中性粒细胞数量减少和功能失调的检测方法及临床意义

中性粒细胞是人体防御系统的重要组成部分,参与机体的非特异性抗感染过程,该类细胞具有强大的吞噬杀菌功能,其作用过程历经趋化运动,识别并结合吞噬物质,进而摄入胞内,最终杀伤并降解病原体.     

检测HBV DNA PCR 技术关键因素的探索

本文通过试验比较，选用优化方案，建立了适合基层临床实验室简便稳定的检测ＨＢＶ ＤＮＡ ＰＣＲ方法。在ＤＮＡ模板的制备中采用合适的螯合剂除去样品中干扰扩增的物质、保护模板免受高温降解，从而提高模板扩增量；采用含有Ｔａｑ酶的ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘ使该法操作简化，具有良好的重复性和稳定性；确立最适反应条件解决ＰＣＲ实验中一些常见问题，并将自制试剂盒作了临床初步应用。     

胎牛骨髓多肽对小鼠和人巨噬细胞及NK活性的影响

以特定工艺从胎牛骨髓中提取分离到一种多肽类物质，用吞饮中性红试验表明，该物质能明显提高小鼠腹腔巨噬细胞（Ｍφ）吞噬功能。进而用人全血化学发光仪测定，发现正常人外周血细胞与该物质共温后，血中吞噬细胞吞噬细菌后的化学发光峰高明显高于对照组，峰时明显缩短。此外用１２５Ｉ－ＵｄＲ释放法也表明该物质对ＮＫ细胞具有活化作用。从而提示胎牛骨髓多肽物质对机体免疫功能具有促进作用。     

生物素─链霉亲和素系统在检测巨细胞病毒抗体中的应用

本文用自制ＣＭＶ抗原和生物素－链霉亲和素系统试剂，通过最适条件的对比，建立了检测人血清中抗巨细胞病毒ＩｇＭ、ＩｇＡ类抗体的ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ，并与普通ＥＬＩＳＡ作比较，结果表明，ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ的非特异性吸附明显低于普通ＥＬＩＳＡ，与普通ＥＬＩＳＡ相比，抗体效价分别提高５和７倍，阳性率分别提高６８％和１５３．５％。在实际工作中曾用ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ检测临床样品１６５份，就所得结果进行分析。表明ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ检测ＣＭＶＩｇＭ和ＩｇＡ可提高特异性和灵敏度，值得推广应用。     

癌症患者红细胞花环率的变化

癌症患者红细胞花环率的变化黄晓东陈红兵严红蔡冠华＊朱晴晖＊王勤富（上海市纺织第一医院，上海２０００６０；＊上海长江免疫基因检验中心）８０年代中期红细胞免疫功能渐被重视和研究，红细胞在血液中分布最多，其膜上具有Ｃ３ｂ受体，可与Ｃ３ｂ致敏的酵母多糖粘附形...     

快速检测尿微量白蛋白的半定量金免疫渗滤法的研究

目的　建立一种伴有质控点的金免疫渗滤法 ,用于半定量检测人尿中的微量白蛋白。方法　应用自制的 2株抗人白蛋白单克隆抗体 ,其中一株包被在固相膜上 ,另一株与胶体金结合 ,组成金免疫渗滤试剂。膜上另包被 2种浓度的人白蛋白 ,用于测定时的定量质控。结果　本法经人白蛋白标准液测定 ,结果判定可分为 <30、30～ 10 0、10 0～ 2 0 0、>2 0 0mg/L 4个半定量区 ;12 6例经散射免疫浊度定量测定白蛋白浓度的临床尿标本用于本法的对比测定 ,结果符合性良好。结论　本法具有半定量和质控的特点 ,结果可靠 ,适用于糖尿病、高血压等并发肾病的早期诊断 ,方法简便、快速 ,特别适合中、小医院和门诊部使用。     

细胞-酶联免疫吸附试验及其应用

酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)问世数十年来,广泛应用于检测各种体液中的可溶性抗原或抗体.在传统的ELISA中,微孔板上包被的是可溶性的抗体或抗原,然而在免疫学研究和临床检测时,需要了解免疫活性细胞表面表达的特定分子以对细胞特性进行认定和分类,亦需测定抗某种细胞的抗体或评价某种细胞的功能,因而传统的ELISA中的包被物或受检物就要被替代,检测模式有所改变.1971年,Avrameas等[1]首次用酶标记抗体定量测定细胞表面的免疫球蛋白,又经数年的发展,形成了以细胞包被酶标板测定细胞表面特定分子的细胞-ELISA.近年来细胞-ELISA衍生出多种模式(方法),并筛选出适合细胞-ELISA的标记酶.目前已有多种成熟的细胞-ELISA的模式,并在检验医学中得到应用.     

