大肠埃希菌表达的恶性疟原虫裂殖子表面蛋白MSP1-42的免疫原性

目的纯化大肠埃希菌Rosettagami（DE3）表达的可溶性裂殖子表面蛋白1C末端蛋白（MSP1-42,3D7株）,检测其体外抑制恶性疟原虫生长的效果。方法利用大肠埃希菌Rosettagami（DE3）为宿主菌诱导表达MSP1-42,用带组氨酸标签的镍柱纯化可溶性的MSP1-42。6只新西兰白兔随机分为免疫组和对照组,每组3只。用MSP142与弗氏佐剂乳化后,皮下注射,抗原免疫剂量每次为200“g／只,共免疫4次,每次间隔2周。佐剂对照组以PBS代替抗原同法免疫。免疫前及末次免疫2周后取血,用酶联免疫吸附试验和间接荧光抗体试验检测血清中特异性抗体及其与天然抗原的反应,用含10％和20％免疫血清的培养基体外培养恶性疟原虫（海南分离株,Fcc1／HN）,检测免疫血清体外抑制恶性疟原虫生长的效果。结果经镍柱纯化后获得纯度为95％以上的MSP1-42蛋白;免疫组个体在第4次免疫后血清特异性抗体的滴度依次为1：640000、1：640000、1：160000,间接荧光抗体试验检测表明MSP1-42免疫兔血清与恶性疟原虫表面蛋白有阳性反应;免疫血清能抑制恶性疟原虫在体外生长,在10％浓度时,3只免疫兔血清的抑制率依次为（51．94-24．2）％、（29．4±8．6）％和（86．7±7．4）％,在20％浓度时,抑制率分别为（93．3±7．5）％、（65．3±10．6）％和（96．4±1．0）％。结论大肠埃希菌Rosettagami（DE3）表达的MSP142蛋白免疫血清能识别恶性疟原虫天然抗原,体外培养能抑制恶性疟原虫的生长。     

霍乱毒素B亚单位胰岛素混合蛋白抗糖尿病作用

目的观察口服不同剂量霍乱毒紊B亚单位（CrB）与胰岛紊（insulin）混合蛋白疫苗的免疫耐受及预防1型糖尿病作用，为探讨社区糖尿病干预方案提供依据。方法3周龄雌性NOD小鼠60只，随机分为磷酸缓冲液（PBs）阴性对照、1mg胰岛紊阳性对照、CTB＋insulin100μg，CTB＋insulin 1mg等4组。从4周龄起，每周灌胃2次～12周龄；12周龄起，每周1次动态监测小鼠尿糖、血糖，至26周龄，观察糖尿病的发生，比较各组糖尿病发病率。结果与磷酸缓冲液（PBs）组比较，CTB＋insulin100μg。CTB＋insulin 1mg能够减少NOD小鼠糖尿病的发生，降低小鼠糖尿病的累积发病率。至鼠龄26周时，PBS组、CTB＋insulin100μg，CTB＋insulin1mg组和1mg胰岛素组的累积发病率分别为100％，60％，60％和40％，与阴性对照组比较，其他3组的累积发病率差异均有统计学意义（均P〈0．05）；2个试验组与阳性对照组的累积生存率及生存分布的差异无统计学意义。结论CTB＋insulin混合蛋白疫苗能够降低NOD小鼠糖尿病累积发病率，提高小鼠生存率；CTB＋insulin1mg组的预防作用优于100μg组。     

蒙古族居民血糖、血清胆固醇水平及危险因素分析

[目的 ]　了解蒙古族居民的血糖、血清胆固醇水平及影响因素。 [方法 ]　通过现况调查收集相关资料 ,并对蒙古族居民的血糖及血清胆固醇进行了检测。 [结果 ]　蒙古族居民的平均血糖水平为 ( 4 .2 6± 1 .2 1 )mmol/L ,平均胆固醇水平为 ( 3.89± 1 .1 9)mmol/L。高血糖检出率为 4.6 8% ,高胆固醇检出率为 1 1 .2 %。单因素及多因素分析表明 ,体重指数及年龄可影响人群的血糖 ;体重指数、腰 /臀比值、年龄及饮酒对人群的胆固醇水平产生影响。 [结论 ]　应大力开展健康教育及定期的检测工作 ,以防止蒙古族居民心血管疾病、糖尿病发生率的增加。     

竹黄菌液体培养条件下生成竹红菌素的研究

研究了竹黄菌液体培养生成竹红菌素过程中培养条件的影响。结果表明竹黄菌生长及竹红菌素生成适宜的温度、pH值分别为26℃、5.5～6.0，并且整个过程需要充分的溶氧。液体培养的最适碳源为葡萄糖，浓度为30g/L。最适氮源为土豆汁，浓度为20％。     

