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【摘要】 目的:建立结核杆菌侵染破骨细胞(osteoclasts,OC)模型,探讨结核杆菌侵染OC后对骨质破坏相关因子表达的影响。方法:采集健康志愿者的外周全血,分离出外周全血中的单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),利用核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)以及巨噬细胞集落刺激因子(macrophage-colony stimulating factor,M-CSF)诱导使其成为OC,对细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色。将已经构建好的具有卡那霉素(Kana)抗性的H37Rv pMV261-GFP绿色荧光结核菌株进行复苏并加入10%的油酸、白蛋白、葡萄糖和过氧化氢酶添加剂(oleic albumin dextrose catalase,OADC)、7H9以及含卡那霉素的结核杆菌专用液体培养基进行培养,放置于37℃的恒温箱中培养至光密度(optical density,OD)值为600nm时的0.5左右备用;以单纯OC培养为空白对照组;用结核杆菌以不同转染复数(multiplicity of infection,MOI)侵染OC 24h,采用MTT比色法检测细胞存活率最高的MOI为后续实验MOI,使用H37Rv以此MOI侵染OC为实验组;荧光显微镜及结核杆菌抗酸染色分别观测实验MOI时结核杆菌转染情况。实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测非受体酪氨酸激酶(C-src)、蛋白激酶K(cathepsin K,CK)、碳酸酐酶2(carbonic anhydrase 2,CA2)、整合素-β3(integrin-β3)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达情况;免疫组化(immunohistochemistry)检测磷酸化酪氨酸激酶产物(P-src)、CK、CA2、Integrin-β3、MMP-9的细胞表面蛋白表达情况;蛋白免疫印迹(western blot,WB)检测P-src、CK、CA2、Integrin-β3、MMP-9的蛋白表达水平。结果:TRAP染色显示细胞培养15d后90%以上为OC,可以用于进行实验。荧光结核杆菌成功将其OD值培养为600nm时的0.5。MTT比色法结果显示:在MOI为20∶1时细胞存活率最高(P<0.05),此为实验组MOI;结核杆菌侵染OC后荧光显微镜显示:MOI为20∶1时,绿色荧光标记的结核杆菌进入OC,说明成功转染OC;结核杆菌侵染OC后抗酸染色结果显示:MOI为20∶1时,被染成红色的抗酸结核杆菌进入OC,说明结核杆菌H37Rv成功转染OC。qRT-PCR、细胞免疫组化、WB检测结果均显示:MMP-9、CK、C-src、CA2、Integrin-β3的表达实验组均高于空白对照组(P<0.05)。结论:结核分枝杆菌能够转染OC;与空白对照组相比,结核杆菌转染OC的实验组中5种具有骨质破坏作用因子均升高,提示结核骨质破坏可能与此相关,为骨结核疾病诊疗提供新的探索方向。 相似文献
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目的 探讨预防新生儿高胆红素血症的新方法.方法 选择我院2009年1月至12月两个产科专业组出生的正常足月新生儿1 091例,其中产科1组521例;产科2组570例,产科1组中符合标准126例为观察组;产科2组141例为对照组,观察组采用腹部按摩排便联合妈咪爱口服,监测两组高胆红素血症发生情况及每日经皮胆红素水平并比较.结果 两组间24小时后各观察时间点经皮胆红素测定值、高胆红素血症发生率均有显著性差异(P<0.01).结论 腹部按摩排便与妈咪爱联用预防新生儿高胆红素血症安全、有效. 相似文献