检测细胞内细胞因子的生物素-链霉亲和素免疫细胞化学法的建立及初步应用

目的建立检测细胞内细胞因子的生物素-链霉亲和素免疫细胞化学法(BSA-ICC)并作临床初步应用.方法从健康人外周血单个核细胞(PBMC)中富集CD4细胞,加入莫能霉素,用不同浓度的佛波醇酯(PMA)和钙离子载体(A23817)诱导CD4细胞不同时间,比较其胞内表达白细胞介素-2(IL-2)/白细胞介素-4(IL-4)的细胞百分率,确定最适诱生条件;用不同稀释度的IL-2McAb、IL-4McAb、不同浓度的生物素化羊抗鼠IgG(bio-SAM IgG)和辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(HRP-SA)作棋盘配比试验,确认McAb、bio-SAM IgG和HRP-SA的最适浓度,根据上述结果建立了检测细胞内细胞因子的BSA-ICC法.用所建方法检测20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中表达IL-2/IL-4细胞的百分率.结果诱导CD4细胞胞内表达IL-2和IL-4的细胞最高百分率的PMA和A23817浓度分别为100 μg/L和2.0 μmol/L,诱导高峰时间分别为5和7 h,BSA-ICC法中所用IL-2McAb、IL-4McAb最适稀释度分别为1∶ 20和1∶ 40,bio-SAM IgG和HRP-SA浓度分别为10～15 μg/ml和15 μg/ml.20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中分泌IL-2的细胞百分率分别为(45.90±4.39)%、(37.28±2.67)%和(25.19±3.49)%,分泌IL-4的细胞百分率分别为(10.5±1.50)%、(9.94±1.06)%和(16.13±2.50)%,IL-2+CD4+/IL-4+CD4+比值分别为3.65±0.94、3.55±0.76和1.27±0.26.结论所建方法可用于T辅助(Th)细胞亚型的测定,从而判断Th细胞的极化状态.妇科恶性肿瘤患者Th细胞功能失衡极化,呈Th2反应,可能与恶性肿瘤的发生有关.     

结直肠癌C-erbB-2基因启动子CpG岛甲基化状态及其与C-erbB-2蛋白表达的关系

目的了解结直肠癌组织C—erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化状态、C-erbB-2蛋白表达水平及两者之间的关系。方法取经病理确诊的43例结直肠癌组织和相应癌旁组织，分别用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）和免疫组织化学法（IHC）检测C-erbB-2启动子区CpG岛的甲基化和C-erbB-2蛋白表达水平。结果癌组织和癌旁组织中C—erbB-2启动子区CpG岛甲基化率分别为44．2％和74．4％，差异具有统计学意义（P=0．004）。癌组织和癌旁组织中C—erbB-2蛋白过度表达率分别为67．4％和27．9％，差异具有统计学意义（P=0．000）。C—erbB-2蛋白表达水平与肿瘤分期相关。结直肠癌组织C—erbB-2启动子区CpG岛甲基化状态与C—erbB-2蛋白表达水平呈显著相关（r=0．331，P=0．03）。结论结直肠癌中C—erbB-2基因启动子区CpG岛的低甲基化可能在C—erbB-2蛋白过度表达中起一定作用，有望成为有用的肿瘤分子诊断标记和治疗靶点。     

用BSA系统免疫细胞化学法检测人外周血T和B淋巴细胞群

本文报道用自制生物素－链霉亲和素（ＢＳＡ）系统试剂检测人外周血中Ｔ和Ｂ淋巴细胞群，并与常用的ＡＰＡＡＰ桥联法对比，结果基本接近，但ＢＳＡ法显色较佳。在此基础上选择健康人８０例，测得外周血中Ｔ和Ｂ淋巴细胞的百分率和绝对数，以供临床参考。