miRNA在病理性瘢痕中作用的研究进展

病理性瘢痕包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩,好发于面颈部和四肢关节等部位,不仅影响外观还会引起功能障碍,给患者的身心健康带来极大影响。miRNA是长18~22个核苷酸的内源性非编码小分子RNA。近年来,对基因表达调控机制的研究表明,miRNA参与调控皮肤疾病和创伤修复的发生和发展,参与调控增生性瘢痕的形成,在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中存在表达差异。通过分析miRNA在病理性瘢痕组织中的表达差异,预测其相应的靶基因和(或)靶蛋白,上调或下调相应的信号分子,能够实现在基因水平上对瘢痕的发生和发展进行调控,为病理性瘢痕的治疗提供崭新的平台和思路。     

芒柄花黄素对人增生性瘢痕成纤维细胞生长的作用

目的探讨芒柄花黄素对人增生性瘢痕成纤维细胞生长的作用。方法获取手术切除的人增生性瘢痕组织以及局部皮瓣转移修复后剩余的正常皮肤,提取成纤维细胞。通过MTT试验检测不同浓度的芒柄花黄素对成纤维细胞增殖的作用,应用流式细胞术对芒柄花黄素处理后的成纤维细胞周期进行分析。通过Annexin V-FITC/PI双染色法和Hoechest 33258染色观察成纤维细胞的凋亡情况。通过Western blot与RT-PCR试验,检测芒柄花黄素对细胞周期蛋白Cyclin D1和凋亡调节蛋白Bcl-2的作用。结果与对照组比较,芒柄花黄素对正常皮肤成纤维细胞的增殖影响较小,对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用,且药物浓度越高、作用时间越长,抑制作用越强。成纤维细胞大部分阻滞于G_1期,S期的细胞减少,细胞周期的进程受到阻断。芒柄花黄素能够通过抑制细胞周期蛋白Cyclin D1来影响细胞周期的进程,将细胞周期阻滞于G_1期;通过抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达诱导成纤维细胞的凋亡,从而实现对细胞生长的抑制作用。结论芒柄花黄素能够抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖并诱导其凋亡,可考虑用于增生性瘢痕的预防与临床治疗。     

应用涡流动力筛选技术辅助自体脂肪移植的实验研究

目的应用涡流动力筛选技术洗涤和筛选吸脂获取的脂肪,评估筛选后脂肪组织团的体积和结构完整性。方法选择10例女性腹部吸脂患者,每例获取20 ml脂肪,平均分为两份。实验组采用涡流动力筛选技术处理脂肪组织;对照组采用普通离心法处理脂肪组织。应用伊红溶液对活体脂肪组织进行染色,采用Image J软件分析脂肪团横截面积分析。结果实验组和对照组的脂肪团直径平均值分别为2.0330 mm和2.5580 mm;标准差分别为0.2352 mm和2.0805 mm,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论利用涡流动力筛选技术能够有效洗涤和筛选目标脂肪团,并保持脂肪组织完整结构和活性,具有潜在临床应用前景。     

苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞的生物学功能及相关调控蛋白的影响

目的探讨中药苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物功能的影响及相关调控蛋白表达的作用,了解其对瘢痕疙瘩的相关作用机制。方法将瘢痕疙瘩行体外细胞培养后进行细胞处理。实验组加入20μmol/L和40μmol/L的苦参碱;对照组加入生理盐水。分别通过四甲基噻唑蓝(MTT)检测成纤维细胞的增殖情况;AV-PI染色检测其凋亡情况;Transwell检测其侵袭和迁移情况;Western blot检测其生物功能相关调控蛋白的表达水平。结果经苦参碱处理后,细胞增殖受到抑制,且抑制作用具有浓度、时间的依赖性;AV-PI染色发现,苦参碱能在一定程度上诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡,且对其侵袭和迁移有抑制作用;通过Western blot实验结果发现,苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖、凋亡、自噬、侵袭和迁移等生物功能相关蛋白Cyclin D1、Bcl-2、LC3、Beclin-1、MMP2、MMP9的表达水平具有调节作用。结论苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞的生物学功能具有调节作用,可能是通过调控相关蛋白的表达来影响瘢痕疙瘩的生长。     

