍（P = 0.046)、1.54倍（P = 0.011）、1.79倍（P = 0.028）,Numb mRNA分别为0 h的1.56倍（P = 0.012)、1.82倍（P = 0.008）、1.82倍（P = 0.002）;同时Numb的分布也发生了改变,大量聚集在胞质中。下调Numb表达可以显著抑制TGF-β1诱导的α-SMA表达上调（为Numb表达正常时的18.1%,P = 0.004）、E-cadherin表达下调（为Numb表达正常时的2.19倍,P = 0.004）。 结论 Numb可以促进肾小管上皮细胞发生转分化。