透明颤菌血红蛋白基因在链霉菌中的克隆和表达

以质粒ｐＩＪ７０２和ｐＩＪ６９９为载体，构建了两个带有透明颤菌（Ｖｉｔｒｅｏｓｃｉｌａ）血红蛋白（ＶＨｂ）基因（Ｖｇｂ）的大肠杆菌－链霉菌穿梭质粒并转化Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１、变青链霉菌（Ｓ．ｌｉｖｉｄａｎｓ）ＴＫ６４及蒽环类抗生素阿柔比星（阿克拉菌素）产生菌——加利利链霉菌（Ｓ．ｇａｌｉｌａｅｕｓ）ＡＴＣＣ３１１３３，经ＣＯ结合差光谱法、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳分析表明Ｖｇｂ在大肠杆菌和链霉菌中得到表达。通过改变培养条件研究溶氧对Ｖｇｂ表达的影响，结果表明在低溶氧的情况下，ＶＨｂ表达量增加。同时发现，在低氧浓度时，ＶＨｂ的表达有利于链霉菌菌体的生长，其菌体生长量高于同样条件下的对照菌株（Ｖｇｂ－）１７％～２９％。     

褐产色小单孢菌——一株新的西索米星产生菌

从云南省大理县分得的一株褐产色小单孢菌,孢子层呈橄榄绿色,在酪氨酸琼脂上能产生褐色素,孢子表面有棘刺状突起,分类学鉴别它为小单孢菌属的一株新种。其主要发酵产物经提取、精制和微生物、理化特性、耐药谱及波谱学研究证明为西索米星。     

β-内酰胺酶抑制短肽SIPIS04-01的表达、纯化与抑制作用测定

通过酵母双杂交系统从一个随机DNA片段文库中筛选到一个编码能与β-内酰胺酶结合的短肽SIPIS04—01的DNA序列，将它克隆到pGEX-4T-1的多克隆位点中，得到重组质粒pYG205。当用适量的IPTG诱导后，携带pYG205的E．coli DH5α能表达短肽SIPIS04-01-GST融合蛋白。利用谷胱甘肽Sepharose 4B亲和层析介质分离纯化短肽SIPIS04-01-GST融合蛋白，经凝血酶切割并分离纯化后，体外试验表明短肽SIPIS04-01具有抑制β-内酰胺酶的作用。     

丝状真菌顶头孢霉染色体DNA的提取

目的探索提取头孢菌素C产生菌顶头孢霉基因组DNA的方法。方法采用氯化苄法、液氮研磨法和酶裂解法。结果较其他两种方法比 ,氯化苄法提取效果好。当提取液pH值为 9 0～10 0、EDTA浓度为 12 0mmol·L-1时 ,所得的顶头孢霉染色体DNA的质量和数量均较理想 ,每克(湿重 )顶头孢霉菌丝体能得到 96 μg的染色体DNA。常规琼脂糖凝胶电泳分析 ,其DNA片断大于2 3kb。结论该分离方法获得的染色体DNA质量较高 ,可进行限制性内切酶酶解并适合后续特定基因的PCR扩增反应     

使用稳定的乳剂改进固定在膜反应器中的脂肪酶的稳定性、活性和对映体选择性

将由消旋萘普生甲酯生产光学纯的S-萘普生作为一个模式反应系统。在有机相中含有底物的油/水乳剂由壁-腔处加入酶膜反应器,将酶固定在可截留50 kD的毛细管样聚酰胺膜的海绵层(壁侧)。水相可以透过膜而微乳剂留在表面选择薄层上。因此,底物保留在载酶的膜上,而水溶性产物被不断地从反应位点移走。结果显示脂肪酶在整个操作时间(多于250h)里保持稳定的活性。产物的光学纯度(ee)(96±2)%可与游离酶(98±1)%相当,而比在分离的两相系统中使用的类似的载酶膜反应器(90%)高。结果表明,该固定化酶可达较高的稳定性、催化活性及对映体选择性。使用稳…     

以源于幽门螺杆菌尿素酶的重组抗原作为幽门螺杆菌相关疾病的疫苗

幽门螺杆菌尿素酶的酶活性中心位于β亚基，从它的结构及对其它细菌和植物尿素酶的同源性，确定了β亚基的一段135个氨基酸的重要序列。将这段序列(UreB)与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)一起在大肠杆菌中以重组融合蛋白的形式表达。将UreB-GST作为免疫原，得到了17个单克隆抗体(MAb)UA-1～17。所得的MAb表现出对UreB的高度特异性，其中一些能与     

来源于枯草杆菌的青霉素G酰基转移酶的生产：培养基成分的影响

分离得到一株产胞内青霉素G酰基转移酶(PAC)的高产枯草杆菌。该菌株中PAC的产生受苯乙酸的诱导。在28℃，pH7．0条件下，考察不同碳源氮源对菌体生长和PAC产生的影响。生长在分别补充蔗糖为碳源和胰蛋白胨为氮源的培养基中的细胞产生的最高活性分别为6．45和8．92u／mg。生长在含有蔗糖和胰蛋白胨培养基中的细胞可产生PAC的最高浓度为10．1u／mg，是基本培养基中的2倍。     

天蓝淡红链霉菌SIPI-1482中dnrX基因的敲除及多柔比星产生菌的构建

柔红霉素是合成重要抗肿瘤抗生素多柔比星的前体,由微生物发酵产生。通过PCR从国内柔红霉素生产菌种天蓝淡红链霉菌SIPI-1482基因组DNA中扩增出约1080bp的dnrX部分序列,将PCR扩增片段中985bp的片段亚克隆至大肠埃希菌质粒pYG813构建了同源重组突变质粒pYG963,转化SIPI-1482原生质体并成功地敲除了dnrX基因,得到一株稳定的突变株。该突变株的发酵试验表明dnrX基因所编码的酶的功能已经被有效地阻断,对酸敏感的副产物减少,柔红霉素的产量增加了近3倍,将原野生菌改造成为多柔比星产生菌,发酵效价与原野生菌株柔红霉素的发酵效价相当,为直接发酵法生产多柔比星打下了基础。     

受SnpR激活的snpA启动子调控的柔红霉素C-14羟化酶基因的克隆、表达和应用研究

尝试将柔红霉素经微生物转化法合成多柔比星。从Streptomyces sp．C5中通过PCR的方法扩增了含核糖体结合位点、大小为1.3kb的编码C-14柔红霉素羟化酶的doxA基因及受SnpR调控的snpA启动子。最终构建的重组质粒pYG908，能表达一大小为46.6ku的蛋白条带，CO结合差光谱分析表明所表达的酶在450nm有吸收峰。重组质粒转化Streptomyces lividans TK24后，工程菌能转化柔红霉素生成和多柔比星保留时间一样的产物。     

柔红霉素产生菌Streptomyces coeruleorubidus SIPI-1482中dnmV因的克隆及阻断

从柔红霉素产生菌SIPI-1482菌株基因组DNA中PCR扩增得dnmV及其上游dnmU基因片段。利用同源重组对SIPI-1482菌株的dnmV基因进行基因阻断，得到一株遗传稳定的破坏于。验证了在该菌株中进行同源重组所需交换臂长度。