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<正>根据我校护理学本科专业(包含护理学本科英语方向专业)的性质及培养目标,本科毕业生需具有较扎实英语语言功底和运用英语进行专业知识交际的能力。按照这一要求,我校护理学本科专业的教学着重于基础英语教学和临床护理教学两方面,由于这类课程本身内容繁多,需要教师利用较多课时 相似文献
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目的探讨重组人表皮生长因子凝胶(rh EGF)治疗下肢静脉溃疡的疗效。方法将26例下肢静脉溃疡患者随机分为2组,观察组13例、对照组13例。观察组创面清创后,用重组人表皮生长因子凝胶(rh EGF)换药。对照组创面清创后,用0.9%氯化钠湿敷换药,比较2组的疗效。结果观察组有效率92.3%高于对照组53.83%(P0.05)。结论应用重组人表皮生长因子凝胶(rh EGF)治疗下肢静脉溃疡效果良好,值得在临床推广使用。 相似文献
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目的探讨10%高渗盐水和20%甘露醇对颅脑损伤后血脑屏障的短期影响。方法将我院收治的颅脑损伤患者100例按1∶1配对,随机分为高渗盐水组和甘露醇组,于伤后6h分别快速静脉推注10%高渗盐水(30mL)和静滴20%甘露醇(0.5g/kg)。测定用药前及用药后2h、6h血清S100B浓度,比较2组病例血清S100B的变化。结果用药后2h、6h2组血清S100B均有上升,但高渗盐水组两个时点的上升幅度均较甘露醇组小(2h:t=-9.393,P=0.000;6h:t=-15.176,P=0.000)。结论短期内,10%高渗盐水有助于减轻伤后血脑屏障的继发性损伤。 相似文献
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常龙 《中国继续医学教育》2015,(7):57-58
目的探讨正畸牵引治疗不同年龄上颌埋伏阻生尖牙的临床治疗效果。方法选取我院收治的颌埋伏阻生尖牙患者60例,将所有患者按年龄阶段情况分为两组,比较两组患者治疗的总有效率情况。结果在治疗总有效率方面,对照组患者具有显著的优势。结论正畸牵引治疗不同年龄上颌埋伏阻生尖牙治疗效果并不相同,青年患者的效果更好。 相似文献
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目的比较Wiltse入路与传统后正中入路行胸腰椎骨折内固定取出术的疗效。方法将52例胸腰椎骨折术后需行内固定取出的患者按数字随机表法分为2组,分别采用Wiltse入路与传统后正中入路进行手术治疗,比较2组手术时间、术中出血量、术后引流量、术后疼痛视觉模拟评分(VAS评分)的差异。结果2组患者均顺利取出内植物,无椎弓根螺钉断裂发生。Wiltse入路组患者手术时间(35.80±2.833)min、术中出血量(17.20±1.568)mL、术后引流量(20.33±1.988)mL及术后VAS评分(1.90±0.738)分,均明显低于传统后正中人路组的(55.33±2.769)min、(45.40±2.473)mL、(50.20±4.799)mL、(3.00±0.667)分(P〈0.05),Wiltse人路组疗效优于传统后正中入路组。结论Wihse人路行胸腰椎骨折内固定取出术,在手术时间、术中出血量、术后引流量及术后VAS评分方面均明显优于传统后正中入路,手术创伤小、出血少、疼痛轻、恢复快,可作为胸腰椎骨折内固定取出的良好人路选择。 相似文献
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目的 探讨新生儿低血糖性脑损伤的危险因素及预后.方法 选择我院2008年6月至2011年6月的新生儿低血糖有脑损伤的病例20例作为病例组,并随机选择同期住院的新生儿低血糖无脑损伤的病例25例作为对照组.对两组患儿的临床资料进行回顾性分析.结果 两组患儿平均胎龄、出生平均体质量及首次诊断低血糖时间无显著性差异(P>0.05);病例组平均最低血糖值低于对照组(P<0.01),低血糖持续时间长于对照组(P<0.01).病例组19例患儿进行6 ~18个月随访,发生低血糖脑损伤神经系统后遗症12例(63.16%),对照组无神经系统后遗症.结论 新生儿血糖值越低,脑损伤越重;低血糖持续时间越久,脑损伤越重;低血糖脑损伤预后差,神经系统后遗症发生率高. 相似文献