多种化疗药物对胃癌细胞杀伤效应的研究

目的：探讨不同分化的胃癌细胞对不同化疗药物的敏感性。 方法：选择低分化的MGC-803和高分化的AGS两种胃癌细胞系,以及正常胃黏膜上皮细胞GES-1,分别加入不同浓度的5-氟尿嘧啶（5-FU）、奥沙利铂（L-OHP）、多西他赛（DXT）、顺铂（DDP）、伊立替康（CPT-11）作用48 h后,用MTT法检测药物对细胞的抑制作用,并计算药物半数抑制浓度（IC50）。用IC50的5-FU、DDP、L-OHP作用于MGC-803和AGS细胞48 h后,检测细胞凋亡及细胞周期分布情况。 结果：5种化疗药物对MGC-803、AGS细胞以及GES-1细胞均有明显的抑制作用（均P<0.05）,其中5-FU、DDP、CPT-11对AGS细胞的作用较强;L-OHP、DXT对MGC-803细胞作用较强;DDP对GES-1细胞的抑制作用较强。5-FU、DDP、L-OHP均明显诱导两种胃癌细胞凋亡,其中5-FU组与L-OHP组凋亡率高于DDP组（均P<0.05）;细胞周期分析显示,L-OHP增加两种细胞的S期阻滞,DDP增加MGC-803细胞的S期阻滞,5-FU与DDP增加AGS细胞的G1阻滞（均P<0.05）,但5-FU对MGC-803细胞周期无明显影响（P>0.05）。 结论：化疗药物对胃癌细胞的抑制作用与其病理类型有关,且对胃癌细胞凋亡的诱导和细胞周期阻滞作用均不同。     

黑色素瘤中癌基因B-RafV600E对B-Raf/ERK/Mps1负反馈抵抗作用的机制

目的 明确癌基因B-Raf^V600E在Mps1和B-Raf^WT/MEK/ERK通路之间自动调节的负反馈回路中抵抗作用的具体机制。方法 （1）Sbcl2转染B-RafWT和Mps1-KD,Western blot方法检测p-ERK水平;（2）向B-Raf野生型SK-MEL31、Sbcl2、WM35细胞及V600E突变型SK-MEL28、A375细胞中过表达Mps1,Western blot方法检测p-ERK水平;（3）在SK-MEL31、Sbcl2、WM35细胞中敲低AKT,转染Mps1,Western blot方法检测p-ERK水平;（4）在SK-MEL31、Sbcl2、WM35细胞中敲低内源性B-Raf,过表达外源性Raf^V600E,Western blot方法检测p-AKT水平;敲低SK-MEL-28、A375细胞中Raf^V600E,Western blot方法检测p-AKT水平。结果 （1）Mps1激酶和B-Raf^WT/MEK/ERK通路之间的自动负反馈通路不依赖Mps1激酶的活性;（2）在野生型SK-MEL31、Sbcl2、WM35细胞中外源性Mps1的表达可诱导AKT磷酸化,抑制ERK活性;V600E突变型SK-MEL28、A375细胞中外源性Mps1的表达不能诱导AKT磷酸化,亦不影响ERK活性。（3）敲低野生型黑色素瘤细胞中的AKT后,Mps1和B-Raf^WT/MEK/ERK之间的负反馈作用消失。（4）癌基因B-Raf^V600E通过抑制AKT的磷酸化,进而抵抗Mps1激酶与B-Raf/MEK/ERK通路之间的负反馈调节作用。结论 Mps1和B-Raf^WT/MEK/ERK通路之间的自动负反馈通路不依赖Mps1激酶的活性,且癌基因B-Raf^V600E对B-Raf/MEK/ERK/Mps1负反馈通路的抵抗作用是通过抑制AKT的磷酸化实现的。     

