复杂先天性心脏病术后迟发型膈疝1例CSCD

患儿 女,6个月,体质量5. 4 kg. 因先天性心脏病于外院就诊,诊断：右心室双出口,室间隔缺损,房间隔缺损,肺动脉高压. 术前X线胸片提示心影增大,双肺纹理增浓,符合先心病表现（图1）. 在全麻体外循环下行右心室双出口矫治＋房间隔缺损修补术,过程顺利,术后16 h脱离呼吸机.     

腹腔镜治疗小儿腹阴囊型鞘膜积液的临床经验

目的总结腹腔镜鞘状突高位结扎治疗腹阴囊型鞘膜积液的临床经验。 方法回顾性分析腹阴囊型鞘膜积液的临床表现、超声所见、术中所见及术后效果。 结果6例腹阴囊鞘膜积液患儿,5例术前诊断精索鞘膜积液。查体腹股沟至阴囊体积大、张力高囊性包块,透光阳性。超声探查睾丸后上方包块并延伸至腹腔,积液量多,有时可见分隔。囊性包块均自内环口处脱出。2例先将腹腔包块还纳至鞘突管,再行鞘状突高位结扎,最后经阴囊抽出积液。4例先穿刺针刺破腹腔内囊性包块,将囊液排尽,囊膜还纳至鞘突管后,行鞘状突高位结扎。术后随访10个月至24个月,临床及超声检查,均无再次出现症状。 结论腹腔镜鞘状突高位结扎治疗疗腹阴囊型鞘膜积液效果确切。     

AAV9衣壳蛋白VP的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

目的：表达腺相关病毒（AAV）9型衣壳蛋白VP,制备抗VP蛋白的多克隆抗体。方法：使用PCR技术从AAV9病毒包装质粒中扩增AAV9衣壳蛋白VP,同源重组法构建衣壳蛋白表达质粒pET30a-AAV9-VP。质粒转化表达菌E.coli BL21(DE3)后,IPTG诱导目的蛋白VP表达,亲和层析法纯化VP蛋白,将纯化后的蛋白免疫日本大耳白兔,3次免疫后获得针对VP蛋白的兔多克隆抗体。以Western blot和细胞免疫荧光法检测抗体的应用,ELISA检测所得抗体的效价。结果：成功构建pET30a-AAV9-VP表达质粒,在大肠杆菌BL21中,IPTG可诱导VP蛋白表达。亲和层析法纯化获得高纯度的VP蛋白。该蛋白在日本大耳兔体内能够诱导产生多克隆抗体,ELISA检测抗血清效价达到1∶512 000。结论：成功原核表达和纯化AAV9衣壳蛋白VP并制备了兔多克隆抗体。制备的抗AAV9 VP抗体能够特异性识别和结合AAV衣壳蛋白,并可有效用于Western blot和细胞免疫荧光分析,为后续深入研究AAV9在基因治疗中的作用及AAV9载体开发提供了研究基础。     

腺相关病毒衣壳保守区多价抗原肽的原核表达及多克隆抗体制备

目的 原核表达和纯化腺相关病毒（AAV）衣壳保守区抗原肽,制备抗AAV衣壳保守区的兔多克隆抗体。方法 设计并合成编码AAV衣壳蛋白保守区的DNA,将序列克隆到载体pET30a,获得质粒pET30a-AAV-CR,原核表达并纯化保守区多价抗原肽,考马斯蓝染色法及Western blot法对AAV保守区多价抗原肽进行鉴定。将日本大耳朵白兔分为实验组与对照组（1只/组）,实验组注射AAV保守区蛋白制备多克隆抗体,对照组注射PBS,ELISA检测抗体效价,Western blot及细胞免疫荧光法检测抗体应用效果。结果 成功构建了表达AAV衣壳保守区抗原肽的质粒pET30a-AAV-CR,表达纯化得到相对分子质量为17000的蛋白质;纯化后的蛋白可在兔体内诱导产生针对AAV衣壳保守区的抗体,且该抗体能广泛性识别AAV1-AAV10衣壳蛋白序列。结论 诱导出AAV衣壳保守区蛋白并成功获得了抗AAV衣壳保守区的多克隆抗体,为后续载体开发以及生物学功能研究奠定了基础。