MiR-194-3p对成纤维细胞的增殖作用研究

目的 研究瘢痕疙瘩中miR-194-3p对成纤维细胞增殖作用的影响,为瘢痕疙瘩的治疗提供理论基础。方法 对瘢痕疙瘩标本应用基因芯片筛选出与正常组织差异表达的miRNA,并通过real-time PCR技术来验证miR-194-3p表达;采用Western-blot和real-time PCR分析miR-194-3p对其靶蛋白RUNX2的调节作用。在成纤维细胞中过表达或抑制miR-194-3p后,通过MTT实验观察其对成纤维细胞增殖的作用。通过Western-blot和real-time PCR探讨其对RUNX2及其增殖相关蛋白CDK4的调控作用。结果 miR-194-3p在瘢痕疙瘩中呈下调表达,其能够抑制RUNX2的表达;miR-194-3p可以通过抑制增殖相关蛋白CDK4来抑制成纤维细胞的增殖。结论 miR-194-3p可以抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖。     

防己诺林碱对增生性瘢痕的抑制作用

目的探究防己诺林碱对增生性瘢痕的抑制作用。方法提取原代瘢痕组织成纤维细胞,分别用DMSO(对照组),10、20、40μmol/L的防己诺林碱处理成纤维细胞24 h后,通过MTT实验检测对其增殖能力的影响;通过流式细胞术及Hochest33258染色检测对其增殖、凋亡能力的影响;通过western blot和real time PCR检测防己诺林碱对瘢痕组织成纤维细胞中Cyclin D1和Bcl-2表达水平的影响。结果 10、20、40μmol/L的防己诺林碱作用瘢痕组织成纤维细胞24 h后,细胞的抑制率分别为(21.32±4.87)%、(27.13±1.71)%和(29.86±5.59)%,与对照组相比差异均具有统计学意义;防己诺林碱还可抑制细胞周期进程,促进其凋亡;Western blot和real time PCR检测结果显示,防己诺林碱可抑制Cyclin D1和Bcl-2在瘢痕组织成纤维细胞中的表达。结论防己诺林碱可抑制瘢痕组织成纤维细胞的生长。     

miR-137通过PTN抑制瘢痕成纤维细胞生长

目的分析miR-137对瘢痕成纤维细胞生长的影响。方法通过芯片分析技术筛选出增生性瘢痕差异性表达的miRNAs,并在增生性瘢痕组织中进行验证。通过miRDB软件预测miR-137能够打靶的蛋白质,采用荧光素酶报告基因实验分析miR-137对PTN的靶向作用。提取原代瘢痕成纤维细胞分别构建miR-137过表达或低表达的细胞系。采用western blot及real time PCR检测miR-137对细胞中PTN的影响,以及MTT方法检测miR-137对细胞增殖的作用;检测miR-137对细胞中Cyclin B1的影响。结果 miR-137在增生性瘢痕组织中呈低表达,可以与PTN的3′UTR区域直接结合来抑制其表达及活性,从而抑制瘢痕成纤维细胞的增殖。Western blot和real time PCR检测结果显示,miR-137能抑制Cyclin B1在瘢痕成纤维细胞中的表达。结论 miR-137可以抑制PTN的表达,而且可以通过抑制PTN来抑制瘢痕成纤维细胞的生长。     

黄芪甲苷对人增生性瘢痕成纤维细胞生长的影响

目的探讨黄芪甲苷对人增生性瘢痕成纤维细胞生长的作用。方法获取患者经手术切除的增生性瘢痕组织,从中提取成纤维细胞进行培养。采用MTT试验检测不同浓度的黄芪甲苷对成纤维细胞增殖的影响,并应用流式细胞技术对黄芪甲苷作用后的成纤维细胞的周期进行分析。通过Annexin V-FITC/PI双染色法,观察经黄芪甲苷处理的成纤维细胞的凋亡情况。采用Western blot和RT-PCR验证黄芪甲苷对细胞周期蛋白Cyclin D1和凋亡调节蛋白Bcl-2的作用。结果不同浓度的黄芪甲苷对成纤维细胞增殖均有一定的抑制作用,且随着药物浓度增加和作用时间的延长,其抑制作用愈发明显。大多数的成纤维细胞阻滞于G1期,而进入S期的细胞比例呈下降趋势,且细胞周期受到阻断;通过黄芪甲苷对抑制细胞周期蛋白Cyclin D1和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达来影响细胞周期的进程并诱导成纤维细胞的凋亡,从而实现对细胞生长的抑制作用。结论黄芪甲苷能够抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,并诱导其凋亡,适于对增生性瘢痕的预防和治疗。