癌基因B-RafV600E导致黑色素瘤Sbcl2和SK-MEL31细胞染色体不稳定性的分子机制研究

目的 研究癌基因B-RafV600E导致肿瘤细胞染色体不稳定的分子机制.方法 采用RNA干扰技术敲除稳定表达B-RafV600E基因的黑色素瘤Sbcl2和SK-MEL31细胞中内源性单核纺锤体蛋白激酶(Mps1)基因表达,免疫荧光染色技术检测中心体及纺锤体结构.HU-arrest分析法观察Mps1基因缺失对癌基因B-RafV600E致肿瘤细胞中心体过度复制及多极纺锤体形成的影响.结果 未敲除内源性Mps1基因的表达B-RafV600E基因的Sbcl2和SK-MEL31细胞中36％出现中心体过度复制及多极纺锤体,Mps1基因被敲除后上述异常细胞比例降低至6％.结论 B-RafV600E可能通过Mps1调控中心体过度复制及多极纺锤体结构的形成,影响肿瘤细胞染色体不稳定性及非整倍体细胞的出现.     

青蒿琥酯通过影响Skp2和CDKN1A基因的表达抑制乳腺癌细胞北大核心CSCD

目的阐明青蒿琥酯(artesunate,ART)在乳腺癌发展过程中所发挥的功能及可能的作用机制。方法设置用不同浓度ART处理MCF-7、MDA-MB-231为实验组,0μmol·L^(-1)ART处理细胞为对照组。通过MTT、平板单克隆实验测定ART对乳腺癌细胞生长能力的影响;Transwell实验探究ART对乳腺癌细胞侵袭以及迁移能力的影响;采用流式细胞术检测ART对乳腺癌细胞周期及其凋亡的影响;通过转录组测序分析及RT-qPCR实验方法检测并验证ART在乳腺癌细胞中可能的作用机制。结果经ART处理后的两种乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231其增殖、迁移以及侵袭能力与对照组相比均明显下降,ART作用后的乳腺癌细胞其G 0-G 1期细胞比例明显增加,并且乳腺癌细胞凋亡率明显上升。转录组测序结果提示,ART可能通过下调S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein 2,Skp2)基因的表达、上调周期蛋白抑制因子1A(cyclin dependent kinase inhibitor 1A,CDKN1A)基因的表达调控乳腺癌细胞的周期以达到抑制乳腺癌细胞发生发展的目的。结论ART可通过影响Skp2基因、CDKN1A基因的表达抑制乳腺癌细胞的发展。     

Artesunate inhibits development of esophageal squamous cell carcinoma via regulating expression of Skp2 and P21北大核心CSCD

Aim To clarify the regulatory effect of Artesunate(ART) on tumor cell function and cell cycle in the pathological process of esophageal squamous cell carcinoma(ESCC). Methods KYSE450 and TE14 cells were treated with different concentrations of ART. The cells treated with 0 mg •L-1 ART were used as the control group, and the cells treated with 30 mg•L -1ART were used as the experimental group. MTT assay and cloning formation experiment were used to sense cell growth. Transwell assay was applied to test the invasion and migration capacity of ART treated group and blank group separately,flow cytometry was employed to examine c ell cycle. The Mechanism of Artesunate on Escc by RNA-Seq was detected. Differential Genes We value USIDANG RT-QPCR. Results Compared with the Control Group, The P Roliferation, Invasion and Migration of Escc Cells Were SUPPRSSED CONSIDERABLY AFTER Art Treatment (P <0.01). According to the analysis of sequencing results, ART might inhibit the occurrence and development of tumor by affecting the cell cycle. After ART treatment, the ratio of KYSE450 cells at G1 phase boosted 18.02%. The proportion of KYSE450 cells in G1 phase increased significantly in the back of adding ART(24.12%±2.62% vs 42.14%±0.65%, P<0.01), and the percentage of TE14 cells at G 1phase also increased significantly after ART therapy(36.25%±0.21% vs 42.19%±0.38%, P<0.01). Skp2, a gene closely related to cell cycle regulation, decreased and its downstream target gene P21 increased. Conclusions ART, a Chinese patent medicine, can inhibit the proliferation, invasion and migration of ESCC cells, accelerate apoptosis and cause cell arrest through regulating the expression of Skp2 and P21. This study takes the re-application of Chinese patent medicine which is used against malaria originall y as the innovation point to provide a reference basis for the development of new safety, effective and economical targeted drugs for ESCC. It also provides scientific ideas for the development of a new treatment scheme of radiotherapy combined with ESCC. © 2023 Publication Centre of Anhui Medical University. All rights reserved.