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白MSP1-42基因的合成及其表达

目的 利用大肠杆菌表达系统表达可溶性的恶性疟原虫(3D7株)裂殖子表面蛋白1C末端MSP1-42蛋白.方法 采用两步PCR法拼接合成全长msp1-42基因,将测序正确的msp1-42基因构建至pET32a(+)表达载体,获得pET32amsp表达质粒,热激转化至宿主菌Rosetta gami(DE3)中进行诱导表达,用免疫印迹法检测表达产物.结果 全合成了恶性疟原虫3D7株msp1-42基因,合成基因在Rosetta gami(DE3)中以可溶性形式高水平表达,所表达的重组蛋白能与识别MSP1-19构象表位的单克隆抗体mAb5.9、PfCP2.9兔血清及恶性疟患者血清发生免疫反应.结论 合成的msp1-42基因能在大肠杆菌表达系统中以可溶性的形式表达,所表达的重组蛋白MSP1-42具有抗原性.     

化妆品中牛羊成分检测研究

[目的]为防范疯牛病和羊瘙痒病通过化妆品在我国的传播，对进口及国产化妆品中的牛羊成分进行了检测。[方法]应用PCR方法扩增市售国产和进口化妆品中的牛、羊特异性基因片段。[结果]7份国产化妆品均未检出牛羊源性成分，而13份进口化妆品，检出牛源成分3份，未检出羊源成分。[结论]市售国产化妆品未检出牛羊源成分，而市售进口化妆品含有可能导致疯牛病的牛源成分。     

霍乱毒素B亚单位-胰岛素原融合蛋白抗糖尿病

目的　观察雌性非肥胖糖尿病(NOD)小鼠口服胰岛素和霍乱毒素B亚单位 胰岛素原融合蛋白(CTB proinsulin) +霍乱毒素B亚单位五聚体(CTB五聚体)对糖尿病发生的影响,为社区非肥胖性糖尿病干预提供参考依据。方法　4 0只雌性3～4周龄NOD小鼠随机分为4组:分别给予磷酸缓冲液(PBS) 5 0 0 μl,胰岛素(insulin) 1mg ,CTB - proinsulin 10 0 μg +CTG五聚体1μg ,CTB - proinsulin 30 0 μg +CTG五聚体3μg。每周灌胃2次至12周龄;从12周龄起,动态监测小鼠尿糖、血糖至2 6周龄,观察糖尿病的发生,比较不同抗原诱导免疫耐受的作用。结果　与PBS组比较,CTB proinsulin +CTG五聚体与胰岛素均能延缓、减少NOD小鼠糖尿病的发生,2 6周龄时小鼠糖尿病的累积发病率:PBS组10 0 % ,CTB proinsulin 10 0 μg +CTG五聚体1μg组、CTG proinsulin 30 0 μg +CTG五聚体3μg组和胰岛素组分别为4 0 % ,4 0 %和5 0 % (P <0 .0 10 )。各组生存时间分布有差别。结论　不同剂量组的CTB proinsulin +CTG五聚体与胰岛素能够提高NOD鼠生存率,并可达到与胰岛素相同保护作用而所需抗原剂量较小。     

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1C末端基因导入烟草叶绿体的研究

目的 将恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1 C末端msp1-42基因（3D7株）导入烟草叶绿体基因组中并进行同质化筛选,为利用叶绿体表达系统生产MSP1-42蛋白提供基础材料。 方法　 利用烟草偏爱密码子设计克隆恶性疟原虫（3D7株）msp1-42基因的引物,从含msp1-42基因的pBluntmsp质粒中扩增出msp1-42,构建烟草叶绿体表达载体LRrrmsp。通过基因枪转化法转化烟草叶片,在500 mg/L壮观霉素的选择压力下筛选抗性植株,采用PCR鉴定抗性植株的msp1-42基因及aadA基因,对鉴定阳性植株进行同质化筛选（叶片切碎、在含500 mg/L壮观霉素分化培养基上分化出新的植株）3轮以上,并采用多重PCR分析其同质化情况。 结果　 构建了恶性疟原虫msp1-42基因的叶绿体表达载体LRrrmsp。基因枪转化后获得6个转化子,转化频率为0.6个/枪。转化3～5 d后,小块叶片开始增大增厚,并逐渐由绿色变为黄绿色,7～10 d后黄化或白化,再经约30 d的筛选培养,叶片上出现绿色小芽。PCR检测抗性植株的msp1-42及aadA基因,分别扩增出约900 bp与500 bp的条带,与预期相符。多重PCR分析从经过3轮同质化筛选植株的叶绿体基因中扩增出与未转基因烟草对照大小一致的弱条带,表明经过3轮同质化筛选的转基因植株仍含有未插入外源基因的叶绿体基因组。 结论 获得含恶性疟原虫msp1-42的烟草叶绿体表达载体,并将恶性疟原虫msp1-42基因导入烟草叶绿体基因组中,获得尚未完全同质化的转基因烟草。