红色荧光金葡菌假体感染临床株的构建

目的建立红色荧光标记金黄色葡萄球菌(金葡菌)假体感染(PJI)临床株，探究工具菌的生物学特性及和初步应用可行性。 方法通过分子克隆手段构建mCherry红色荧光表达质粒，通过电转化和噬菌体转导构建红色荧光标记金葡菌PJI临床株。通过生长曲线检测，体外成膜和生物量分析和荧光强度测量鉴定工具菌生物学特性。采用RAW264.7细胞株、工具菌建立共培养模型。采用该模型示踪不同锌离子浓度处理的巨噬细胞对于荧光PJI金葡菌吞噬能力。使用独立样本t检验、重复测量方差分析对定量数据进行统计。 结果使用Gibson系统成功构建了荧光表达质粒pRMC2-pts-mCherry，并且使用噬菌体Phage11将该质粒成功导入金葡菌假体感染临床株ST1792。较之于野生株ST1792，荧光金葡菌ST1792-pRMC2-pts-mCherry两者的生长曲线没有统计学差异(F＝0.012，P>0.05)。在0.5%葡萄糖胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSBG)内，两者的生物膜光密度(OD)值分别为(3.700±0.003)和(3.715±0.042)(t＝0.6056，P>0.05)；10%滑液中生物膜OD值为(3.682±0.084)和(3.648±0.095)(t＝0.474，P >0.05)。使用动物活体成像系统(IVIS)检测荧光强度，24 h荧光强度为(1.95± 0.04)、48 h荧光为(1.94±0.13)、72 h荧光强度为(1.95±0.04)，荧光强度72 h稳定(F＝2.944，P>0.05)。通过荧光显微镜观察以及菌落形成单位(CFU)计数评价发现，使用锌离子浓度30～60 μmol/L不含抗生素的培养基处理RAW264.7 24 h，可以促进其吞噬金葡菌，其中30 μmol/L吞噬率为(44±4)%(t ＝4.75，P<0.01)、45 μmol/L吞噬率为(45±6)%(t＝4.086，P<0.05)、60 μmol/L离子处理的巨噬细胞，其吞噬率为(38±4)%(t ＝4.786，P <0.01)。 结论本研究成功构建红色荧光临床PJI金葡菌，并验证其用于PJI相关体外吞噬研究的可行性。